小鼠凋亡相关新基因TFAR15的克隆和序列分析

目的克隆人白血病细胞凋亡相关新基因TFAR15的小鼠同源序列 ,并比较其在不同种属间的序列同源性。方法利用EST(expressedsequencetag)拼排、RT PCR、DNA序列测定和计算机分析技术 ,对小鼠TFAR15进行研究。结果首次成功地进行了小鼠TFAR15全长cDNA的克隆和序列分析 ,发现小鼠TFAR15与小鼠其它cDNA没有明显的同源性 ,因此提交GenBank并被收录 ,登录号为AF159368。小鼠TFAR15和人TFAR15在核苷酸水平上有92.3 %的同源性 ,在氨基酸水平上有高达98.6 %的同源性 ;同时发现小鼠TFAR15在氨基酸水平上与线虫C14A4.11蛋白质有38 %的同源性。功能区分析发现 ,小鼠TFAR15cDNA序列含编码212个氨基酸的开放读码框架 ,有2个可能的N 糖基化位点 ,3个可能的caseinkinaseII磷酸化位点 ,4个可能的PKC磷酸化位点 ,并且可能是一种胞浆蛋白(cytoplasmicprotein)。结论小鼠TFAR15是进化上高度保守的新基因 ,可能具有重要的功能。     

人白细胞介素—9cDNA的PCR扩增及其在大肠杆菌的表达

利用ＰＣＲ技术从人外周血Ｔ细胞ｃＤＮＡ文库中扩增出人ＩＬ－９的ｃＤＮＡ，将其连入大肠杆菌表达载体后，可大大肠杆菌高效表达出人重组ＩＬ－９融合蛋白，表达量占菌体蛋白的２５％左右，有明显的刺激正常人骨髓细胞集落形成的活性。     

人重组IL－8在小鼠骨髓瘤细胞的表达和鉴定

人重组ＩＬ－８在小鼠骨髓瘤细胞的表达和鉴定北京医科大学免疫学系周宝宏，马大龙，袁勇，宋泉声，狄春辉，张颖妹ＩＬ－８是一种重要的细胞因子，属于趋化素（Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ）家族，可趋化粒细胞和Ｔ细胞，促进炎症反应。有报道局部注射人重组ＩＬ－８可促进肿瘤浸...     

颞下颌关节紊乱病关节液中白细胞介素-1受体拮抗剂和白细胞介素-10的检测

探讨白细胞介素 - 1受体拮抗剂 (IL - 1ra)和白细胞介素 - 10 (IL - 10 )在颞下颌关节紊乱病(TMD)病因及发病机理中的作用。方法　采用夹心法酶联免疫吸附测定法 (Sandwich -ELISA)对 31侧TMD患者及 7侧健康志愿者的关节液进行了IL - 1ra和IL - 10的检测。结果　健康志愿者的滑液中不能检测到IL -1ra的存在 ,TMD患者的关节液中IL - 1ra的平均水平为 182 .40± 5 5 .83pg/ml。TMD患者关节液的IL - 1ra水平与健康志愿者滑液中IL - 1ra水平之间的差异具有显著性 (P <0 .0 1)。颞下颌关节结构紊乱患者的IL - 1ra水平为 175 .78± 5 2 .43pg/ml(n =14) ;TMJ骨关节病 (OA)患者的IL - 1ra水平为187.85± 5 9.5 1pg/ml(n =17) ;两者的差异不具有显著性。健康志愿者和TMD患者的滑液中均不能检测到IL - 10的存在。结论　IL - 1ra和IL -10的缺乏或缺失在颞下颌关节紊乱病的病因及发病机理中可能起着重要作用。     

抗HBsAg和抗RBC双特异minibody载体的构建及表达

目的：用抗HBsAg和抗RBC单链抗体构建双特异minibody抗体模型。方法：将人IgG1 CH3经点突变方式,在CH3界面由大分子氨基酸代替小分子氨基酸形成“knob”（T366W）（杵状结构）,另一个CH3分子由3个小分子氨基酸代替3个大分子氨基酸形成“hole”（T366S：L368A：Y407V）（臼状结构）,并在此基础上在适当位置上引入半胱氨酸残基形成二硫键（S354C：T366W／Y349C：T366S：L368A：Y407V）。 然后将“knob”和“hole”分别接连于抗HBsAg和抗RBC单链抗体基因3’端,并将两基因组装于同一表达载体中,在大肠杆菌中分泌表达。结果：依CH3界面不同共构建3种不同的表达载体,分别带有①野生型CH3;②杵臼结构（T366W／T366S：L368A：Y407V）突变型CH3,③杵臼结构加二硫键（S354C：T366W／Y349C：T366S：L368A：Y407V）突变型CH3。大肠杆菌分泌表达后,ELISA法检测抗HBsAg和抗RBC活性,3种表达上清均有相同的抗HBsAg和抗RBC活性;两种带有突变型CHE的minibody用血球凝集法可检测到抗HBsAg和抗RBC双特异活性。结论：CH3界面经适当改造可促进异源二聚体形成,并在大肠杆菌获得功能性表达,得到双特异minibody。     

人类功能基因组研究与开发的进展及对策建议

随着人类基因组计划的完成,人类功能基因组学研究成为新的热点,已经将生物医学的研究范围从对单一基因或蛋白质的研究扩展到系统和完整地对全部基因或蛋白质的研究.这一研究领域是生物技术产业和健康产业的核心,与人类的健康息息相关,并蕴藏着巨大的产业化潜能和经济、社会效益.目前,虽然人类基因组全部序列已知,但许多基因的功能仍然一无所知.根据2008年1月人类转录组数据库(H·Invitational Database.H.1nvDB)的统计,在目前已注释的34 057个人类编码基因中,有功能报道的只有12 404个(表1)[1].因此,大量人类新基因和蛋白的功能及开发研究仍有待于我们发掘.     

人重组胱天蛋白酶原-3的表达和体外活化

目的:建立一个在短时间内获取大量活化胱天蛋白酶-3的方法.方法:将胱天蛋白酶-3酶原的基因从真核表达载体中克隆到原核表达载体pMTY4-His中,在大肠杆菌中以包涵体的形式表达MS2-胱天蛋白酶原-3融合蛋白;将包涵体变性,经酸化和浓缩进行体外活化;对所得蛋白用Western blot和活性试验进行鉴定.结果:构建成pMTY4-His-胱天蛋白酶-3原核表达载体,在大肠杆菌中获得了较高水平表达的胱天蛋白酶原-3酶原-MS2融合蛋白.体外活化后每升诱导菌可获得约10 mg蛋白,用抗胱天蛋白酶-3单克隆抗体证实所得蛋白为胱天蛋白酶原-3,活性试验证实得到高活性的蛋白.结论: 成功地建立了大量获取高活性的胱天蛋白酶-3的方法,为深入研究胱天蛋白酶-3的功能和性质提供物质基础.     

用点突变PCR方法去除人IL—2 cDNA表达克隆终止密码及其鉴定

在重组人ＩＬ－２（ｈＩＬ－２）大肠杆菌高效表达的基础上，为了构建ｈＩＬ－２与别的目的蛋白的嵌合分子，我们利用点突变ＰＣＲ方法去除ＩＬ－２ ｃＤＮＡ表达克隆的终止密码，并构建成ｈＩＬ－２嵌合重组蛋白表达克隆，在大肠杆菌中表达的ＩＬ－２嵌合重组蛋白具有天然ＩＬ－２分子的生物活性，本文结果表明点突变ＰＣＲ去除ｃＤＮＡ终止密码的方法效率高，快速。简便。     

人血清清蛋白cDNA克隆的免疫酶法筛选及其鉴定

报道了用免疫酶法从人肝细胞cDNA文库中筛选清蛋白cDNA克隆的过程。所得到的克隆用免疫学方法及内切酶水解法进行鉴定。在7个阳性克隆中,有8个cDNA克隆分子的叠加占据了整个清蛋白cDNA编码区的长度     

白细胞介素2—乙型肝炎病毒前S抗原融合蛋白的免疫原性研究

目的　为协同人白细胞介素（ＩＬ－２）与乙型肝炎（乙肝）病毒（ＨＢＶ）前Ｓ抗原的生物学功能，探索治疗慢性乙肝的特异性免疫药物。方法用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和基因重组技术构建了ＨＢＶ完整前Ｓ抗原和ＩＬ－２的嵌合基因，并在大肠杆菌中高效表达了ＩＬ－２－前Ｓ抗原融合蛋白。结果该融合蛋白保留了ＩＬ－２和前Ｓ抗原天然分子的生物学活性，能维持白细胞介素２依赖株细胞增殖，其比活性约１０~７Ｕ／ｍｇ蛋白。该融合蛋白能与前Ｓ１和前Ｓ２单克隆抗体结合及与多聚人血清白蛋白（ＰＨＳＡ）结合，说明其具有相应抗原表位及受体。其诱导Ｂａｌｂ／ｃ小鼠产生抗前Ｓ抗体的效价分别是单独的前５抗原、前Ｓ抗原与ＩＬ－２的混合物及ＭＳ－２－前Ｓ融合分子的１３、９和１１倍多。结论ＩＬ－２．前Ｓ抗原融合蛋白能增强前Ｓ抗原的免疫原性，促进机体的免疫应答；另外，ＩＬ－２－前Ｓ抗原融合蛋白在人体内具有双重导向作用，可能成为新一代慢性乙肝和肝癌的免疫治疗剂。