高活性人重组双体GM—CSF在大肠杆菌的表达和鉴定

利用基因融合与基因工程技术,将两个粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)基因经白细胞介素—3(IL—3)的N端亲水序列串联起来,插入表达质粒载体,在大肠杆菌中高效表达出含凝血酶识别序列的MS2—双体GM—CSF融合蛋白。表达蛋白经凝血酶消化后,可去除MS2细菌蛋白,获高活性的双体GM—CSF分子(G2)。利用GM—CSF依赖性细胞株TF—1检测活性表明,G2的比活性高于单体GM—CSF的10倍以上,为研制新一代GM—CSF提供了新的途径。     

TFAR19蛋白在卵巢上皮性癌中的表达

目的探讨TFAR19蛋白在卵巢上皮性癌组织中的表达情况及关系。方法应用免疫组化方法检测TFAR19蛋白在79例卵巢上皮性癌组织(其中浆液性腺癌33例,粘液性腺癌13例,子宫内膜样腺癌11例,其他类型卵巢上皮性癌22例),33例卵巢良性肿瘤组织(其中浆液性腺瘤18例,粘液性腺瘤13例,其他良性肿瘤2例)及11例正常卵巢组织中的表达。结果39.24％的卵巢上皮性癌、81.82％的正常卵巢上皮、75.76％的卵巢良性肿瘤组织中TFAR19蛋白呈强阳性表达,卵巢上皮性癌与卵巢良性肿瘤组织及正常卵巢上皮相比差异有显著性(P<0.05)。不同FIGO分期(1986年)卵巢上皮性癌中强阳性表达比例分别为FIGO I期:80％,FICOⅡ期45.45％,FIGOⅢ期31.25％,FIGOⅣ期30％;不同组织学分级卵巢上皮性癌中TFAR19的强阳性表达分别为G1期62.5％,G2期50％,G3期29.79％;卵巢粘液性癌组织中TFAR19蛋白的强阳性表达明显高于浆液性腺癌与子宫内膜样癌。结论TFAR19蛋白的表达与卵巢上皮性癌的FIGO分期、组织学分级、病理类型相关。随FIGO分期与组织学分级升高,TFAR19蛋自的表达下调。TFAR19蛋白可能是卵巢上皮性癌细胞细胞凋亡的重要调控因子。     

重组促凋亡蛋白TFAR19对CNE-1细胞凋亡影响的初步研究

目的探讨重组凋亡蛋白TFAR19对鼻咽癌细胞株CNE-1的促凋亡效应。方法将不同浓度的高纯度重组凋亡蛋白TFAR19分别和人类鼻咽癌细胞株CNE-1共同培养,通过细胞形态学观察,TUNEL检测及DNA片断化分析,观察TFAR19对细胞的促凋亡效应。结果不同浓度TFAR19蛋白均可促进细胞凋亡,加入5、10、15、20、30 mg/L的TFAR19蛋白后,鼻咽癌细胞株CNE-1的凋亡率分别是:15.26%、29.48%、37.11%、54.20%、72.36%。阴性对照组的细胞凋亡率为12.40%。结论TFAR19蛋白可直接进入CNE-1细胞并明显促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性。     

细胞凋亡与肿瘤生物治疗

细胞凋亡的研究已成为生命科学研究的一个新热点.从文献浏览来看,目前国际凋亡研究的热点已集中在发现新的凋亡分子和新的凋亡信号转导途径的分析,同时,基于促凋亡机理的肿瘤生物治疗研究也有重要的进展.过去,在传统的肿瘤治疗中,有相当大比例的放、化疗机理是通过促进肿瘤细胞的凋亡达到治疗肿瘤的目的,但同时往往造成对正常细胞的损害.新一代基于促凋亡机理的肿瘤生物治疗方案是选择具有高度选择性地促肿瘤细胞凋亡的生物技术药物,通过直接诱导肿瘤凋亡或抑制肿瘤的抗凋亡分子达到治疗目的.例如,TNF-α突变体、TRAlL、P53基因,针对Bcl-2,Bas,Raf,Myb的反义寡核苷酸等已进入临床实验,为肿瘤生物治疗开辟了新的领域.为促进基于凋亡的肿瘤生物治疗研究,有必要加强对凋亡机理的基础研究,进一步探讨凋亡分子间的相互作用,发现新的重要凋亡分子或促凋亡药物作用的靶分子.本综述重点介绍凋亡的基     

机遇与挑战——面向21世纪的中国心血管分子生物学

近20年来,分子生物学取得了飞速的发展,随着人类基因组计划的实施和完成,医学生物学正面临着一次更深刻的革命。面对21世纪,总结过去,展望未来,中国的心血管分子生物学,应该为我国的医学生物学做出更大的贡献;中国的心血管分子生物学,必须走向世界,为世界医学和人类的健康,做出它应有的贡献。一、历史的回顾我国的心血管分子生物学,起步较晚,基础较差。在我国,1985年才发表了第一篇心血管分子生物学的论文———高血压大鼠心肌心钠素基因的表达;1986年才获得国家第一批基金的资助———心钠素/ｔｐＡ的基因工程(八六三计划)和心血管病的分子…     

新细胞因子及细胞凋亡基因的发现与功能研究

在人类基因组完成工作框架图以后,人类功能基因组学成为最重要的任务之一.我们目前正在重点研究编码细胞因子和凋亡相关分子的人类功能基因.本综述介绍其中的2个首先由我们实验室克隆的分子,即趋化素样因子1(CKLF1)和程序化细胞死亡分子5(PDCD5,过去命名为TFAR19).CKLF1是属于一个新的基因超家族的成员,具有体内外对不同白细胞的趋化活性、刺激骨骼肌增殖活性和刺激骨髓细胞增殖活性.在临床应用上,重组CKLF1蛋白质有可能用于肌萎缩的治疗,CKLF1抑制剂有可能用于变态反应和自身免疫病的治疗.PDCD5是凋亡的正调节分子,能够结合胱天蛋白酶-3,并在体外延长其半衰期.较多证据表明,PDCD5在肿瘤组织的表达低于正常组织.PDCD5有可能成为肿瘤、自身免疫病的标志或作为一种治疗靶点.     

雌激素受体α和β及其变异体在子宫内膜癌组织的表达

目的:比较雌激素受体两种亚型α和β及其变异体在子宫内膜癌组织的表达,验证子宫内膜癌发生的双受体学说,为寻找新的有治疗和/或预防子宫内膜癌的雌激素拮抗剂提供理论依据.方法:用RT-PCR、DNA测序和限制性内切酶酶切鉴定等方法分析子宫内膜癌和正常子宫内膜组织雌激素受体及其变异体mRNA的表达.结果:(1) 与正常子宫内膜组织比较,子宫内膜癌组织ERα及其变异体与ERβ的共表达率分别为34%和67%,差异有显著性,(P<0. 05);(2) ERαm RNA在子宫内膜癌组织的相对表达水平为0.880±0.168,ERβmRNA为0.553±0.108 ,差异显著 (P<0.05);(3) 在正常子宫内膜和子宫内膜癌组织中未检测出ERβ变异体.(4)野生型( wild-type, wt)ERαmRNA表达水平较各类△ERαmRNA表达高(P<0.05或0.01);(5) ERα变异体的类型包括△2ER α单独缺失、△4ERα和△5ERα的联合缺失、△7ERα的单独缺失以及△7ERα和部分△8ERα的联合缺失 ,在正常子宫内膜和子宫内膜癌组织无区别.结论:(1) 子宫内膜癌的发生受wt ERβ和wt ERα及其变异体的共调节;(2) 子宫内膜癌组织ERα的表达水平明显高于ERβ,而且ERα有4种剪接形式,推测子宫内膜癌的发生与ERα关系更密切.     

人TFAR19的定点突变及其重组蛋白的表达、纯化和功能分析

目的:了解凋亡相关新基因TFAR19编码蛋白分子中潜在的Ser100磷酸化位点与其促凋亡效应的关系.方法:利用重叠延伸PCR定点突变技术构建TFAR19 Ser100→Ala100突变体,用DNA测序技术验证,大肠杆菌表达,离子交换技术纯化重组突变蛋白,将其加入培养的白血病细胞株HL-60,通过PI染色,流式细胞仪分析,观察突变重组蛋白的促凋亡效应.结果:构建成TFAR19 Ala100突变体,并经DNA测序所证实,在大肠杆菌中获得了高水平表达,Western blot表明突变型重组蛋白与野生型具有相同的免疫学活性,流式细胞仪分析发现突变蛋白对撤除血清的HL-60细胞具有与野生蛋白相似的剂量依赖性促凋亡效应. 结论:TFAR19 分子中潜在的Ser100磷酸化位点对其促凋亡效应无影响,提示TFAR19发挥其生物学活性时无需cAMP和cGMP依赖的蛋白激酶活化.     

白细胞介素—1受体拮抗剂对小鼠油酸型肺损伤的保护作用

３６只小鼠分为对照组，油酸肺损伤组及白细胞介素－１受体拮抗剂保护组，每组１２只，油酸由小尾静脉注入，保护组洲入上述拮抗剂后再给予油酸。结果表明，保护组肺系数，肺湿／干重比值较低，支气管肺泡灌洗液总蛋白量较少，ＰａＯ２较高，肺组织学改变（肺泡水肿，肺泡出血，肺坏死，炎症细胞浸润）明显减轻。认为该拮抗剂对油酸型肺损伤有保护作用，从而为其在成人型呼吸窘迫综合征中的临床应用提供一定依据。     

醒脑益智组分中药对AD大鼠学习记忆及氧化应激-凋亡相关研究

目的： 观察醒脑益智组分中药对阿尔茨海默病（AD）模型大鼠学习记忆功能的影响及对氧化应激-凋亡相关机制的调控。方法： 采用D-半乳糖（D-gal）腹腔注射联合β-淀粉样蛋白1-40（Aβ_1-40）海马内注射的复合造模方法建立AD动物模型,实验分为假手术组、AD模型组、石杉碱甲0.05 mg·kg^-1组、醒脑益智组分中药179.2、89.6、44.8 mg·kg^-1组。以Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,苏木-伊红（HE）染色观察大鼠脑组织病理学形态变化,酶联免疫吸附试验（ELisa法）检测脑组织及血清超氧化物歧化酶（SOD）活力、脂质过氧化物丙二醛（MDA）含量,免疫组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3的表达。结果： 与模型组比较,各给药组大鼠逃避潜伏期降低,穿台次数增加,穿越第四象限的路程百分比也均有提高,以阳性药物和高、中剂量组作用有显著性差异（P<0.05）;各给药组能明显改善AD大鼠脑部神经元细胞形态;药物高、中剂量组能使AD大鼠脑组织及血清中SOD活性提高,MDA含量明显降低（P<0.05）,Bcl-2表达量升高,Caspase-3表达量减少。结论： 醒脑益智组分中药对复合造模致AD模型大鼠学习记忆障碍具有一定改善作用,这可能与抗氧化及抗凋亡的脑保护作用有关。