蛋白激酶CK2在喉正常组织及喉癌前病变和喉癌中的表达及意义

目的:探讨蛋白激酶CK2在喉癌的发生、发展、浸润和转移过程中的作用。方法:采用免疫组织化学(SP法)染色技术检测18例正常黏膜、14例声带息肉、11例喉乳头状瘤及50例喉鳞状细胞癌(LSCC)标本中蛋白激酶CK2的表达情况,并用RT-PCR技术检测CK2α及CK2β在50例LSCC中mRNA的表达水平,分析LSCC中CK2α及CK2β表达的相关关系。结果:免疫组织化学显示CK2α及CK2β在正常喉黏膜、声带息肉、癌旁1.0cm组织、颈部非转移性淋巴结→喉乳头状瘤、癌旁0.5cm组织→LSCC组织、颈部转移性淋巴结组织中的阳性表达率逐渐升高,它们之间的差异具有统计学意义,组内各病变间表达的差异无统计学意义。在LSCC组内,CK2α的表达与年龄、颈部淋巴结转移及T分期无关,而与病理分级有关。CK2β的表达与年龄及T分期无关,而与病理分级及淋巴结转移有关,这与RT-PCR检测的其在蛋白质水平的表达一致。在LSCC组织中,CK2α与CK2β在mRNA水平的表达呈正相关。结论:蛋白激酶CK2过表达可能对LSCC的发生和发展有一定的促进作用,检测CK2可作为判定LSCC恶性程度的潜在指标之一,抗CK2可能为肿瘤治疗提供一种新途径。     

CK19和EGFR mRNA在喉癌动物模型外周血中的表达及其与淋巴转移关系

目的:探讨循环播散肿瘤细胞(CTC)与喉癌淋巴结转移的相关性,评价细胞角蛋白(CK19)和表皮生长因子受体(EGFR)在喉癌微转移诊断中的价值.方法:从30只裸鼠中随机选择25只均分为5组建立喉肿瘤模型,剩余5只为对照组,分别于接种后2、4、6、8、10周处死1组.采用RT-PCR方法检测裸小鼠外周血及肿瘤组织中CK19 mRNA和EGFR mRNA的表达,采用连续病理切片苏木精-伊红染色观察淋巴结转移,免疫组织化学(SP)法检测肿瘤组织中EGFR的表达.结果:对照组外周血中未发现CK19 mRNA和EGFR mRNA的表达,实验组外周血和肿瘤组织中CK19 mRNA阳性率分别为48%和80%,EGFR mRNA的阳性率分别为36%和76%.淋巴结转移与外周血CTC有关(r=0.655,P<0.01),且多发生在肿瘤指数生长期,转移率为60%(15/25).免疫组织化学检测EGFR蛋白在肿瘤组织阳性率为88%(22/25),外周血中EGFR mRNA表达阳性的肿瘤组织中EGFR蛋白均阳性,肿瘤组织EGFR蛋白高表达的外周血中EGFR mRNA检出率亦高.结论:RT-PCR检测外周血CK19和EGFR mRNA的表达有助于预测淋巴结转移,EGFR mRNA有望作为肿瘤诊断和治疗的新靶点.     

CK4与CK13在喉咽鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的：探讨喉咽鳞状细胞癌组织中细胞角蛋白13（CK13）和细胞角蛋白4（CK4）的表达与喉咽鳞状细胞癌临床病理特征的关系。方法：应用免疫组织化学方法检测56例喉咽鳞状细胞癌患者的癌组织标本及癌旁正常组织中CK13及CK4的蛋白表达,应用VIDAS图像分析仪分析其图像的积分光密度,并进行统计学处理。结果：CK4与CK13在癌旁正常组织中均呈强阳性表达,而在喉咽鳞状细胞癌组织中的表达下降（P〈0．01）,且与病理分化程度均呈正相关（P〈0．05）。CK4在T1、T2期的表达最强,在T3、T4期的表达依次减弱（F=93．814,P〈0．05）;CK4在Ⅰ～Ⅱ期的表达最强,在Ⅲ期、Ⅳ期中的表达逐渐减弱（F=127．894,P〈0．05）;CK4在无淋巴结转移的鳞状细胞癌组织中的表达较强,而在有淋巴结转移的鳞状细胞癌组织中表达较弱（T=10．678,P〈0．05）。而CK13与肿瘤大小、临床分期及有无淋巴结转移无显著相关。结论：CK4与CK13共同检测对喉咽鳞状细胞癌的早期诊断、手术方法的选择以及判断预后具有指导意义。     

β-catenin拮抗因子Chibby在鼻咽癌中的表达及意义

目的研究β-catenin拮抗因子Chibby在鼻咽癌组织中的表达情况,并探讨其与鼻咽癌临床病理因素的相关性。方法分别采用Real time PCR及免疫组织化学(SABC法)检测45例鼻咽癌及癌旁正常鼻咽黏膜组织中Chibby mRNA及蛋白的表达情况,统计Chibby的表达与鼻咽癌患者临床病理因素的关系。结果 Chibby mRNA在癌旁正常鼻咽黏膜及鼻咽癌组织中平均相对表达量分别为0.0835±0.0056和0.0776±0.0059,Chibby蛋白在癌旁正常鼻咽黏膜及鼻咽癌组织中的阳性表达率分别为91.1%(41/45)和42.2%(19/45)。鼻咽癌组织中Chibby的表达与T分期及临床分期有相关性,与性别、年龄、颈淋巴结转移及病理分型无明显相关性。结论与癌旁正常鼻咽黏膜组织相比,鼻咽癌组织中Chibby mRNA及蛋白的表达均降低,Chibby的表达与肿瘤T分期及临床分期相关,与性别、年龄、颈淋巴结转移及病理分型无明显相关性,Chibby可能参与了鼻咽癌的发生过程,有望成为鼻咽癌基因治疗新的作用靶点。     

鼻咽癌易感TERT基因的多种靶microRNA在鼻咽癌患者血清中表达量变化及其临床诊断价值

目的　探讨鼻咽癌易感TERT基因多种靶miRNA在鼻咽癌患者血清中含量对临床诊断的价值。方法　收集在本医院就诊60例鼻咽癌者及60例健康者外周血，RT-PCR法检测外周血中mir-138、mir-491、mir-181、mir-1207、mir-346、mir-512-5P、mir-299、mir-1266、mir-1182相对表达量差异，分析mir-1182含量与鼻咽癌患者临床病理特征相关性。结果　鼻咽癌患者血液中mir-346、mir-512-5P、mir-299、mir-1266、mir-1182含量低于健康对照组，mir-1182差异显著（P <0.01）；Ⅲ～Ⅳ期、肿瘤直径≥5 cm及癌转移者血清中mir-1182含量分别低于Ⅰ～Ⅱ期、肿瘤直径≤5 cm及无转移患者（P <0.05）；mir-1182诊断AUC为0.851（95%CI: 0.782～0.919），灵敏度65%，特异度93.3%。结论　鼻咽癌患者血清中mir-1182含量与肿瘤大小、有无淋巴结转移、TNM分期、病理分期负相关，可 见mir-1182有较好诊断效能，具有鼻咽癌临床诊断运用价值。     

乙酰肝素酶、蛋白激酶CK2β与缺氧诱导因子-1α仪在鼻咽癌组织中的表达及其相关性研究

目的：检测乙酰肝素酶（HPA）、蛋白激酶CK2β（CK2β）、缺氧诱导因子-α（HIF-1α）在鼻咽癌（NPC）组织中的表达及其与临床特征之间的关系;并分析三者在NPC组织中表达的相关性。方法：采用免疫组织化学染色技术Super-Vision法检测49例NPC组织标本及15例慢性鼻咽炎（CNT）组织标本中HPA、CK2β及HIF-1α的表达水平。结果：HPA、CK2β与HIF-1α在NPC组织中的表达水平均高于CNT组织中的表达,差异均有统计学意义（P〈O．05）;HPA、CK2β与HIF-β的表达与NPC临床分期、治疗后有无复发或转移相关（P〈0．05）,与患者的性别无关（P〉0．05）;HIF-1α的表达水平与NPC患者的年龄密切相关（P％0．01）,而HPA、CK2β的表达水平则与NPC患者的年龄无关（P〉0．05）;HPA、CK2β与HIF-1α任意两者间在NPC组织中的表达均呈正相关性（P〈O．05）。结论：HPA、CK2β和HIF-1α参与了NPC的发生和发展、浸润及转移;在NPC的发生发展过程中,HPA、CK2β和HIF-1α之间可能存在协同作用。     

单层上皮细胞角蛋白在声门上型喉癌中的表达

目的 探讨角蛋白(cytokeratin,CK)19,CK18在声门上型喉癌中的表达及其临床意义。方法 用免疫组化法观察60例声门上型喉癌术后标本CK19,CK18的表达。结果①60例声门上型喉癌组CK19表达阳性53例,阳性率88.3％,而CK18呈阴性表达;②60例声门上型喉癌CK19表达与病理分级有关:中分化组与低分化组(P=0.019),高分化组与低分化组(P=0.003)之间的差异显著,而与TNM分期无关(P=0.186);③60例声门上型喉癌CK19表达在有淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组(P=0.019);④60例声门上型喉癌CK19表达与生存时间无关(P=0.438)。结论60例声门上型喉癌CK19表达与病理分级及淋巴结转移有关,而与TNM分期及生存时间无关。     

蛋白激酶CK2α在喉鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨蛋白激酶CK2α（PK-CK2α）在喉鳞状细胞癌（LSCC）组织中的表达及临床意义。方法：应用免疫组织化学SP法检测50例LSCC组织（喉癌组）及10例正常舌腭弓黏膜组织（对照组）中PK-CK2α蛋白的表达情况，并采用图像分析系统对表达结果进行定量分析。结果：PK-CK2α蛋白在喉癌组中阳性表达率为64％（32／50），在对照组中阳性表达率为30％（3／10），2组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。喉癌组和对照组之间PK-CK2α阳性表达的平均吸收度（A值）差异有统计学意义（P＜0．05），喉癌组PK-CK2α阳性表达的A值与年龄、性别、临床分型（肿瘤部位）、临床TNM分期和淋巴结转移比较差异均无统计学意义，与病理分级（G1→G2加G3）有显著相关性（P＜0．05）。结论：PK-CK2α过表达可能与LSCC的发生和发展有关，检测PK-CK2α可作为判定LSCC恶性程度的潜在指标之一，抗PK-CK2α可能为肿瘤治疗提供一种新途径。     

Parkin基因在鼻咽癌中转录表达及临床意义

目的　研究Parkin基因在鼻咽癌中转录表达及临床意义。方法　运用半定量逆转录PCR的方法检测54例鼻咽癌组织和16例正常鼻咽上皮组织Parkin基因转录表达 水平,分析Parkin基因转录表达与鼻咽癌患者临床病理特征关系。结果　54例鼻咽癌组织Parkin基因相对转录表达水平为0.3430±0.4947,16例正常鼻咽上皮组织Parkin基因相对转录表达水平为1.0052±0.4911,鼻咽癌组织Parkin转录表达明显下调,Parkin基因转录表达与患者年龄、性别、T分级、TNM分期、病理类型无明显关系,而与淋巴结转移有关。结论　Parkin在鼻咽癌的发生发展中起抑癌基因作用,Parkin基因转录表达可作为判断鼻咽癌临床预后预测指标。     

逆转录聚合酶链反应对声门癌喉前淋巴结微转移的检测及临床意义

目的：探讨逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）对声门癌患者喉前淋巴结微转移的检测及临床意义。方法：对26例声门癌患者的喉前淋巴结采用RT—PCR技术进行细胞角蛋白19（CK19）mRNA检测并与常规病理方法（苏木精-伊红染色）进行比较。结果：26例声门癌患者，喉前淋巴结cK19mRNA阳性表达8例，检出率为30．77％，常规病理检查均未发现癌转移，检出率为0，两种检测方法比较，差异有统计学意义（P＜0．05）。Ⅰ期8例中均未发现微转移，Ⅱ～ⅣA期18例中微转移8例（44．44％），差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：RT—PCR检测声门癌喉前淋巴结微转移较常规病理方法更为敏感，研究喉前淋巴结微转移有助于为声门癌的临床治疗提供依据。     

趋化因子受体CCR6及CCR7在喉鳞状细胞癌中表达的研究

目的:探讨趋化因子受体CCR6、CCR7及其配体CCL20、CCL19/CCL21在喉鳞状细胞癌(LSCC)中的表达及其与临床病理特征的相关性.方法:以50例LSCC患者的肿瘤组织、癌旁组织、颈清扫淋巴结、外周血为研究对象,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(real-time qRT-PCR)技术、免疫组织化学技术及流式细胞术检测趋化因子受体CCR6、CCR7及其配体(CCL20、CCL19/CCL21)的表达.结果:real-time qRT-PCR检测发现LSCC肿瘤组织中CCR6、CCR7及CCL19/CCL21 mRNA的表达量低于癌旁组织(P<0.05),CCL20 mRNA的表达量高于癌旁组织(P<0.05);免疫组织化学检测发现LSCC肿瘤组织及转移淋巴结均有CCR6和CCR7的表达,且伴颈淋巴结转移的LSCC组织CCR6、CCR7的表达高于不伴颈淋巴结转移组织,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测发现,LSCC患者外周血CD4+CCR6+T细胞占外周血单个核细胞的比例显著高于正常对照组(P<0.05),而CD4+CCR7+T细胞的比例则显著低于正常对照组(P<0.05).结论:趋化因子受体CCR6、CCR7在LSCC组织、转移淋巴结及外周血中表达,与LSCC的发展、浸润、颈部淋巴结转移有关.     

下咽癌瘤内淋巴管生成及颈淋巴转移关系的研究

目的 探讨D2-40在下咽癌新生淋巴管形成中的作用及其临床病理意义。方法 应用淋巴管内皮特异性标志物D2-40,检测47例下咽癌患者肿瘤组织中及癌旁正常黏膜中的淋巴管密度（LVD）,并与临床病理参数进行分析。结果 下咽癌肿瘤组织中可观察到新生淋巴管,且肿瘤组织内高表达的LVD与淋巴结转移差异有统计学意义（P<0.05）,而与患者年龄、性别、肿瘤分化程度、T分期差异无统计学意义（P>0.05）。结论 下咽癌内存在新生淋巴管,且高瘤内LVD和淋巴转移相关,肿瘤可能通过瘤内新生淋巴管进行转移。     

早幼粒细胞性白血病基因蛋白在喉癌和鼻咽癌中的表达及意义

目的：探讨早幼粒细胞性白血病基因（PML）蛋白在喉癌和鼻咽癌组织中的表达及意义。方法：运用免疫组织化学SP法检测56例喉癌和34例鼻咽癌患者术后石蜡标本中PML蛋白的表达水平，分析其与肿瘤病理分级和T分级、淋巴结转移的关系。结果：①在不同病理分级的喉癌组织中，PML蛋白表达水平随着肿瘤恶性程度的升高而降低（P〈0．05）；②在不同T分级的喉癌和鼻咽癌组织中，PML蛋白表达水平随着肿瘤的发展而降低（P〈0．05）；③与喉癌组织相比，鼻咽癌组织中PML蛋白表达相对较低（P〈0．05）；④在有无淋巴组织转移的鼻咽癌组织和喉癌组织中PML蛋白表达均差异无统计学意义。结论：PML蛋白与喉癌和鼻咽癌的病理分级和T分级的关系密切，提示PML在抑制肿瘤生长中可起到一定的作用。在肿瘤的转移方面，PML所起作用较小。     

喉、喉咽癌患者外周血播散肿瘤细胞检测的初步研究

目的探讨RT-PCR以CK19mRNA作为标记物在检测喉癌、喉咽癌患者外周血播散肿瘤细胞(disseminatedtumorcell,DTC)的意义。方法采用套式RT-PCR,以CK19mRNA为指标,检测32例喉癌、喉咽癌患者外周血中的DTC。结果CK19mRNA总阳性率为46.9%(15/32);其中喉癌阳性率为40%(10/25);喉咽癌阳性率为71.4%(5/7)。20例正常对照组全部阴性。淋巴结转移组阳性率75%(9/12),非淋巴结转移组阳性率30%(6/20),两者之间有显著性差异(P<0.05)。阳性组患者的无瘤生存期(20.29±5.16月)比阴性组(37.13±3.23月)明显缩短,经Log-rank检验有统计学差异(P=0.046,<0.05),阳性组的复发率(66.7%)比阴性组(18.8%)增高(P<0.05)。并且做了生存分析,有统计学差异(P=0.015,<0.05)。结论以CK19mRNA肿瘤标记物,用精确设计的RT-PCR技术对外周血DTC的检测有助于喉癌、喉咽癌转移的早期发现;随访初步发现用DTC的检测有望作为肿瘤复发和远处转移的早期预示手段。     

中晚期鼻咽癌中核苷酸切除修复交叉互补基因1表达与铂类药物疗效的相关性研究

目的:探讨中晚期鼻咽癌组织中核苷酸切除修复交叉互补基因1(ERCC1)的表达,并分析其表达与铂类药物化疗疗效的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测107例中晚期鼻咽癌组织及48例癌旁组织中的ERCC1的表达情况。结果:ERCC1在鼻咽癌组织中低表达55例,高表达52例,而癌旁组织中低表达30例,高表达18例,2组差异无统计学意义。ERCC1表达与鼻咽癌患者临床综合分期有关,与年龄、性别、组织学类型、T分期、N分期均无关。ERCC1低表达病例近期治疗有效率(81.8%)比高表达病例近期有效率(63.5%)高,二者差异有统计学意义。97例随访,2例发生死亡,5例发生肝或肺转移,ERCC1不同组间的差异无统计学意义。结论:ERCC1蛋白可作为预测鼻咽癌患者对铂类药物化疗敏感性的指标之一,也有助于肿瘤患者个体化治疗方案制定,而免疫组织化学检测亦是简便而有效的检测手段,值得广泛推广。     

单层上皮细胞角蛋白在声门上型喉癌中的表达

目的探讨角蛋白(cytokeratin，CK)19，CK18在声门上型喉癌中的表达及其临床意义。方法用免疫组化法观察60例声门上型喉癌术后标本CK19，CK18的表达。结果①60例声门上型喉癌组CK19表达阳性53例，阳性率88.3％，而CK18呈阴性表达；②60例声门上型喉癌CK19表达与病理分级有关：中分化组与低分化组(P=0．019)，高分化组与低分化组(P=0．003)之间的差异显著，而与TNM分期无关(P=0．186)；⑨60例声门上型喉癌CK19表达在有淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组(P=0．019)；④60例声门上型喉癌CK19表达与生存时间无关(P=0．438)。结论60例声门上型喉癌CK19表达与病理分级及淋巴结转移有关，而与TNM分期及生存时间无关。     

DNMT1基因在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)基因在喉鳞状细胞癌中的表达及其与临床病理因素的关系.方法:采用免疫组织化学方法检测96例喉鳞状细胞癌中DNMT1基因蛋白的表达,其中66例喉癌组织同时进行实时定量PCR,并分析其DNMT1 mRNA的表达与临床病理因素的关系.结果:DNMT1 mRNA在喉鳞状细胞癌组织中表达上调(P<0.05).96例喉癌鳞状上皮细胞中DNMT1蛋白表达全部为阳性(96/96),36%(8/22)癌旁组织的鳞状上皮细胞中DNMT1蛋白表达为阳性,二者差异有统计学意义(P<0.05).DNMT1 mRNA在喉癌组织中表达上调,和患者年龄、性别、临床分期、淋巴结转移情况无关,但与患者吸烟史有显著相关性(P<0.05).结论:DNMT1可能在喉癌中表达增高从而引起肿瘤的发生,吸烟可能诱导DNMT1的表达增高.     

Cripto-1在鼻咽癌中的表达及意义

目的　探究Cripto-1蛋白在鼻咽癌组织及癌细胞中的表达。方法　运用免疫组化检测鼻咽癌患者和鼻咽炎患者中Cripto-1蛋白的表达，通过Western blot检测Cripto-1在不同鼻咽癌细胞株中的表达。结果　Cripto-1蛋白在鼻咽癌组织中表达阳性率为80%明显高于鼻咽炎组织阳性率为36.7%；在伴有淋巴结转移的鼻咽癌组织中的阳性率为90.5%，不伴有淋巴结转移的鼻咽癌组织中的阳性率为68.4%。在不同病理类型、性别及年龄的鼻咽癌患者中表达无明显差异。Cripto-1阳性鼻咽癌组5年生存率57.8%低于阴性组81.3%。Cripto-1在鼻咽癌细胞中均表达，在CNE1-LMP1中明显高于CNE1细胞，差异具有统计学意义。结论　Cripto-1蛋白在鼻咽癌的发生、发展以及鼻咽癌淋巴结转移、预后中具有重要意义，可作为辅助鼻咽癌诊断和预判转移潜能的分子标志物之一。     

乙酰肝素酶、nm23-H1在鼻咽癌中的表达以及与侵袭转移的关系

目的 探讨乙酰肝素酶(HPA)和nm23-H1在鼻咽癌组织中的表达以及与肿瘤侵袭转移的关系。方法 用免疫组化技术检测HPA和nm23 H1在60例鼻咽癌组织和20例鼻咽慢性炎症组织中的表达情况,并结合患者的临床病理指标进行分析。结果 HPA在鼻咽慢性炎症组织和鼻咽癌组织中的阳性表达率分别为0（0/20）和55%（33/60）（P＜0.05）;nm23 H1在鼻咽慢性炎症组织和鼻咽癌组织中的阳性表达率分别为90.0%（18/20）和53.3%（32/60）（P＜0.05）。在鼻咽癌组织中,随着鼻咽癌临床分期和侵袭程度的升级,以及有颈淋巴结转移和远处转移时,HPA阳性表达逐渐增加,而nm23-H1阳性表达逐渐减少（P<0.05）;HPA和nm23-H1的表达呈明显负相关（P＜0.05）。结论 HPA的阳性表达和nm23-H1阴性表达的鼻咽癌患者有较高的侵袭转移潜能。     

微小RNA-5688在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义

目的　分析miRNA-5688在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义。方法　采用实时定量PCR方法检测鼻咽癌患者组织及癌旁组织中miRNA-5688的表达水平，分析其与病理特征及预后的关系。结果　鼻咽癌患者癌组织中miRNA-5688表达（2.34±0.61）明显低于癌旁组织（7.53±1.18）（P <0.05）。不同性别、年龄的鼻咽癌患者癌组织中miRNA-5688表达比较差异均无统计学意义（P 均＞0.05），但不同分化程度、T分级、N分级、TNM分期及是否发生淋巴结转移的患者癌组织中miRNA-5688表达差异均有统计学意义（P 均<0.05）。生存曲线结果显示，miRNA-5688低表达组的平均生存时间明显短于miRNA-5688高表达组（P <0.05），平均生存时间分别为28.5个月和36.3个月。结论　miRNA-5688与鼻咽癌的发生、发展及预后有密切关系，是鼻咽癌潜在的治疗靶点及生物标志物。