PLK1基因缄默在K562细胞凋亡中的作用

目的观察缄默PLK1基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)对K562细胞内PLK1表达和细胞凋亡的影响,探讨PLK1在白血病发病中的作用,寻找更为有效的白血病治疗途径。方法设计合成针对PLK1基因1416~1436位点的shRNA片段,并将其克隆于绿色荧光蛋白的表达载体pEGFP-H1中,命名为pEGFP-H1/PLK1。通过电穿孔转染法将其导入K562细胞中,分为对照组、pEGFP-H1空载体转染组和pEGFP-H1/PLK1shRNA重组质粒转染组,转染后24,48h,分别通过RT-PCR和Western blot检测各组细胞PLK1基因和蛋白水平的变化,以MTT方法测各组细胞的增殖活性,比色法检测各组细胞的半胱天冬酶3(caspase-3)蛋白酶活性,并通过流式细胞仪检测各组细胞的凋亡和G2/M期转变情况。结果PLK1mRNA相对水平(与内参的灰度比值)对照组为1.25±0.07,空载体转染24,48h组分别为1.21±0.08和1.23±0.09,shRNA重组质粒转染24,48h组分别为0.52±0.04和0.25±0.02,shRNA重组质粒转染组较其他两组明显降低(P<0.01)。各组细胞PLK1的蛋白水平变化趋势与PLK1mRNA表达相似。相应地,对照组、空载体转染48h组、shRNA重组质粒转染24,48h组的凋亡率分别为(8.3±0.6)%、(8.7±0.7)%、(49.7±3.8)%和(82.3±6.9)%,后两者与前两组之间差异有统计学意义(P<0.05)。此外,与对照组和空载体转染组相比,shRNA重组质粒转染组的细胞增殖能力明显下降(P<0.05),且位于G2/M期的细胞较对照组和空载体转染组显著增加。以上结果均于转染后48h时较明显(P<0.05)。结论构建的shRNA能明显抑制转染细胞PLK1的表达和增殖,并可促进转染细胞的凋亡,并使停留于G2/M期的细胞显著增加。     

EGCG对多发性骨髓瘤细胞KM3促血管新生作用的抑制效应及机制初探

本研究探讨绿茶茶多酚成分之一表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)]对多发性骨髓瘤细胞KM3促血管新生作用的影响及其机制。体外培养多发性骨髓瘤细胞KM3,观察不同浓度EGCG作用后的培养上清对血管内皮细胞株HUVEC迁移和形成血管能力的影响。ELISA法检测KM3细胞培养上清中血管内皮生长因子(VEGF)分泌水平;RT-PCR方法检测KM3细胞VEGF mRNA表达水平。结果表明:EGCG以浓度依赖方式抑制KM3细胞培养上清促内皮细胞迁移的作用,5,25,50和100μmol/L的EGCG迁移细胞数目分别为414±27,299±70,202±42及116±13个,且EGCG的浓度与内皮细胞的迁移数目呈负相关(r=-0.952,p<0.05)。同时,内皮细胞形成小管的面积随EGCG浓度的升高而减少,25及50μmol/L时的面积分别是88343.9±3231.1和60897.5±914.1μm2,均明显低于对照组(p<0.01),小管面积与EGCG浓度呈负相关(r=-0.888,p<0.05)。5、25、50、100μmol/L的EGCG作用于KM3细胞48小时后培养上清中VEGF的含量分别为1399.0±47.4pg/ml,660.1±5.7pg/ml,108.5±5.8pg/ml和26.2±18.6pg/ml,与对照组比较,25、50、100μmol/L组均有统计学意义(p<0.01)。RT-PCR结果显示EGCG抑制KM3细胞VEGF的mRNA水平表达,且呈浓度依赖性。结论:EGCG能显著抑制多发性骨髓瘤细胞KM3的促血管新生作用;下调VEGF转录水平的表达,减少VEGF的分泌可能是其药理作用机制之一。     

齐拉西酮与利培酮治疗首发精神分裂症的疗效和安全性

目的观察齐拉西酮与利培酮对首发精神分裂症患者的治疗效果和不良反应,以更好地为精神分裂症患者进行治疗。方法选择2010年8月-2012年8月广州市脑科医院收治的首发精神病患者64例为研究对象,随机分为两组。对照组给予利培酮治疗,实验组给予齐拉西酮治疗,对比观察两组疗效和不良反应。结果实验组患者经治疗,其PANSS优于对照组患者,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);实验组不良反应发生率明显低于对照组(32例患者共发生14例),组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论使用齐拉西酮对首发精神病患者进行治疗可取得更好的治疗效果,且患者不良反应少,值得临床推广应用。     

老年退行性心脏瓣膜病患者合并心力衰竭特点分析

目的:探讨老年退行性心脏瓣膜病(SDHVD)合并心力衰竭(HF)的临床特点。方法:选择68例SDHVD合并HF的患者(SDHVD+HF组)与同期收治的无瓣膜钙化的老年HF患者62例(HF对照组)进行临床分析研究。结果:与HF对照组比较,SDHVD+HF组严重心功能不全比例(Ⅲ级:19.35%比38.24%,Ⅳ级:35.49%比55.88%)及房性早搏(17.74%比38.24%)、窦房传导阻滞(22.58%比50.00%)、心房纤颤(27.42%比52.94%)、短阵房性心动过速(30.65%比48.53%)、房室传导阻滞(33.87%比52.94%)、束支传导阻滞(25.81%比48.53%)发生率均明显升高(P0.05或0.01)。结论:老年退行性心脏瓣膜病患者合并心力衰竭时,其心力衰竭的程度加重,心律失常发生率升高。     

鬼臼乙叉甙(VP-16)治疗急性白血病

16例急性白血病患者接受鬼臼乙叉甙(VP-16)、阿糖胞苷(Ara-C)的治疗。10例为初治的M_4或M_5患者。5例有效,其中4例为CR,1例PR。另外6例是难治性白血病,包括1例慢粒急变,1例M_6(红-单细胞性),4例第一次或第二次复发者。他们之中仅三例获PR。鬼臼乙叉甙的副作用是骨髓抑制。     

不同代次骨髓间充质干细胞成骨分化潜能的体外研究

目的观察不同代次人骨髓间充质干细胞(MSC)体外成骨分化能力,为优化组织工程种子细胞提供更多参数。方法应用全骨髓直接贴壁法分离培养10例健康志愿者MSC,依照年龄将MSC分为4组,<20岁,20岁～,30～40岁,>40岁组。取P1(passage 1)～P5诱导成骨分化,诱导分化14d予以碱性磷酸酶染色,21d茜素红染色,Image-Pro Plus软件分析细胞染色阳性区域平均吸光度值。结果 <20岁组P1～P5成骨分化能力无显著差异(P>0.05);30～40岁组P3分化能力低于P1、P2(P<0.05);>40岁组P3分化能力下降更明显(P<0.05or P<0.01),P4、P5几乎分化受阻。结论不同代次的MSC分化能力具有异质性,与年龄有关。>40岁组MSC在超过P3代时,细胞倍增时间明显延长,诱导成功率降低,成骨分化潜能明显下降,选择P2代作为种子细胞更有利于细胞治疗的安全及质量控制。     

慢性粒细胞白血病骨髓间充质干细胞的分离及其支持造血的研究

目的探讨慢性粒细胞白血病（CML）患者骨髓间充质干细胞（MSCs）的分离以及体外支持造血的能力。方法采用细胞贴壁法获取16例CML患者的骨髓MSCs，在低血清培养液中培养和扩增。流式细胞仪检测免疫表型。通过油红O染色和Von Kossa染色检测MSCs向脂肪和骨的分化。逆转录聚合酶链法（RTPCR）检测bcr／abl融合基因的表达。对MSCs进行核型分析。RT-PCR检测细胞因子表达情况。将CML患者的骨髓MSCs作为滋养层，应用甲基纤维素半固体培养，检测其支持造血能力。结果CML来源的MSCs在倒置显微镜下为梭形，表达CD29、CD44、CD105，而CD14，CD31、CD34、CD45、HLA-DR均为阴性。在相应的诱导条件下可以向骨和脂肪分化。CML来源的MSCs不表达bcr／abl融合基因，具有正常细胞核型。CML来源的MSCs表达造血相关因子，在体外可以维持和扩增造血干／祖细胞。结论CML患者骨髓中存在具有多向分化能力的MSCs，其具有在体外支持造血的功能。     

安徽省六安市家禽家畜粪便中小肠结肠炎耶尔森菌的病原学研究

目的 通过对安徽省六安市家禽家畜粪便中小肠结肠炎耶尔森菌的病原学研究及流行病学分析,了解六安市家禽家畜感染的小肠结肠炎耶尔森菌的病原学特性和分布规律,为在六安市开展该菌的防控提供科学依据。方法 2015—2018年采集猪、狗、鸭、鹅等动物的粪便663份,进行小肠结肠炎耶尔森菌分离培养,对分离得到的菌株进行生化鉴定、血清型分型以及毒力基因等检测。结果 本项研究监测的663份家禽家畜粪便中,小肠结肠炎耶尔森菌总检出率为12.22%,其中猪粪的检出率最高,为23.49%,其他家禽家畜粪便中均有该菌的检出;猪粪的检出率与总检出率相比差异有统计学意义（P<0.01）,而各种粪便在各年度之间检出率差异无统计学意义;在致病性菌株中猪粪检出株占总致病性菌株的95.83%;致病性血清型主要为O:3型;致病性菌株毒力基因分布主要为基因Ⅲ型,基因Ⅲ型占总致病性基因型菌株的91.67%。结论 小肠结肠炎耶尔森菌在六安市家禽家畜粪便中普遍存在,该菌在家猪粪便的检出率最高,且致病性菌株携带率最高,致病性血清型为O:3型和O:9型。