小干扰RNA对喉鳞状细胞癌裸鼠移植瘤增殖细胞核抗原及p53蛋白表达的影响

目的：应用小干扰RNA（siRNA）技术抑制裸鼠喉癌皮下移植瘤人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因表达，探讨移植瘤中增殖细胞核抗原（PCNA）及p53蛋白表达的变化。方法：根据hTERT cDNA序列构建表达短发夹RNA（shRNA）的、靶向hTERT mRNA的真核表达质粒pshRNA，其载体质粒含荧光素报告基因。建立人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株裸鼠皮下接种模型，将pshRNA转染入荷瘤裸鼠瘤体内，观察肿瘤生长情况。以激光共聚焦显微镜观察质粒在瘤体内的表达；以免疫组织化学SP法检测PCNA及p53蛋白在肿瘤内的表达。结果：所有裸鼠均接种成功，5d后可见皮下肿瘤形成，14d左右肿瘤直径达5～7mm。pshRNA及空质粒载体转染入瘤体后，共聚焦显微镜下见癌组织中有绿色荧光表达。病理学检查发现：pshRNA组肿瘤生长受到抑制，细胞分裂少见，可见大量癌细胞坏死。与注射生理盐水的对照组比较，转染质粒完毕后7d抑瘤率为76．50％，P〈0．01。pshRNA治疗后瘤体内PCNA蛋白表达显著下调（P〈0．05），p53蛋白表达显著上调（P〈0．05）。结论：靶向hTERT mRNA的shRNA可显著抑制人喉癌裸鼠移植瘤的生长，其机制可能是诱导PCNA下调，促进p53蛋白表达所致。     

RT-PCR检测鼻咽癌患者外周血细胞以及癌组织细胞中CK18和CK19基因的表达

目的:通过检测CK18和CK19在鼻咽癌患者外周血细胞和癌组织细胞中的表达情况,判断其是否可以作为鼻咽癌的肿瘤标志物辅助诊断鼻咽癌。方法:分别提取45例鼻咽癌患者的外周血样本中的有核细胞和癌组织细胞中的mRNA,逆转为cDNA,设计CK18、CK19和GAPDH引物进行RT-PCR,检测其表达情况。结果:在不同性别、年龄以及转移与否的鼻咽癌患者癌组织细胞中CK18和CK19基因的表达的均差异无统计学意义(P>0.05),而在不同病理分期的鼻咽癌患者癌组织细胞中,CK18和CK19基因表达随着恶性程度的增高而增高,且均差异有统计学意义(P<0.05);在对鼻咽癌患者的外周血中的CK18和CK19基因检出率结果显示,CK18的检出率为64%,CK19的检出率75%,年龄大于60岁的患者检出率高于年龄小于60岁的,随着病理检测其恶性程度的增高,CK18和CK19的检出率也相应增高,鼻咽癌转移的患者血液中CK18和CK19的检出率远高于非转移患者。结论:CK18和CK19是可能有潜力作为鼻咽癌诊断的肿瘤标志物。     

持续气道正压通气对阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者血液流变学及炎性因子变化的研究

目的:探讨持续气道正压通气(CPAP)对阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者血液流变学及炎性因子的影响。方法:选择武汉大学中南医院和潜江市中心医院耳鼻咽喉头颈外科收治的87例中重度OSAHS患者纳为治疗组,37例健康者纳为对照组。检测对照组和CPAP治疗前后治疗组血液流变学中的血细胞比容(HCT)、全血粘度、血小板聚集率(PAG)、内皮素(ET)以及炎性因子中的白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素18(IL-18)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的变化。结果:治疗组治疗前HCT、全血黏度(高切、中切和低切)、PAG、ET水平以及IL-6、IL-18、TNF-α水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);治疗组经CPAP治疗后、全血黏度(高切、中切和低切)、PAG、ET水平以及IL-6、IL-18、TNF-α水平较治疗前均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:CPAP治疗能有效地改善OSAHS患者血液流变学,降低炎症反应,具有良好的治疗效果。     

口炎清颗粒联合布地奈德治疗慢性咽炎的疗效观察

目的探讨口炎清颗粒联合布地奈德气雾剂治疗慢性咽炎的临床疗效。方法选取2016年2月—2017年9月武汉大学中南医院收治的79例慢性咽炎患者为研究对象,所有患者按照数字表法随机分为对照组(39例)和治疗组(40例)。对照组吸入布地奈德气雾剂,0.5 mg/次,3次/d。治疗组对照组治疗的基础上口服口炎清颗粒,6 g/次,2次/d。两组患者均持续治疗3周。观察两组临床疗效,同时比较两组的临床症状改善时间和不良反应发生情况。结果治疗后,对照组和治疗组的总有效率分别为84.6%、92.5%,两组治疗比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,治疗组咽喉肿痛、咳嗽咳痰、咽部异物感、分泌物改善时间明显短于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗期间,对照组不良反应发生率为28.2%,明显高于治疗组的10.0%,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论口炎清颗粒联合布地奈德气雾剂治疗慢性咽炎疗效确切,能够有效改善患者临床症状,且无严重不良反应,值得临床推广运用。     

喉鳞状细胞癌中p73,p51基因的表达及临床意义

【目的】研究喉鳞癌组织中p73,p5 1基因的表达情况及其临床意义。【方法】应用反转录聚合酶链反应技术 (RT PCR)检测 4 3例喉鳞癌组织 ,17例喉鳞癌旁组织及 2 4例声带息肉组织标本中 p73和p5 1A ,p5 1BmRNA的表达情况。【结果】4 3例喉鳞癌组织中 2 6例p73mRNA表达阳性 ,17例对应喉癌旁组织中 4例 p73mRNA表达阳性 ,2 4例声带息肉组织标本中 8例 p73mRNA表达阳性。喉鳞癌组织中p73mRNA的表达与喉癌旁组织、声带息肉组织相比 ,其差异具有显著性 (P <0 .0 5 )。喉鳞癌组织中 p73mRNA的表达与TNM分期及复发存在密切关系 ,Ⅲ～Ⅳ期及复发组患者中 p73mRNA的表达较Ⅰ～Ⅱ期及初发组患者的表达强 (P <0 .0 5 )。p5 1A ,p5 1BmRNA在所检测的标本中均有表达。其中 ,p5 1A、p5 1BmRNA在喉癌组织中的表达较癌旁组织及声带息肉组织中的表达强 (P <0 .0 5 )。喉鳞癌组织中 ,p5 1AmRNA的表达较 p5 1BmRNA的表达强 (P <0 .0 5 )。p5 1A ,p5 1BmRNA的表达与所有的临床病理参数均无关。【结论】喉鳞癌组织中存在 p73,p5 1基因的过度表达现象 ,p73,p5 1基因的异常表达与喉鳞癌的发生发展存在一定的关系。p5 1基因可作为鳞状上皮源性肿瘤的重要标记物。     

喉真菌病三例

喉真菌病少见，以前仅有散发报告，而近几年其发病率似有上升趋势，为进一步提高对该病的认识，探讨对该病的诊断及治疗，现对我科1998年至2002年收治喉真菌病的临床资料作一分析，并对参阅资料作回顾性分析。     

尼美舒利用于鼻咽手术后镇痛的疗效观察

目的探讨尼美舒利用于鼻咽术后镇痛的疗效和安全性。方法鼻咽术后疼痛患者100例，分为治疗组和对照组各50例，治疗组给予尼美舒利分散片100 mg，q12h,po；对照组给予双氯芬酸钠栓50 mg，经直肠给药，q12h。术后15 ，30 min，2 ，6 ，12 ，24 ，48 h采用视觉模拟（VAS）评分法评定伤口疼痛程度。结果治疗组镇痛优良率高于对照组，尤以用药15 ，30 min，2 h较为明显（P＜0.01）。结论尼美舒利分散片用于鼻咽手术镇痛，使用方便，起效快，作用强，不良反应少。     

RNA干扰IGF-1受体和EGF受体表达对鼻咽癌裸鼠移植瘤细胞周期的影响

目的探讨RNA干扰IGF-1受体和EGF受体表达对鼻咽癌裸鼠移植瘤的增殖状态和鼻咽癌CNE2细胞的细胞周期趋势的影响及其作用机制。方法应用免疫组织化学S-P方法和形态计量技术对鼻咽癌裸鼠移植瘤（实验组和对照组）组织切片进行PCNA染色、HE染色以及流式细胞仪检测鼻咽癌CNE2细胞（实验组和对照组）在细胞各期的细胞比例和增殖指数。结果实验组鼻咽癌皮下移植瘤PCNA标记指数为27．19±10．20,核分裂像计数为18．80±7．47;质粒对照组和正常对照组鼻咽癌皮下移植瘤PCNA标记指数别为36．47±9．03和37．07±8．63,核分裂像计数分别为37．53±5．25和38．03±6．15,同一组的两指标显著正相关（P〈0．01）。实验组鼻咽癌CNE2细胞处于G0／G1期、S期和G2／M期的细胞比例分别为63．80±0．64、33．29±0．21和2．91±0．04,而两对照组鼻咽癌CNE2细胞处于G0／G1期、S期和G2／M期的细胞比例分别为47．91±0．65（44．64±0．28）、42．71±0．11（45．70±0．15）和9．38±0．14（9．65±0．01）。实验组鼻咽癌CNE2细胞的增殖指数为36．2±0．65,而两对照组鼻咽癌CNE2细胞分别为52．09±0．08和55．35±0．08。结论EGFR和IGF-1R基因治疗鼻咽癌机理之一可能是通过改变鼻咽癌CNE2细胞周期趋势和降低移植瘤的增殖水平达到的;PCNA标记指数、核分裂像计数和G2／M期的鼻咽癌细胞比例在一定程度上均可反应鼻咽癌细胞的增殖水平,三者可作为评估鼻咽癌增殖活性的有用指标。     

胰岛素样生长因子-1受体在肿瘤细胞的内化和泛素化分析

我们采用免疫印迹法(Western blot)、免疫沉淀技术(IP)和流式细胞仪(FACS)技术对鼠胚胎成纤维瘤三种细胞株胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)的内化进行检测,探讨IGF-1R的内化在受体下行调节和β-arrestin在IGF-1R蛋白内化/泛素化降解中的作用.     

EGF受体和IGF-1受体在人鼻咽癌组织中的表达及临床意义

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)和胰岛素生长因子-1受体(IGF-1R)在人鼻咽癌(NPC)组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学SP法检测NPC组织及鼻咽非肿瘤组织EGFR和IGF-1R蛋白以及用RT-PCR法检测EGFR和IGF-1R mRNA的表达。结果:EGFR和IGF-1R蛋白在NPC组织的过表达率分别为65.3%(49/75)和56%(42/75),在鼻咽非肿瘤组织中过表达率分别为0%和14.3%(3/21)。鼻咽癌组与对照组相比,EGFR蛋白表达有统计学意义(P<0.01),鼻咽癌组织中EGFR和IGF-1R蛋白的过表达对不同年龄、性别的患者无统计学差异,但与淋巴结转移、远处转移、复发和5年生存率有相关性(P<0.01或P<0.05)。鼻咽癌组与对照组相比,IGF-1R mRNA和EGFR mRNA表达亦有统计学差异(P<0.01或/P<0.05)。EGFR和IGF-1R两者在鼻咽癌中表达呈正相关(r=0.367,P=0.001)。结论:EGFR和IGF-1R mRNA和蛋白过度表达可能与鼻咽癌的复发和转移有关,检测EGFR和IGF-1R mRNA和蛋白过度表达可作为判断鼻咽癌复发和转移的潜在指标之一。