RT-PCR检测鼻咽癌患者外周血细胞以及癌组织细胞中CK18和CK19基因的表达

目的:通过检测CK18和CK19在鼻咽癌患者外周血细胞和癌组织细胞中的表达情况,判断其是否可以作为鼻咽癌的肿瘤标志物辅助诊断鼻咽癌。方法:分别提取45例鼻咽癌患者的外周血样本中的有核细胞和癌组织细胞中的mRNA,逆转为cDNA,设计CK18、CK19和GAPDH引物进行RT-PCR,检测其表达情况。结果:在不同性别、年龄以及转移与否的鼻咽癌患者癌组织细胞中CK18和CK19基因的表达的均差异无统计学意义(P>0.05),而在不同病理分期的鼻咽癌患者癌组织细胞中,CK18和CK19基因表达随着恶性程度的增高而增高,且均差异有统计学意义(P<0.05);在对鼻咽癌患者的外周血中的CK18和CK19基因检出率结果显示,CK18的检出率为64%,CK19的检出率75%,年龄大于60岁的患者检出率高于年龄小于60岁的,随着病理检测其恶性程度的增高,CK18和CK19的检出率也相应增高,鼻咽癌转移的患者血液中CK18和CK19的检出率远高于非转移患者。结论:CK18和CK19是可能有潜力作为鼻咽癌诊断的肿瘤标志物。     

HIF-1α与VEGF在子宫内膜癌组织血管生成中的作用

目的：研究HIF-1α与VEGF在正常子宫内膜、子宫内膜不典型增生和子宫内膜癌组织中的表达情况及在肿瘤血管生成中的作用。方法：应用免疫组织化学SP法分别检测各类子宫内膜组织中的HIF-1α和VEGF的表达,并计数MVD。结果：子宫内膜癌HIF-1α阳性表达率63.6%（28/44）,正常子宫内膜为21.4%（3/14）,两者差异有统计学意义,P〈0.01。VEGF在子宫内膜癌、子宫内膜非典型增生和正常子宫内膜组织中的阳性率分别是56.8%、25.0%和14.3%,差异有统计学意义,P〈0.01。HIF-1α与VEGF均与MVD呈正相关（rs=0.579,P〈0.01;rs=0.607,P〈0.01）。结论：HIF-1α及其靶基因VEGF可能在子宫内膜病变由良性到恶性转变过程中,以及恶性肿瘤的进展中起了重要作用,可能作为肿瘤生物学行为的标志,并成为抗肿瘤治疗的新靶向。     

低氧诱导因子1α在子宫内膜癌组织中的表达及其与肿瘤血管生成的关系

由于肿瘤细胞快速增殖，缺氧是大多数肿瘤发生与发展中普遍存在的一种状态。低氧诱导因子（hypoxia-inducible factor，HIF）1α是缺氧条件下肿瘤细胞产生的一种核转录因子，调节缺氧反应基因产物的合成，在肿瘤血管生成、细胞能量代谢中起调控作用。肿瘤生长、浸润及转移与血管生成密切相关，血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是最重要的一种促血管生成因子，能刺激血管内皮细胞分裂、增殖，增加微血管通透性，从而有利于肿瘤的血管生成。     

2010—2014年某妇幼保健院医院感染现患率调查

目的了解某妇幼保健院医院感染现状及抗菌药物使用情况,为更好地预防和控制医院感染提供依据。方法采用横断面调查,以及查阅电子病历与床旁调查相结合的方法,对 2010-2014年该院住院患者进行医院感染现患率调查。结果2010-2014年医院感染现患率分别为3.29%、5.20%、3.97%、3.93%、3.73%。医院感染现患率居首位的科室为儿科(9.09%～12.96%),感染部位以上呼吸道居首位(50.00%~69.56%)。住院患者抗菌药物使用率分别为50.19%、41.40%、23.40%、25.47%、23.92%,逐年下降（χ2=133.40,P<0.001）;预防用药率高达57.38%~75.47%;单一用药率均＞95%。结论2010-2014年该院住院患者抗菌药物使用率总体呈下降趋势,但预防用药比例高,医院应加强抗菌药物使用的管理。     

OSAHS患者血中NLR水平与认知功能的关系

目的探讨阻塞型睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者血中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)水平与认知功能的关系。方法将66例OSAHS患者分为轻度组(n=16)、中度组(n=15)和重度组(n=35),选择25例健康者作对照组。用多导睡眠监测仪(PSG)监测患者夜间睡眠呼吸暂停低通气指数(AHI)和最低血氧饱和度(LSaO2),采用MMSE和MoCA量表评判患者认知功能,检测4组NLR水平。分析认知功能量表评分、AHI、LSaO2与NLR之间相关性。结果与对照组比较,中、重度组MMSE、MoCA评分降低;与轻度组比较,重度组MMSE、MoCA评分降低(P0.05);OSAHS患者MMSE、MoCA评分与AHI呈负相关(r=-0.472和-0.768,P0.05),与LSaO2呈正相关(r=0.672和0.741,P0.05)。与对照组、轻度组比较,重度组NLR水平升高(P0.05)。OSAHS患者NLR水平与AHI呈正相关(r=0.2594,P0.05),与LSaO2呈负相关(r=-0.2423,P0.05);OSAHS患者MMSE、MoCA评分与NLR呈负相关(r=-0.3225和-0.3299,P0.05)。结论 OSAHS患者NLR水平随着AHI增加和缺氧程度加重而升高,NLR升高与认知功能下降具有相关性,早期对OSAHS患者NLR进行筛查,对病情评估具有一定参考价值。     

Cdc2/cdk1和survivin特异性siRNA真核表达载体的设计、构建和鉴定

目的:构建表达靶向cdc2/cdk mRNA和survivin mRNA的siRNA真核表达质粒.方法:从GenBank中搜索Cdc2/cdk1和survivin基因组标准序列,根据siRNA设计原理构建siRNA真核表达质粒phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1和phU6-survivin-shRNA.phU6-survivin-shRNA1、phU6-survivin-shRNA2、pU6-HK-shRNA质粒均含有增强绿色荧光基因作为报告基因和酶切位点,而phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2均含有红色荧光基因作为报告基因和酶切位点.质粒酶切、电泳、测序鉴定;用脂质体转染鼻咽癌CNE2细胞,荧光显微镜下观察、摄片、计数阳性细胞,计算转染效率,激光共聚焦显微镜检测质粒载体绿色和红色荧光蛋白的表达,免疫印迹法检测真核表达质粒对相应蛋白的抑制率.结果:荧光显微镜下计算转染效率显示在转染鼻咽癌细胞CNE2 48 h转染率高达45.00％～57.45％;质粒phU6 cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin shRNA1、phU6-survivin-shRNA2和pU6-HK shRNA酶切后均可见400 bp条带,与预期插入的目的基因大小一致,基因测序证实碱基序列与模板序列相符;在共聚焦显微镜下观察均见大量的细胞表达相应荧光;免疫印迹检测phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1和phU6-survivin-shRNA2对鼻咽癌CNE2细胞相应蛋白抑制率分别是33.00±1.41、38.31±1.01 (survivin)、36.33±1.21和43.26±1.02(cdk1).结论:本实验构建了靶向Cdc2/cdk1mRNA和survivin mRNA的真核表达质粒.重组质粒能有效转染人鼻咽癌细胞,phU6-cdc2/cdk1-shRNA2和phU6-survivin-shRNA2与phU6-cdc2/cdk1-shRNA1和phU6-survivin-shRNA1相比,转染CNE2 48h后其对相应蛋白的干扰率相对较高.     

体外受精-胚胎移植中促性腺激素用药时间对妊娠结局的影响

目的:探讨在体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization embryo transfer,IVF-ET)超促排卵中,促性腺激素(gonadotropin,Gn)用药时间对妊娠结局的影响。方法:对2012年1~12月在北京大学第三医院生殖医学中心行IVF-ET助孕,促性腺激素释放激素激动剂(gonadotropin releasing hormone agonist,GnRH-a)短方案和促性腺激素释放激素拮抗剂(gonadotropin releasing hormone antagonist,GnRH-ant)方案的患者共3 221例进行回顾性分析。Gn用药时间小于等于7 d的患者为A组(n=58),Gn用药时间大于7 d为B组(n=3 163),比较两组患者年龄、不孕年限、体重指数、基础雌二醇(estradiol,E2)、促卵泡生成素(follicle-stimulating hormone,FSH)、窦卵泡数、获卵数、人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)日子宫内膜厚度、受精率、优胚率、着床率及临床妊娠率等。结果:年龄、不孕年限、体重指数、基础E2、FSH、窦卵泡数两组间比较差异无统计学意义。A组获卵数少于B组[(8.2±5.6)vs.(12.1±8.3),P=0.009];HCG:日子宫内膜厚度A组小于B组[(9.9±2.1)mm vs.(10.4±1.6)mm,P=0.002]。两组间受精率、优胚率及着床率差异无统计学意义,临床妊娠率差异无统计学意义(36.2%vs.33.6%,P>0.05)。A组中GnRH-a短方案18例,6例临床妊娠(33.3%),B组中GnRH-a短方案1 019例,277例临床妊娠(27.2%),临床妊娠率差异无统计学意义;A组中GnRH拮抗剂方案40例,15例临床妊娠(37.5%),B组中GnRH拮抗剂方案2 144例,785例临床妊娠(36.6%),临床妊娠率差异亦无统计学意义。结论:在IVF-ET中,应用GnRH-a短方案和GnRH拮抗剂方案Gn用药时间短的患者尽管获卵数较少,但最终妊娠结局未受到影响。     

miRNA-34a靶向HDAC1对胃癌细胞增殖、侵袭和上皮间充质转化的影响

目的:探讨miR-34a通过靶向组蛋白去乙酰化酶1 (HDAC1)对胃癌细胞增殖、侵袭和上皮间充质转化(EMT)的影响。方法:以胃癌组织及癌旁组织、体外培养的胃癌细胞系BGC-823、MKN28、AGS、SGC-7901以及人正常胃黏膜上皮细胞NGEC为研究对象。利用Lipofectamine 2000转染试剂对SGC-7901细胞进行转染,并分组为空白对照组、miR-NC组、miR-34a mimics组、miR-34a mimics+pcDNA组、miR-34a mimics+pc-HDAC1组。结果:与癌旁组织和人正常胃黏膜上皮细胞NGEC相比,胃癌组织和细胞系中miR-34a表达降低(P<0.05),HDAC1 mRNA表达升高(P<0.05)。miR-34a mimics可提高miR-34a表达、E-cadherin表达上调,细胞增殖活性、PCAN、Ki-67、MMP-2、MMP-9、N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低,细胞侵袭数明显减少(P<0.05)。miR-34a靶向负调控HDAC1蛋白表达(P<0.05)。pc-HDAC1可使m...