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1.
目的克隆人C型凝集素受体dectin-2和dectin-3胞外区基因并进行原核表达及制备它们的单克隆抗体。方法利用PCR扩增编码人dectin-2和dectin-3胞外区的基因序列,分别克隆到原核表达载体pET28a(+)中,IPTG诱导基因的原核表达;纯化后免疫Balb/c小鼠,融合并筛选获得克隆化的杂交瘤细胞株,制备Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体;利用ELISA、FACS和Western印迹法检测抗体的效价和特异性;检测Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体是否能够特异性阻断相应受体的功能。结果成功构建原核表达质粒pET28a(+)-Dectin-2和pET28a(+)-Dectin-3,并在E.coli BL21(DE3)中诱导Dectin-2和Dectin-3胞外区的高效表达。纯化目的蛋白后免疫Balb/c小鼠,融合获得8株Dectin-2和12株Dectin-3的阳性杂交瘤细胞。进一步克隆化筛选获得7株Dectin-2和8株Dectin-3的单克隆细胞株,并且其分泌的抗体能够特异结合Dectin-2和Dectin-3胞外区的原核表达蛋白。利用单克隆细胞株制备小鼠腹水,纯化获得Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体。单克隆细胞株D2-7和D3-2产生的抗体能够特异结合RAW中表达的人Dectin-2和Dectin-3蛋白及小鼠骨髓来源巨噬细胞中Dectin-2和Dectin-3蛋白。抗体功能实验显示:单克隆细胞株D2-7和D2-10产生的抗体能够阻断Dectin-2受体介导白念珠菌菌丝态刺激引起的NF-κB激活,而单克隆细胞株D3-1和D3-2产生的抗体能够阻断Dectin-3受体介导白念珠菌菌丝态刺激引起的NF-κB激活,并且具有剂量依赖性及高度特异性。结论成功获得高纯度的Dectin-2和Dectin-3胞外区蛋白,并分别获得了特异、高效价的单克隆抗体。  相似文献   
2.
贾鑫明  黄矛  李万亥 《药学实践杂志》2001,19(4):233-236,241
目前草药疗法已在世界各国比较流行。欧亚许多国家用多种草药制成补充物投入市场,并进行了大量研究;据统计,在美国大约有500万人服用各种草药制成的补充物。胡椒科植物卡瓦胡椒具有抗焦虑、镇静催眠、局部麻醉、抗惊厥等作用,且未观察到药物依赖性等优点而在欧洲和美国临床应用。1990年,德国联邦卫生局批准卡瓦胡椒治疗焦虑症。本文介绍卡瓦胡椒的化学成分、临床前药理学研究、临床研究和药物耐受性及不良反应等研究进展。  相似文献   
3.
目的:建立白念珠菌耐氟康唑模型,研究白念珠菌耐药前后相关生物学特性变化。方法:体外用氟康唑诱导敏感白念珠菌SC5314和y01.09成为耐药子代SC5314R和y01.09R,利用微量液基稀释法和小鼠体内实验确定耐药表型,通过生长动力学、菌丝和生物膜形成实验观察生物学特性变化。结果:氟康唑对耐药子代SC5314R和y01.09R的MIC80分别为>128μg/mL,64μg/mL。无药培养35代后,MIC80分别为>128μg/mL,16μg/mL。有/无氟康唑环境下,敏感母本和耐药子代倍增时间无显著差异。氟康唑作用下,SC5314和y01.09菌丝形成受到抑制,SC5314R和y01.09R仍有菌丝形成;SC5314R和y01.09R可以形成牢固生物膜,SC5314和y01.09形成松散生物膜。结论:本实验成功诱导对氟康唑产生高度耐药的白念珠菌菌株,其耐药性通过体内外实验获得证实。  相似文献   
4.
目的:用核素掺入结合放射自显影和液体闪烁计数方法,研究抗真菌药物氟康唑对真菌麦角甾醇生物合成的影响.方法:取新鲜培养的新生隐球菌标准株分别与不同浓度氟康唑预培养10 min后,加[1-14C]乙酸钠振荡培养3 h,经皂化、提取、薄层展开,使角鲨烯、羊毛甾醇和麦角甾醇等分离后,用液体闪烁计数法测定上述各成分中14C的掺入量,并计算药物对真菌麦角甾醇生物合成的半数抑制浓度(IC50).结果:在空白对照组中,14C主要掺入麦角甾醇,而经氟康唑作用后,真菌的麦角甾醇生物合成受阻,14C在麦角甾醇中的掺入减少,但在羊毛甾醇及其上游成分角鲨烯环氧化物中的积累增多,其含量变化均呈剂量依赖性.氟康唑对真菌麦角甾醇生物合成的IC50为32.17 nmol/L.结论:核素掺入法能定量考察羊毛甾醇14α-去甲基化酶抑制剂氟康唑对羊毛甾醇去甲基化反应的抑制作用,为其他抗真菌药物的作用机制和抑酶活性研究提供了新方法.  相似文献   
5.
近年来,钠-葡萄糖协同转运蛋白2(type 2 sodium glucose co-transporters,SGLT2)抑制剂作为一种新型的治疗糖尿病药物成为研究热点。SGLT2在肾近端小管葡萄糖重吸收中起着非常重要的作用;抑制肾脏SGLT2可以促进Ⅱ型糖尿病人尿糖的排泄,使其血糖恢复正常而不会有低血糖的风险。临床实验表明,SGLT2抑制剂对Ⅱ型糖尿病的治疗效果明显,且具有降低体重、无低血糖风险等优点,目前,许多SGLT2抑制剂已经进入临床评价后期。  相似文献   
6.
目的探讨C型凝集素受体Dectin-2在烟曲霉菌感染中的作用及机制。方法用紫外线灭活的烟曲霉菌膨胀态分生孢子刺激野生型(wild type, WT)和Dectin-2缺失(Clec4n-/-)小鼠骨髓来源的巨噬细胞(bone marrow derived macrophages, BMDMs)。刺激20min及40min后,利用Western印迹法检测BMDMs中脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase, Syk)和核转录因子κB抑制因子(inhibitor-κB, IκBα)的磷酸化水平。刺激16h后,利用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测BMDMs细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL-12p40的水平。另一方面,利用压舌感染的方法在WT和Clec4n-/-小鼠中构建烟曲霉菌肺部感染模型。感染2d后,统计小鼠整个肺脏荷菌量,并检测肺脏匀浆液中IL-6和IL-12p40水平。结果体外试验提示,烟曲霉菌刺激后,Dectin-2缺失的BMDMs中Syk和IκBα的磷酸化水平及IL-6、TNF-α和IL-12p40水平显著下降(P<0.05)。体内试验发现,烟曲霉菌感染后,Dectin-2缺失小鼠中肺脏荷菌量显著升高(P<0.05),肺脏匀浆液内IL-6、IL-12p40水平显著降低(P<0.05)。结论C型凝集素受体Dectin-2激活烟曲霉菌诱导的NF-κB信号通路并介导促炎细胞因子的产生,可在小鼠肺烟曲霉菌病动物模型中发挥保护性作用。  相似文献   
7.
甘西鼠尾根化学成分研究   总被引:5,自引:0,他引:5  
目的研究甘西鼠尾(Salvia przewalskii Maxim)的化学成分.方法应用硅胶柱色谱法对甘西鼠尾根中化学成分进行分离,根据理化常数测定和光谱(IR,FAB-MS,EI-MS,1HNMR,13CNMR,1H-1H COSY,1H-13C COSY,HMBC,NOESY)分析鉴定化合物的结构.结果获得并鉴定了8个化合物结构:丹参酮II-A(I),隐丹参酮(II),紫丹参甲素(III),柳杉酚(IV),熊果酸(V),2α,3α-二羟基乌苏-12-烯-28-酸(VI),齐墩果酸(VII),甘西鼠尾新酮A(VIII).结论VIII为新化合物,II,IV,V,VI和VII均为首次从该植物中分得.  相似文献   
8.
目的:研究肠炎冲剂对三硝基苯磺酸(TNBS)所致慢性溃疡性结肠炎模型大鼠的治疗作用。方法:TNBS的50%乙醇溶液一次性注人大鼠直肠,造成大鼠的慢性溃疡性结肠炎模型后,连续给药,观察腹泻率、死亡率,分别于连续给药3周及4周后麻醉处死动物,测定组织髓过氧化物酶(MPO)活力。地塞米松为阳性对照药。结果:地塞米松组动物症状减轻,但解剖学检查可见胸腺明显萎缩;连续给予不同剂量的肠炎冲剂药液(给药剂量为11.4、5.7、2.9g生药/kg体重),各剂量组动物腹泻明显缓解,动物死亡率、腹泻率、结肠组织MPO活力明显降低,病理学检查或尸检可见结肠组织溃疡面积明显缩小,水肿缓解,坏死减轻,未见肠壁增厚。肠炎冲剂能显著缓解TNBS所致慢性溃疡性结肠炎症状,且未见地塞米松所致免疫器官萎缩的免疫抑制作用。结论:肠炎冲剂连续给药,对慢性溃疡性结肠炎模型大鼠治疗作用明显,并且未见地塞米松所致严重不良反应,是治疗慢性溃疡性结肠炎的较合适药物。  相似文献   
9.
科技成果转化作为卫生健康行业创新工作的重要内容, 在促进医疗技术临床应用和满足人民群众医疗需求方面具有重要作用。作者梳理高校附属医院科技成果转化中在"人""财""物""制度"方面存在的问题, 介绍同济大学附属第十人民医院自2017年开始, 针对医院科技创新能力不足、医院科技成果转化运行机制与企业和市场脱节问题, 探索建立医院主导型临床医学科创园区和科技服务有限公司的实践。"政、产、学、研、医、用"一体化的临床医学科创园区多措并举吸引院内外优秀研究人才和项目进驻, 推动创新型科研项目的实施, 并通过与企业集团合作建立了医院主导和社会资本参与合作的健康产业模式。科技服务有限公司立足于院内成果的孵化和转化, 结合市场需求和临床需求, 推进医院与院外企业的多方合作, 健全了医院科技成果转化工作的链条化运行机制, 并通过集中招募支持资金, 缓解了中试研究资金不足、产品化资金不足的问题。医院的专利授权数量由2018年的23项增加至2022年的105项, 专利转化金额由2020年的200万元增加至2022年的1 100万元。建议高校附属医院进一步健全成果转化组织架构、加强专业人才队伍建设、完善成果转...  相似文献   
10.
白念珠菌多药耐药蛋白Cdr1p和Cdr2p的研究进展   总被引:2,自引:0,他引:2  
ABC转运蛋白(ATP—binding cassette transporter,ABCT)属于膜转运蛋白,存在于哺乳动物、细菌、真菌等多种细胞中,且与多种细胞的多药耐药(multidrug resistance,MDR)有关。白念珠菌(Candida albicans)含有多种ABCT,但只有Cdr1p、Cdr2p与MDR有关;另外,Cdr1p、Cdr2p具有外排泵、磷脂易位等功能。本文对白念珠菌耐药蛋白的研究进展作一综述。  相似文献   
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