纤维介素基因启动子的基因多态性与重型乙型肝炎关系的研究

近年小鼠暴发性肝炎和人重型肝炎的研究表明 ,纤维介素 (fgl2 )的高表达是重型乙型肝炎肝细胞坏死的重要分子机制。我们运用单链构象多态性 (singlestrainconstructionpolymorphism ,SSCP)分析方法对重症乙型肝炎患者、乙型肝炎病毒携带者以及健康人hfgl2基因启动子的基因多态性进行了研究。4 0例标本均收集于华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科 ,其中重型乙型肝炎患者 2 1例 (男性 14例 ,女性 7例 ,平均年龄 37.5岁 ) ,乙型肝炎病毒携带者 15例 (男性 10例 ,女性 5例 ,平均年龄 33.2岁 ) ,健康人 4例 (男性 3例 ,女性 1例 ,平均年…     

恶性肿瘤组织中人纤维介素的表达及作用

目的研究恶性肿瘤患者病理组织中人纤维介素（human fibrinogen-like protein2，hfgl2）的表达及与纤维蛋白沉积的关系。方法采用免疫组化方法检测了11例结肠癌、15例宫颈癌、10例乳腺癌、9例食管癌、12例肺癌、16例胃癌患者的病理组织切片中hfgl2及纤维蛋白的表达，分析二者的组织学关系，用RT-PCR方法检测了部分肿瘤组织与肿瘤细胞系中的hfgl2 mRNA。结果免疫组化显示hfgl2在上述肿瘤中均有表达，主要分布于间质浸润细胞、肿瘤实质细胞、肿瘤血管内皮细胞及细胞外基质，且在邻近有明显的纤维蛋白沉积。通过RTPCR，在体外培养的数种肿瘤细胞系中未检出hfgl2 mRNA，但在肿瘤组织中检出hfgl2 mRNA表达明显高于正常组织。结论恶性肿瘤时存在hfgl2的高表达，并且可能与肿瘤高凝状态的形成及肿瘤的演进有关。     

X-连锁肾上腺脑白质营养不良患者氢质子核共振波谱特征及其临床意义

目的研究X-连锁肾上腺脑白质营养不良(X-ALD)患者的氢质子核共振波谱(1HMRS)特点及其在早期诊断中的作用和意义。探讨血极长链脂肪酸(VLCFA)水平、1HMRS表现与疾病的关系。观察Lorenzo油治疗后患者VLCFA水平、1HMRS的变化情况。方法7例患者均测定VLCFA水平,对其中6例在MRI定位下选定病变明显区、病变周围区及似正常区行1HMRS检测,计算N-乙酰天冬氨酸(NAA)、肌酐(Cr)、胆碱复合物(Cho)的峰面积及NAA/Cr、Cho/Cr和NAA/Cho比值。其中2例患者(1例尚未出现临床症状,1例已经发病)于Lorenzo油治疗3个月后复查VLCFA水平及1HMRS波谱。结果NAA/Cr在病变明显区比病变周围区明显降低(1.32±0.57,2.01±0.33,P<0.05),Cho/Cr在病变周围区比似正常区明显升高(2.34±0.34,1.83±0.25,P<0.05)。VLCFA水平不能反映病变的严重程度,Lorenzo油治疗3个月后患者VLCFA下降,1HMRS波谱显示未出现临床症状者中枢脱髓鞘明显减轻,已出现临床症状者波谱变化不大。结论1HMRS对X-ALD的早期诊断有重要帮助,可以先通过MRI发现中枢神经系统的脱髓鞘病变,在MRI表现正常区代谢产物已有改变,MRI和1HMRS表现可以直接反映病变的严重程度。VLCFA水平与病变的严重程度没有相关性。早期口服Lorenzo油可以延缓疾病进展,改善症状。     

免疫系统在病毒性肝炎肝脏损伤中的作用

在病毒性肝炎疾病中,免疫介导的肝损伤在肝脏损害初期起着主要作用。其介导肝损害的主要机制是细胞介导的细胞毒作用,后者主要通过颗粒胞吐作用和死亡受体两条途径杀伤靶细胞。细胞毒性淋巴细胞作用的时期及与之相关联的其他免疫反应的发生很可能在决定病毒性肝炎急性肝损伤的严重性中起着重要作用。本文就免疫系统在病毒性肝炎肝损伤中的作用及机制研究进展作一介绍。概述在急、慢性病毒性肝炎[1,2]的肝损害的研究中,国内外学者所观察到的炎性浸润和肝细胞损伤的模式强烈表明,免疫系统介导的肝脏损伤是首要机制。大部分肝炎病毒是非致细胞病变性病毒,它们并不直接诱导肝脏损伤,而是通过诱导宿主的细胞病变免疫反应杀伤病毒感染的肝细胞[3-5]。在病毒性肝炎免疫诱导肝损伤疾病中,针对病毒抗原的抗体反应是最易辨认的特征。然而涉及到病毒性肝炎中肝外免疫复合物介导的肝脏疾病时,这些抗体反应在相应肝损伤中的作用并不是十分显著。细胞因子则在针对病毒抗原的天然免疫和特异性免疫中起着重要作用。由于α、β型干扰素可以通过非细胞病变机制介导多种抗病毒效应,因此在急性病毒性肝炎中被视为最大的保护因素,它们可以先于或在细胞毒性T细胞发挥作用的同时降低病毒滴度[2]。其它的...     

MHV-3诱导的暴发性肝炎小鼠肝脏和慢加急性肝衰竭患者外周血单个核细胞 TLR2表达的变化

目的：研究慢性乙型肝炎患者和慢加急性乙型肝炎肝衰竭（HBV-ACLF）患者外周血单个核细胞（PBMC）Toll 样受体2（TLR2）表达,以及鼠三型肝炎病毒（MHV-3）诱导的暴发性肝炎小鼠肝脏 TLR2表达的变化。方法收集慢性乙型肝炎和 HBV-ACLF 患者外周血,分离 PBMC,采用实时定量 PCR 法检测 PBMC 中 TLR2 mRNA;给 Balb/cJ 小鼠腹腔注射MHV-3（100 pfu）,建立小鼠暴发性肝炎模型,观察感染0、24、48和72 h 后肝脏TLR2水平变化。结果 BALB/cJ 小鼠在感染 MHV-3后,与0 h[（0.39±0.06）%]比,肝细胞 TLR2 mRNA 水平在感染48和72 h 均显著升高[分别为（9.06±1.60）%和（6.42±2.42）%,P＜0.05）],并于48 h 达最高水平,且两时间点细胞 TLR2 mRNA 水平均与血清 ALT 和 AST 水平呈正相关（r=0.804,P＜0.01;r=0.797,P＜0.01）;HBV-ACLF患者 PBMC 中 TLR2 mRNA 水平显著高于慢性乙型肝炎患者[（5.92±5.26）%对（1.15±1.59）%,P＜0.05）]。结论 TLR2参与了 MHV-3诱导的暴发性肝炎小鼠以及 HBV-ACLF 患者肝脏损伤的发病过程。     

Detection of HBV and HCV Coinfection by TEM with Au Nanoparticle Gene Probes

Gold(Au) nanoparticle HBV DNA or HCV cDNA gene probes were prepared and were used to detect HBV DNA and HCV RNA extracted from positive serum of patients with HBV and HCV coinfection directly by transmission electron microscopy(TEM).PCR identifying HBV and HCV in serum of patients with HBV and HCV coinfection was established.Alkanethiol-modified oligonucleotide was bound with self-made Au nanoparticles to form nanoparticle HBV DNA or HCV cDNA gene probes through covalent binding of Au-S.HBV DNA and HCV RNA extracted from positive serum of patients with HBV and HCV coinfection was added to the detection system composed of nanoparticle HBV DNA and(or) HCV cDNA gene probes.The results showed that HBV DNA and HCV RNA could be specifically amplified by PCR.The zones of DNA amplification appeared in 431 bp and 323 bp respectively.When HBV DNA and HCV RNA extracted from positive serum of patients with HBV and HCV coinfection were added to the detection system,TEM displayed the nanoparticles self-assembled into large network aggregates.It was concluded that the detection of HBV and HCV coinfection by TEM was convenient and efficient with high specificity and sensitivity.     

TGF-β_1在MHV-3诱导的小鼠暴发型肝炎模型中的表达研究

目的检测MHV-3诱导的小鼠暴发型肝炎模型中肝脏和外周血中的TGF-β1表达水平,探讨该疾病模型中TGF-β1的变化及其与疾病进程的关系。方法通过腹腔注射MHV-3感染BALB/cJ小鼠诱导暴发型肝炎,采用ELISA检测血清TGF-β1表达水平改变,实时定量聚合酶链反应及免疫组织化学检测肝脏组织TGF-β1水平变化。结果BALB/cJ小鼠感染MHV-3后,小鼠血清TGF-β1表达水平于感染72 h显著升高,与之相应的是小鼠肝脏内TGF-β1水平于感染72 h显著升高。结论 MHV-3诱导的小鼠暴发型肝炎模型中TGF-β1的表达在血清和肝脏中均显著升高,提示TGF-β1可能参与免疫诱导的肝细胞损伤的病理过程。本研究为进一步阐明小鼠暴发型肝炎的发病机制提供更充分的理论基础。     

小鼠暴发型病毒性肝炎肝组织基因表达谱的分析

目的 分析小鼠暴发型病毒性肝炎肝组织基因表达谱,初步确定参与暴发型病毒性肝炎发病分子机制的相关基因.方法 100 PFU 3型鼠肝炎病毒(MHV-3)感染Balb/cJ小鼠,建立了暴发型病毒性肝炎模型,同等量病毒感染A/J小鼠后24 h取肝组织作为对比分析标本.应用含有16 463条Oligo DNA的小鼠基因表达芯片,检测两组小鼠间的基因差异表达谱.荧光定量逆转录聚合酶链反应法检测目标基因H2-EA的表达变化,验证芯片分析的初步结果.结果 MHV-3感染Balb/cJ小鼠和A/J小鼠后其肝组织差异表达基因共140条,包括细胞代谢、细胞信号、细胞运输,转录调控以及免疫相关类等基因.其中2倍以上差异表达基因中与免疫功能密切相关的基因22条.结论 暴发型肝炎过程中宿主基因表达谱发生了变化,共同参与了免疫致病机制,其中主要为细胞代谢和免疫相关类基因.     

小鼠严重急性呼吸综合征样模型相关肝脏损伤的研究

目的 通过动态监测小鼠严重急性呼吸综合征（SARS）样模型肝脏的组织病理学变化和病毒分布情况，进一步结合肝内凝血酶原酶（fg12）的表达和纤维素沉积现象来探讨SARS肝脏损伤的可能机制及其临床意义。方法实验组Balb／cJ近交系小鼠气管途径感染100PFU鼠肝炎3型病毒（MHV-3），平行设立0．9％氯化钠溶液对照组，动态观察感染后两组小鼠的一般情况、组织脏器的病理学改变和肝功能损伤情况。标准噬斑法和原位杂交技术检测实验组小鼠组织器官的病毒分布情况。结合感染后肝组织中纤维素的表达，分别从蛋白和基因转录水平探讨fg12作为一种促炎症因子在SARS肝损伤中的作用。结果实验组小鼠5d内死亡率高达100％，组织病理学观察发现病变可累及多个脏器，其中肝脏小叶结构基本完整，肝细胞弥漫混浊肿胀，大面积气球样变和水样变，汇管区少量淋巴细胞浸润，偶见中央静脉周围肝细胞的点灶状坏死；肺脏呈现典型间质性肺炎样改变伴透明膜、微小血栓形成；非特异性炎性改变亦见于脾脏、肾脏等其他脏器。噬斑试验和原位杂交显示病毒可侵犯所有收集的组织脏器。随着感染时间的延长，小鼠肝脏功能受损，fg12（mfg12）转录和表达可出现在感染肝脏的坏死区域，周围伴有纤维素沉积。对照组小鼠全部健康存活。结论利用MHV-3成功建立了小鼠SARS样模型，并提示其肝脏损伤在病理学改变和病变程度上均类似于人类SARS合并的非特异性肝炎，除病毒本身所致的肝细胞病变，mfg12在感染后肝组织中的特异性表达及其诱导的纤维素沉积可能是造成肝脏损伤的又一重要因素。