ΔNp63蛋白在膀胱移行上皮癌中的表达及其临床意义

目的 :探讨 p5 3基因家族新成员截短型p6 3(△Np6 3)在膀胱癌组织中的表达及其意义。 方法 :采用免疫组织化学SP法检测 4 0例膀胱移行上皮癌 (TCC)、6例膀胱内翻性乳头状瘤和 8例正常膀胱移行上皮中△Np6 3的表达 ,并分析△Np6 3表达与膀胱癌病理类型、临床分期的关系。 结果 :正常膀胱移行上皮、膀胱内翻性乳头状瘤、TCC中△Np6 3的阳性表达率分别为 37.5 % (3/ 8)、6 6 .7% (4/ 6 )、10 0 % (40 / 4 0 ) ,组间差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。TCCG3 级与G2 级△Np6 3的强阳性、中度阳性表达率显著高于G1级 (P <0 .0 1)。Ta～T1期以△Np6 3弱阳性为主 (6 6 .7% ) ,随TCC浸润程度的增加 ,△Np6 3染色强度逐渐增强。T2 期△Np6 3强阳性表达率为 35 .3% ,T3 ～T4期增至 6 3.6 %。结论 :△Np6 3在TCC中高表达 ,与TCC病理分级、临床分期密切相关 ;△Np6 3可能参与TCC的发生、发展 ,是评估TCC预后的潜在因素之一。     

稳定高表达Uroplakin Ⅱ基因人膀胱癌细胞株的建立及其意义

目的　建立稳定高表达UroplakinII(UPII)基因的人膀胱癌细胞株。方法　采用分子克隆技术构建含全长UPII结构基因的真核表达载体 ,进行酶切鉴定、核酸序列分析 ,并将其在阳离子脂质体Lipofectamine 2 0 0 0的介导下转染UPII基因缺陷型膀胱移行细胞癌 (TCC)细胞株EJ ,经G418筛选获得抗性亚克隆细胞株 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、Westernblotting方法对亚克隆细胞株进行UPII基因表达鉴定。结果　所获UPII基因真核表达载体pcDNA3 UPII转染EJ细胞后 ,通过G418持续压力筛选 4周获得亚克隆细胞株EJ/UPII ;RT PCR、Westernblotting均未检测到EJ细胞的UPII基因表达 ,而EJ/UPII细胞中UPIImRNA和蛋白表达水平显著增高 (P <0 .0 1)。结论　通过基因转染方法建立了稳定高表达UPII基因的膀胱TCC细胞株 ,为进一步探讨UPII基因在膀胱TCC生物学行为中的作用及其靶向生物治疗策略奠定了基础。     

姜黄素诱导卵巢癌细胞株A2780细胞周期阻滞和凋亡

目的 探讨姜黄素对卵巢癌细胞株A2780的生长抑制作用及其机制。方法 10一50μmol/L姜黄素作用6—24h后，MTT比色法检测细胞生长活性，流式细胞仪测定细胞周期时相变化，末端TdT酶标记技术和DNA Ladder检测细胞凋亡；透射电镜观察细胞超微结构变化。结果 姜黄素能显著抑制卵巢癌细胞株A2780的体外生长，呈时间与剂量依赖性；细胞周期阻滞于G0／Gl期；部分细胞出现凋亡形态学改变，凝胶电泳可见“梯形”条带，凋亡率为6．41％一28．48％(P＜o．01)。结论 姜黄素通过抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡等机制，能显著地抑制卵巢癌细胞的体外生长。     

Effect of Smac on TRAIL-induced apoptosis of prostate cancer cell line PC-3 and the molecular mechanism

The effect of Smac gene on the TRAIL-induced apoptosis of the prostate cancer cell line PC-3 and the molecular mechanism were investigated. The Smac gene was transfected into PC-3 cells under the induction of liposome. The intrinsic Smac gene expression was detected by Western blotting. After treatment with TRAIL as an apoptosis inducer, in vitro cell growth activity was as-sayed by MTT colorimetry. The apoptosis rate of PC-3 cells was determined by annexin Ⅴ-FITC and propidium iodide staining flow cytometry. The expression of cellular XIAP and caspase-3 genes was examined by Western blotting. Smac-transfected cells (PC-3/Smac group) had significantly in-creased Smac protein level as compared with PC-3 controls (P<0.01). After induction with 100-200 ng/mL TRAIL for 12-36 h, cellular proliferation rate in PC-3/Smac group was significantly lower than in PC-3 controls (P<0.05). After induction with 100 ng/mL TRAIL for 24 h, the apoptosis rate in PC-3/Smac group was significantly enhanced as compared with that of PC-3 controls (P<0.05). Ac-cordingly, the XIAP expression level was down-regulated significantly (P<0.05) and caspase-3 sub-unit P20 was up-regulated significantly (P<0.05). It is suggested that the over-expression of cellular Smac can inhibit inhibitor of apoptosis proteins (IAPs), enhance caspases activity and the apoptosis rate of PC-3 cells induced by TRAIL, which may provide a useful experimental basis for prostate cancer therapy.     

膀胱癌组织中X-染色体连接的凋亡抑制蛋白表达及其对化疗敏感性的影响

目的探讨X-染色体连接的凋亡抑制蛋白(XIAP)在膀胱癌组织中的表达及其对化疗敏感性的影响。方法采用免疫组织化学方法检测6例正常膀胱黏膜上皮组织、47例膀胱移行细胞癌组织中XIAP的表达。脂质体方法介导XIAP基因转染膀胱癌T24细胞,通过G418进行稳定筛选。逆转录聚合酶链反应检测转染前后T24细胞内XIAP的表达。分别采用0．005 mg/ml、0．05 mg/ml低剂量丝裂霉素诱导凋亡启动,MTT比色分析检测癌细胞生长活性,3’末端脱氧核苷酰转移酶介导生物素标记法检测细胞凋亡率。结果膀胱癌组织中XIAP呈中度阳性表达,阳性率78．7%,其阳性率与肿瘤分级和分期无关(P＞0．05)。转染XIAP后T24细胞高表达XIAP,与未转染XIAP组比较,XIAP mRNA表达增高3．8倍。0．005 mg/ml丝裂霉素作用下转染组细胞生存率较对照组上升(11．60±0．25)%、凋亡率下降(10．1±0．2)%(P＜0．05)。0．05 mg/ml丝裂霉素作用下转染组细胞生存率较对照组上升(16．51±0．87)%、凋亡率下降(11．9±0．2)%(P＜0．05)。结论XIAP在人类膀胱癌中呈中高度表达,XIAP表达升高可明显降低化疗药物诱导的膀胱癌细胞凋亡,提示其可能影响化疗的敏感性。     

缺氧诱导丝裂原因子在先天性膈疝胎鼠肺中的表达

目的研究缺氧诱导丝裂原因子（hypoxia—inducedmitogenicfactor，HIMF）在先天性膈疝（congenitaldiaphragmatichernia，CDH）胎鼠肺组织中的表达，探讨其在CDH肺发育不良中的作用。方法实验组10只BABL／C小鼠妊娠8d时经胃管注入25mg除草醚，正常对照组给予食用油，妊娠21d行剖腹产，解剖胎鼠两侧肺组织，采用免疫组化、Westernblot方法检测HIMF表达。结果实验组CDH致畸率56．5％，肺发育不良，处于假腺体期和原始肺小管期，HIMF蛋白显著表达下调（P〈0．05）；实验组内产生CDH者胎肺内HIMF表达水平与无CDH者比较差异无显著性意义（P〉0．05）；CDH膈疝侧与非膈疝侧肺组织HIMF表达差异无显著性意义（P〉0．05）。结论在CDH肺发育不良组织中HIMF蛋白表达显著下调，且早于膈疝形成，可能参与CDH肺发育不良的发病机制。     

乳腺癌中激素受体和雌激素调节蛋白PS2的表达及其与预后的关系

目的　探讨乳腺癌中雌激素受体 (ER)、孕激素受体 (PR) 和雌激素调节蛋白 (PS2) 的表达及其与预后的关系。方法　应用免疫组织化学链霉亲和素 生物素过氧化物酶连接法 (SABC法) 检测 ER、PR和 PS2 在 76 例随访5~9年的乳腺浸润性癌中的表达。结果　ER、PR和 PS2 三者的表达两两之间呈明显正相关 (P<0 .01), 与患者的年龄关系密切 (P<0. 01), 而与肿瘤大小、腋窝淋巴结有无转移、组织学分类以及分级无明显相关。在预后方面,PR和PS2的表达与患者的无瘤生存、复发及死亡状况密切相关 (均P<0 .05)。结论　PR和PS2能够反映雌激素调节系统的功能和完整性, 作为评估预后的指标优于ER。同时进行 ER、PR和 PS2 的三联检测, 可以得到 3 个指标的累积效果, 以弥补单一ER检测或ER、PR检测的不足。     

靶向人肝素酶短发卡状RNA表达载体的构建及其沉默作用

目的 构建靶向人肝素酶(HPSE)的短发卡状RNA(shRNA)表达载体,探讨其基因沉默作用.方法 根据人肝素酶mRNA序列设计shRNA,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pGenesil-1载体,转化扩增后进行测序鉴定;重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine 2000的介导下,瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901、人前列腺癌细胞株PC-3、人膀胱癌细胞株EJ,每种细胞分别设空白对照组、空载体pGenesil-Negative转染组、pGenesil-HPSE shRNA转染组3组,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测各种细胞中肝素酶基因表达水平,黏附实验和transwell小室实验检测癌细胞游走、侵袭能力.结果 所构建的shRNA载体插入基因片段与设计序列完全匹配,载体构建成功;重组质粒转染SGC-7901、PC-3、EJ细胞后,肝素酶mRNA表达分别下调78.6%(P<0.01)、82.6%(P<0.01)、81.9%(P<0.01),肝素酶蛋白表达分别下调76.4%(P<0.01)、85.9%(P<0.01)、83.3%(P<0.01),细胞黏附能力分别下降37.7%(P<0.01)、44.6%(P<0.01)、43.8%(P<0.01),细胞侵袭能力分别下降66.8%(P<0.01)、76.6%(P<0.01)、80.5%(P<0.01).结论 成功构建了靶向人肝素酶的shRNA表达载体,沉默肝素酶基因表达后,能抑制多种癌细胞的游走和侵袭能力.     

肠凝集素1生物学功能的研究进展

肠凝集素1(intelectin 1,ITLN1)是1998年Komiya等^[1]运用原位杂交筛选法从小鼠肠帕内特细胞 (肠腺嗜酸性粒细胞) 中分离的一种新基因。2003年,Yang等^[2]在进行人类网膜脂肪cDNA文库的表达序列标签测序时,发现了一种腹腔网膜脂肪组织特异性分泌的蛋白因子,命名为网膜素(omentin)。后续研究发现人类ITLN1与网膜素的编码基因和氨基酸序列相同,于是美国国立生物技术信息中心统一命名为ITLN1。鉴于ITLN1在内分泌疾病、心血管疾病、炎症、肿瘤等诸多方面中的作用,引起了学界广泛的关注。本文从ITLN1的基因和蛋白结构、分布、生物学功能等方面进行综述。     

反义PCNA联合wt-p53基因转染抑制膀胱癌细胞生长的实验研究

我们通过共转染方法观察了反义增殖细胞核抗原 (PCNA)联合野生型 p5 3(wt p5 3)基因对膀胱癌EJ细胞体外生长活性的抑制作用及其分子机制 ,现报告如下。材料与方法　PCNA反义表达载体pLAPSN和 pcDNA wt p5 3由本室常规保存。设置正常对照组、反义PCNA转染组、wt p5 3转染组、反义PCNA +wt p5 3转染组。参照脂质体lipofectamine 2 0 0 2说明书进行基因转染。细胞生长活性检测采用细胞计数法[1] 。DNA合成速率检测采用3 H TdR掺入法[1] 。细胞周期时相分析 :参照文献 [1]进行。基因表达检测采用RT PCR法[2 ] 。细胞凋亡检测采用…