小鼠严重急性呼吸综合征样模型相关肝脏损伤的研究

目的 通过动态监测小鼠严重急性呼吸综合征（SARS）样模型肝脏的组织病理学变化和病毒分布情况，进一步结合肝内凝血酶原酶（fg12）的表达和纤维素沉积现象来探讨SARS肝脏损伤的可能机制及其临床意义。方法实验组Balb／cJ近交系小鼠气管途径感染100PFU鼠肝炎3型病毒（MHV-3），平行设立0．9％氯化钠溶液对照组，动态观察感染后两组小鼠的一般情况、组织脏器的病理学改变和肝功能损伤情况。标准噬斑法和原位杂交技术检测实验组小鼠组织器官的病毒分布情况。结合感染后肝组织中纤维素的表达，分别从蛋白和基因转录水平探讨fg12作为一种促炎症因子在SARS肝损伤中的作用。结果实验组小鼠5d内死亡率高达100％，组织病理学观察发现病变可累及多个脏器，其中肝脏小叶结构基本完整，肝细胞弥漫混浊肿胀，大面积气球样变和水样变，汇管区少量淋巴细胞浸润，偶见中央静脉周围肝细胞的点灶状坏死；肺脏呈现典型间质性肺炎样改变伴透明膜、微小血栓形成；非特异性炎性改变亦见于脾脏、肾脏等其他脏器。噬斑试验和原位杂交显示病毒可侵犯所有收集的组织脏器。随着感染时间的延长，小鼠肝脏功能受损，fg12（mfg12）转录和表达可出现在感染肝脏的坏死区域，周围伴有纤维素沉积。对照组小鼠全部健康存活。结论利用MHV-3成功建立了小鼠SARS样模型，并提示其肝脏损伤在病理学改变和病变程度上均类似于人类SARS合并的非特异性肝炎，除病毒本身所致的肝细胞病变，mfg12在感染后肝组织中的特异性表达及其诱导的纤维素沉积可能是造成肝脏损伤的又一重要因素。     

肝脏自然杀伤细胞在小鼠急性肝衰竭中的作用

目的 探讨肝脏自然杀伤(NK)细胞在3型鼠肝炎病毒(MHV-3)诱导的小鼠急性肝衰竭中的作用.方法 取6～8周龄雌性Balb/cJ小鼠,腹腔注射100 pfu MHV-3,采用流式细胞术检测感染MHV-3 0、24、48、70 h后的Balb/cJ小鼠肝脏、脾脏、外周血和骨髓中NK细胞的百分率及肝脏NK细胞表面活化分子CD69表达的百分率.细胞内细胞因子染色法检测肝脏NK细胞分泌干扰素γ的水平.非放射性细胞毒试验检测肝脏NK细胞的杀伤活性. 结果Balb/cJ小鼠感染MHV-3后,肝脏NK细胞的比例显著升高,在感染48 h后达到峰值(43.9%±2.3%),约为感染前的4倍,随后仍维持在较高水平至小鼠死亡;外周血NK细胞比例同样明显升高,在感染48 h后达到峰值(18.0%±5.4%),但随后显著同落,至70 h仅为1.3%±0.6%,脾脏和骨髓NK细胞比例均先明显减少后又有所上升.肝脏NK细胞在MHV-3感染48 h后其表面活化分子CD69表达明显上调,杀伤活性显著增强,同时分泌干扰素Y的水平也显著增加. 结论 Balb/cJ小鼠感染MHV-3后,来自骨髓和脾脏的NK细胞在肝脏迅速大量募集和活化,且杀伤活性显著增强,分泌干扰素Y水平也显著增加,表明肝脏NK细胞在MHV-3导致的急性肝衰竭中可能发挥着关键作用.     

免疫系统在病毒性肝炎肝脏损伤中的作用

在病毒性肝炎疾病中,免疫介导的肝损伤在肝脏损害初期起着主要作用。其介导肝损害的主要机制是细胞介导的细胞毒作用,后者主要通过颗粒胞吐作用和死亡受体两条途径杀伤靶细胞。细胞毒性淋巴细胞作用的时期及与之相关联的其他免疫反应的发生很可能在决定病毒性肝炎急性肝损伤的严重性中起着重要作用。本文就免疫系统在病毒性肝炎肝损伤中的作用及机制研究进展作一介绍。概述在急、慢性病毒性肝炎[1,2]的肝损害的研究中,国内外学者所观察到的炎性浸润和肝细胞损伤的模式强烈表明,免疫系统介导的肝脏损伤是首要机制。大部分肝炎病毒是非致细胞病变性病毒,它们并不直接诱导肝脏损伤,而是通过诱导宿主的细胞病变免疫反应杀伤病毒感染的肝细胞[3-5]。在病毒性肝炎免疫诱导肝损伤疾病中,针对病毒抗原的抗体反应是最易辨认的特征。然而涉及到病毒性肝炎中肝外免疫复合物介导的肝脏疾病时,这些抗体反应在相应肝损伤中的作用并不是十分显著。细胞因子则在针对病毒抗原的天然免疫和特异性免疫中起着重要作用。由于α、β型干扰素可以通过非细胞病变机制介导多种抗病毒效应,因此在急性病毒性肝炎中被视为最大的保护因素,它们可以先于或在细胞毒性T细胞发挥作用的同时降低病毒滴度[2]。其它的...     

fgl2凝血酶原酶多肽抗体的制备和应用

目的　利用人工合成多肽制备针对人源、鼠源fgl2凝血酶原酶 (hfgl2、mfgl2 )的特异性多克隆抗体 ,以期用于与fgl2表达异常密切相关的疾病的研究和诊治。方法　根据mfgl2、hfgl2基因编码的氨基酸序列合成多肽 3(Pep3)和多肽 4 (Pep4 ) ,并用化学方法与匙孔血蓝蛋白 (KLH)连接 ,纯品Pep3 KLH和Pep4 KLH免疫动物 ,所制备的抗血清用ELISA、Westernblot和前凝血质活性 (PCA)实验鉴定 ,并采用免疫组化法应用于乙型肝炎患者肝组织中hfgl2的检测。结果　ELISA检测表明 ,所制备的抗血清可分别与Pep3和Pep4发生特异性免疫反应 ;Westernblot结果显示 ,抗血清可识别MHV 3感染BALB cJ小鼠腹腔巨噬细胞特异性条带 ,相对分子质量 (Mr)为 6 5× 10 3;PCA实验提示 ,抗血清具有中和mfgl2分子酶活性的作用。对病毒性乙型肝炎患者肝组织免疫组织化学染色发现hfgl2仅在重型乙型肝炎患者高表达 ,而在慢性乙型肝炎和肝硬化患者的肝组织中无表达。结论　所制备的fgl2的多肽抗体 (多克隆抗体 )可识别mfgl2和hfgl2分子 ,具有与抗原特异性结合、中和其酶活性的特征 ,为深入研究这一新发现的分子提供了有力的科学手段。     

小鼠暴发型病毒性肝炎肝组织基因表达谱的分析

目的 分析小鼠暴发型病毒性肝炎肝组织基因表达谱,初步确定参与暴发型病毒性肝炎发病分子机制的相关基因.方法 100 PFU 3型鼠肝炎病毒(MHV-3)感染Balb/cJ小鼠,建立了暴发型病毒性肝炎模型,同等量病毒感染A/J小鼠后24 h取肝组织作为对比分析标本.应用含有16 463条Oligo DNA的小鼠基因表达芯片,检测两组小鼠间的基因差异表达谱.荧光定量逆转录聚合酶链反应法检测目标基因H2-EA的表达变化,验证芯片分析的初步结果.结果 MHV-3感染Balb/cJ小鼠和A/J小鼠后其肝组织差异表达基因共140条,包括细胞代谢、细胞信号、细胞运输,转录调控以及免疫相关类等基因.其中2倍以上差异表达基因中与免疫功能密切相关的基因22条.结论 暴发型肝炎过程中宿主基因表达谱发生了变化,共同参与了免疫致病机制,其中主要为细胞代谢和免疫相关类基因.     

恶性肿瘤组织中人纤维介素的表达及作用

目的研究恶性肿瘤患者病理组织中人纤维介素（human fibrinogen-like protein2，hfgl2）的表达及与纤维蛋白沉积的关系。方法采用免疫组化方法检测了11例结肠癌、15例宫颈癌、10例乳腺癌、9例食管癌、12例肺癌、16例胃癌患者的病理组织切片中hfgl2及纤维蛋白的表达，分析二者的组织学关系，用RT-PCR方法检测了部分肿瘤组织与肿瘤细胞系中的hfgl2 mRNA。结果免疫组化显示hfgl2在上述肿瘤中均有表达，主要分布于间质浸润细胞、肿瘤实质细胞、肿瘤血管内皮细胞及细胞外基质，且在邻近有明显的纤维蛋白沉积。通过RTPCR，在体外培养的数种肿瘤细胞系中未检出hfgl2 mRNA，但在肿瘤组织中检出hfgl2 mRNA表达明显高于正常组织。结论恶性肿瘤时存在hfgl2的高表达，并且可能与肿瘤高凝状态的形成及肿瘤的演进有关。     

自身免疫性肝炎患者外周血CD8~+T淋巴细胞PD-1表达及意义

目的研究自身免疫性肝炎患者外周血CD8+T淋巴细胞程序性死亡受体1(PD-1)表达的变化。方法选择自身免疫性肝炎患者22例和健康人20例,使用流式细胞仪检测所有被研究者外周血CD8+T淋巴细胞PD-1分子的表达状况,比较不同分期和不同性别疾病患者PD-1表达水平。结果自身免疫性肝炎患者外周血CD8+T淋巴细胞PD-1分子阳性百分比为2.5±0.5%,显著高于健康对照组(0.5±0.1%,P<0.001);自身免疫性肝炎发病期患者CD8+T淋巴细胞表达PD-1百分比为2.6±0.7%,与缓解期比无统计学差异(3.4±0.8%);16例女性AIH患者外周血CD8+T淋巴细胞PD-1阳性百分比为3.5±0.7%,亦略高于6例男性患者的1.3±0.3%,但无显著统计学差异(P=0.1021),可能与例数较少有关。结论自身免疫性肝炎患者CD8+T淋巴细胞PD-1表达率增加,PD-1可能在自身免疫性肝炎的发病中起了重要作用。     

TCRγδ+CD3+CD4-CD8-双阴性T细胞在3型鼠肝炎病毒诱导的小鼠慢性病毒性肝炎发病中的作用

目的本研究拟探讨在MHV-3诱导的慢性病毒性肝炎模型小鼠外周血和脾脏TCRγδ+DNT细胞在T淋巴细胞中比例变化以及其主要表面分子标记的变化。方法取60只C3H/Hej小鼠,腹腔注射10pfu MHV-3;应用流式细胞仪三色或四色荧光分析法分别检测小鼠外周血和脾脏TCRγδ+DNT细胞在T淋巴细胞中的比例及其CD25、CD28、CD30和CD44表达的变化。结果 MHV-3诱导的慢性病毒性肝炎小鼠各时间点外周血和脾脏TCRγδ+DNT在T淋巴细胞中的比例较对照组显著升高(P<0.05);在感染后10天达到最高峰:外周血和脾脏TCRγδ+DNT细胞占T淋巴细胞的比例分别为4.8±1.5%和4.5±1.3%;模型小鼠外周血和脾脏TCRγδ+DNT细胞的表型均为TCRγδ+CD3+CD4-CD8-CD25-CD28-CD30-CD44+。结论感染MHV-3后C3H/Hej小鼠体内TCRγδ+DNT细胞的数量增加,提示TCRγδ+DNT细胞参与了MHV-3诱导的小鼠慢性病毒性肝炎的发生和发展过程。