抑制性底物杂交(SSH)技术研究BXSB小鼠的差异表达基因

目的：利用抑制性底物杂交技术（Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＳＳＨ），以ＢＸＳＢ狼疮小鼠为模型，研究系统性红斑狼（ＳＬＥ）发病相关基因。方法：分离ＢＸＳＢ和Ｃ５７－ＢＬ－６小鼠骨髓细胞，ｍＲＮＡ，反转录构建ｃＤＮＡ文库，利用技术研究ＢＸＳＢ小鼠差异表达基因。结果：获得了１２个阳性克隆，其中有３个克隆编码ＴＣＲ、ＭＨＣⅡ类分子及逆转录病毒基因表达产物，均     

人趋化因子受体CCR4的克隆与表达

目的：建立pcDI-CCR4稳定转染并具有CCR4功能性表达的细胞株,为深入研究CCR4配体提供基础。方法：利用RT－PCR技术进行人CCR4的cDNA克隆化。通过基因转染技术获得稳定转染细胞株,利用趋骅实验、钙流实验证实稳定转染细胞能有效表达CCR4并具有生物功能。结果：成功地将CCR4 cDNA克隆于真核表达质粒pcDI,转染HEK293细胞获得稳定表达CCR4的HEK293细胞,可被RANTES诱导产生趋化反应和钙内流反应。结论：建立的pcDI－CCR4稳定转染细胞株能有效表达CCR4并具有生物功能。     

无环鸟苷亲脂性前体药物脂质体的制备及体外抗病毒活性(英文)

本文通过将无环鸟苷(acyclovir,简称ACV)2’位羟基分别与月桂酰氯或棕榈酰氯进行酯化反应,制得亲脂性前体药物无环鸟苷月桂酸酯和无环鸟苷棕榈酸酯(分别简称为C_(12)-ACV和C_(16)-ACV),使脂质体包封率从ACV的29.9％提高到C_(12)-ACV的95.6％和C_(16)-ACV的97.1％;漏泄实验表明在4℃透析60h后,一半以上的ACV从脂质体中漏泄,而C_(12)-ACV和C_(16)-ACV的滞留率分别为70％和80％;体外抗疱疹病毒的试验中,在最低试验浓度0.044μmol/L时,ACV不显示抗病毒活性,而C_(16)-ACV脂质体抑制细胞病变率达75％,说明前体药物通过与脂质体脂膜的结合增加了药物的进入细胞能力,从而提高了ACV的抗病毒能力。     

CMTM1-v17/CKLFSF1-v17多克隆抗体的制备、亲合纯化与鉴定

目的：CMTM1-v17是我室克隆的人类新基因，为进一步研究CMTM1-v17的功能，需制备高纯度的CMTM1-v17的抗体。方法：根据生物信息学分析的结果，用PCR法扩增人CMTM1-v17分子C端的cDNA片段（编码118～149位氨基酸），亚克隆到GST融合蛋白表达载体pGEX-4T-2上。将重组质粒pGST-CMTM1-v17导入大肠杆菌BL21，诱导表达GST-CMTM1-v17 C端融合蛋白，经GST亲合层析、凝血酶切割后获得CMTM1-v17 C蛋白作为抗原免疫家兔制备抗血清。抗血清经抗原亲合层析后用Western blot和免疫组化方法进行鉴定。结果：通过重组表达获得抗原蛋白，免疫家兔并纯化抗血清得到特异的抗CMTM1-v17抗体，该抗体能检测到CMTM1-v17超表达和细胞内源性的蛋白。结论：成功制备了抗CMTM1-v17的多克隆抗体，对进一步研究CMTM1-v17的功能提供了一个有用的工具。     

NFkB活化诱导剂筛选细胞的建立

目的:了解不同刺激剂作用HL-60细胞后对NF-kB活化的特点,为人类功能基因的筛选提供新的方法.方法:采用基因转染技术获得能稳定表达IkBa-EGFP融合蛋白的HL-60细胞系,定性和定量检测8种刺激剂作用于该细胞系后荧光强度的变化.结果:定性结果发现,在所用的8种刺激剂中,除IL-1ra作用后的细胞荧光强度没有明显的变化外,其它7种刺激剂作用后都有不同程度的细胞荧光强度的降低,尤以PHA作用后的变化更为典型.定量检测结果发现,稳定表达的HL-60细胞自身的荧光强度,随时间延长即有降低,IL-1ra作用后细胞荧光强度的降低同没有刺激时相比没有明显区别;其它7种刺激剂作用后均有明显的荧光强度降低,但它们作用后的特点并不相同.结论:该真核转染的细胞可用于NK-kB活化刺激剂的初步筛选,可以作为功能基因组研究中新基因功能初筛的一个平台技术.     

NFкB活化诱导剂筛选细胞的建立

目的：了解不同刺激剂作用ＨＬ－６０细胞后对ＮＦ－ｋＢ活化的特点，为人类功能基因的筛选提供新的方法。方法：采用基因转染技术获得能稳定表达ＩｋＢａ－ＥＧＦＰ融合蛋白的ＨＬ－６０细胞系，定性和定量检测８种刺激剂作用于该细胞系后荧光强度的变化。结果：定性结果发现，在所用的８种刺激剂中，除ＩＬ－１ｒａ作用后的细胞荧光强度没有明显的变化外，其它７种刺激剂作用后都有不同程度的细胞荧光强度的降低，尤以ＰＨＡ作用后的变化更为典型。定量检测结果发现，稳定表达的ＨＬ－６０细胞自身的荧光强度，随时间延长即有降低，ＩＬ－１ｒａ作用后细胞荧光强度的降低同没有刺激时相比没有明显区别；其它７种刺激剂作用后均有明显的荧光强度降低，但它们作用后的特点并不相同。结论：该真核转染的细胞可用于ＮＫ－ｋＢ活化刺激剂的初步筛选，可以作为功能基因组研究中新基因功能初筛的一个平台技术。     

人重组IL－8在小鼠骨髓瘤细胞的表达和鉴定

人重组ＩＬ－８在小鼠骨髓瘤细胞的表达和鉴定北京医科大学免疫学系周宝宏，马大龙，袁勇，宋泉声，狄春辉，张颖妹ＩＬ－８是一种重要的细胞因子，属于趋化素（Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ）家族，可趋化粒细胞和Ｔ细胞，促进炎症反应。有报道局部注射人重组ＩＬ－８可促进肿瘤浸...     

腺病毒和腺伴随病毒基因元件提高白细胞介素-6在真核细胞中的表达效率

目的:构建高效真核表达载体以提高细胞因子在真核细胞中的表达效率.方法:利用基因克隆技术构建了两个新的白细胞介素-6(IL-6)真核表达载体pAdCIIL-6和P335ciil-6.将它们瞬时转染COS-7细胞后,利用IL-6依赖株7TD1对上清中的IL-6进行检测.结果:两种新建载体分别能提高IL-6在真核细胞中的表达效率5.5和3.4倍.结论:腺病毒的病毒相关Ⅰ和ⅡRNA(virus-associated Ⅰand ⅡRNA, VAⅠand VAⅡ)和腺伴随病毒(adeno associated virus, AAV) 的倒转末端重复序列(inverted terminal repeat, ITR)能提高细胞因子在真核细胞中的表达.     

无环鸟苷亲脂性前体药物脂质体的制备及体外抗病毒活性(英文)

本文通过将无环鸟苷(acyclovir,简称ACV)2’位羟基分别与月桂酰氯或棕榈酰氯进行酯化反应,制得亲脂性前体药物无环鸟苷月桂酸酯和无环鸟苷棕榈酸酯(分别简称为C₁₂-ACV和C₁₆-ACV),使脂质体包封率从ACV的29.9%提高到C₁₂-ACV的95.6%和C₁₆-ACV的97.1%;漏泄实验表明在4℃透析60h后,一半以上的ACV从脂质体中漏泄,而C₁₂-ACV和C₁₆-ACV的滞留率分别为70%和80%;体外抗疱疹病毒的试验中,在最低试验浓度0.044μmol/L时,ACV不显示抗病毒活性,而C₁₆-ACV脂质体抑制细胞病变率达75%,说明前体药物通过与脂质体脂膜的结合增加了药物的进入细胞能力,从而提高了ACV的抗病毒能力。     

人重组胱天蛋白酶原-3的表达和体外活化

目的:建立一个在短时间内获取大量活化胱天蛋白酶-3的方法.方法:将胱天蛋白酶-3酶原的基因从真核表达载体中克隆到原核表达载体pMTY4-His中,在大肠杆菌中以包涵体的形式表达MS2-胱天蛋白酶原-3融合蛋白;将包涵体变性,经酸化和浓缩进行体外活化;对所得蛋白用Western blot和活性试验进行鉴定.结果:构建成pMTY4-His-胱天蛋白酶-3原核表达载体,在大肠杆菌中获得了较高水平表达的胱天蛋白酶原-3酶原-MS2融合蛋白.体外活化后每升诱导菌可获得约10 mg蛋白,用抗胱天蛋白酶-3单克隆抗体证实所得蛋白为胱天蛋白酶原-3,活性试验证实得到高活性的蛋白.结论: 成功地建立了大量获取高活性的胱天蛋白酶-3的方法,为深入研究胱天蛋白酶-3的功能和性质提供物质基础.