乙肝肝硬化肝胆湿热及肝肾阴虚证物质基础研究＊

目的 运用代谢组学技术分析乙肝肝硬化患者肝肾阴虚及肝胆湿热两种典型证候（同病异证）的血清差异代谢产物及其代谢通路，探寻虚、实两种典型证候的内在物质基础，以期从代谢水平上为中医证候分类提供客观依据。方法 对符合纳入标准的111例不同证候的乙肝肝硬化患者（肝胆湿热证40例，肝肾阴虚证41例，隐证(无证可辨）者30例）中医症状及体征进行描述性分析，发现两种不同证型的临床信息分布规律及证候特征；采用气相色谱-飞行时间质谱联用（GC-TOF/MS）技术对乙肝肝硬化患者，以及与之相匹配的60例健康人的血清样本进行检测，经非监督的主成分分析（Principal Components Analysis，PCA）、有监督的偏最小二乘判别分析（Partial Least Square Discriminant Analysis，PLS-DA）及监督的正交偏最小二乘法（Orthogonal Partial Least SquareDiscriminant Analysis，OPLS-DA）分析，找出与乙肝肝硬化疾病本身及其两种典型证候相关的差异性物质；运用MetaboAnalyst 3.0数据库，寻找并解析肝胆湿热及肝肾阴虚虚实两种证候间差异性物质的相关代谢通路。结果 （1）肝胆湿热证中出现频率较高（50%以上）的症状为小便色黄，口干，口苦，口臭或有异味等。肝肾阴虚证中出现频率较高的症状为口干、腰酸、乏力、腿软等。两证共见症/征为口干、尿黄、易怒、舌红。（2）各组间丙氨酸氨基转移酶（Alanine Aminotransferase,ALT）数值无统计学差异（P > 0.05）；与健康组比较，隐证组中白蛋白（Albumin，ALB），肝胆湿热证中总胆红素（Total Bilirubin，TBil）、直接胆红素（Direct Bilirubin，DBil）、谷草转氨酶（Aspartate Transaminase，AST）、碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，ALP）、谷氨酰转肽酶（Gamma-Glutamyl Transpeptidase，GGT）、总胆汁酸（Total Biliary Acid，TBA）及ALB，肝肾阴虚证TBil、ALP、GGT、TBA、ALB值差异均有统计学意义（P < 0.05）；与隐证比较，肝胆湿热证TBil、DBil、AST、ALP、TBA、ALB，肝肾阴虚证TBA、ALB差异有统计学意义（P < 0.05）；肝胆湿热证与肝肾阴虚证相比，TBil、DBil差异有统计学意义（P < 0.05）。（3）代谢组学检测及代谢通路分析，发现各组之间代谢谱均有良好的区分，并获得各组间的差异性物质。发现肝胆湿热及肝肾阴虚两典型证的共同物质10个，去除疾病（隐证）的信息，则得到两证共同物质6个，涉及的代谢通路为甘氨酸、丝氨酸及苏氨酸代谢和苯丙氨酸代谢；同时，分别获得两证各自特异性的代谢物质各8个，分别涉及亚油酸代谢和甘氨酸、苏氨酸及丝氨酸代谢。结论 运用代谢组学技术，发现肝胆湿热及肝肾阴虚不同证之间既存在病的共同物质（同病），也存在证的差异物质（异证），从而在代谢层面上为中医证候分类的科学性提供科学依据。     

基于TCGA、THPA、GEO数据库挖掘PTTG1在乳腺癌中的表达及预后意义

目的:通过对癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas，TCGA)、人类蛋白组图谱(The Human Protein Atlas，THPA)和人类肿瘤相关的基因表达汇编(Gene Expression Omnibus，GEO)数据库的数据挖掘，探索垂体肿瘤转化基因1（pituitary tumor-transforming gene 1，PTTG1）在乳腺癌中的表达及预后意义。方法:从TCGA、THPA和GEO数据库提取PTTG1在乳腺癌及正常组织中mRNA和蛋白水平的变化和患者临床病理资料，GEO在线预后分析数据库Kaplan-Meier Plotter(http://kmplot.com)检索PTTG1乳腺癌预后的相关性。结果:在数据库中，PTTG1 mRNA和蛋白水平在乳腺癌队列中表达显著高于正常乳腺组织(P<0.01)；PTTG1 mRNA在不同的分子亚型中表达存在显著差异(P<0.05)；PTTG1 mRNA在ER和PR阳性乳腺癌患者组织中表达显著低于ER和PR阴性乳腺癌患者(P<0.05)；PTTG1 mRNA在进展期乳腺癌患者组织中表达显著高于早期乳腺癌患者(P<0.05)；PTTG1 mRNA随着乳腺癌患者组织学分级程度升高而降低(P<0.05)。PTTG1低表达乳腺癌患者的预后显著好于其高表达患者(P<0.001)；PTTG1高表达的ER和PR阳性、HER-2阴性乳腺癌患者的预后均显著差于其低表达者(P<0.05)。PTTG1高表达乳腺癌样本富集到细胞因子受体相互作用、趋化因子信号通路、细胞周期、自然杀伤细胞介导细胞毒性、Toll样受体信号通路和T细胞受体信号通路等相关基因集。结论:PTTG1 mRNA和蛋白在乳腺癌组织中高表达，PTTG1 mRNA表达与乳腺癌预后相关且在不同分子分型的乳腺癌中具有不同的预后监测意义，可以作为乳腺癌预后判断的标志物。     

补肾调周法治疗内异症术后卵巢低反应临证撷要

卵巢低反应以肾虚为本,血瘀为标,兼肝郁气滞、脾虚胃弱。临证治疗注重既往病史,采用中西医结合治疗。辨证治以补肾益精、活血化瘀,循卵巢周期调治,卵泡期重在补肾滋阴,黄体期注重补肾助阳,兼健脾疏肝,调和气血。灵活运用基础体温、阴超实时监测卵泡、内膜情况,及时调治,积极试孕。附验案1则以佐证。     

基于线粒体COⅠ基因的广西不同地区福寿螺遗传多态性分析

目的 通过对广西不同地区福寿螺的COⅠ基因进行分析,以了解广西福寿螺种群的遗传多态性。方法 从南宁市横县、桂林市全州县和荔浦县、贺州市富川县、百色市田林县和崇左市凭祥县共计6个县区采集福寿螺样本,提取DNA并进行COⅠ基因的PCR扩增及测序。运用MAGE 7.0将本研究获得的单倍型与GenBank中的福寿螺单倍型使用邻接法构建系统进化树,并计算个体间的遗传距离,分析其遗传多样性。结果 COⅠ基因长度为493 bp,从11个样本鉴定出2种单倍型：单倍型1（Haplotype 1）和单倍型2（Haplotype 2）。其中9个样本为Haplotype 1,分别来源于南宁市横县（2个）、贺州市富川县（1个）、桂林市荔浦县（1个）、百色市田林县（2个）、崇左市凭祥县（3个）,该单倍型与小管福寿螺遗传距离最近,为0.047;2个样本为Haplotype 2,分别源自为南宁市横县和桂林市全州,与孤岛福寿螺遗传距离最近,为0.062。根据上述条件所构建的进化树形成了7个分支,分别为P. canaliculata、P. camena、P. insularum、P. paludosa、P. diffusa、P. haustrum、和外群Pilaconica。Haplotype 1与来自美国夏威夷 （GenBank登录号 EU 523129）的P. canaliculata组成一个分支,Haplotype 2与来自巴西（GenBank登录号EF514942）的P. insularum组成一个分支,且置信值均在98%以上。结论 初步判断广西地区存在小管福寿螺与孤岛福寿螺两种类型的福寿螺,其种群内没有发现遗传分化。     

野黄芩苷通过hedgehog信号通路抑制结肠肿瘤干细胞分化的研究

该文旨在研究野黄芩苷对结肠肿瘤干细胞体外和体内分化的影响,揭示野黄芩苷基于hedgehog信号通路的抑制结肠肿瘤干细胞分化的作用机制。用3D细胞培养法观察野黄芩苷对结肠肿瘤干细胞HT-29CSC体外生长的影响;用软琼脂克隆形成实验研究野黄芩苷对HT-29CSC细胞转化的影响;用胎牛血清诱导干细胞分化实验,研究野黄芩苷对HT-29CSC细胞体外分化的影响;用qRT-PCR法检测野黄芩苷对HT-29CSC细胞中Lgr5,c-Myc,CK20和Nanog mRNA表达的影响;用Western blot法检测野黄芩苷对HT-29CSC细胞中c-Myc,Gli1,Lgr5蛋白表达的影响。通过裸鼠皮下接种HT-29CSC细胞建立肿瘤干细胞体内分化成瘤模型,研究野黄芩苷对裸鼠体质量和HT-29CSC细胞分化成瘤的影响;用qRT-PCR法检测肿瘤组织中CD133,Lgr5,Gli1,Ptch1,c-Myc,Ki-67,CK20,Nanog mRNA表达水平;用Western blot法及免疫组织化学法检测肿瘤组织中c-Myc,Gli1,Lgr5,CD133,Ki-67蛋白表达水平。体外研究表明,野黄芩苷能够抑制HT-29CSC细胞生长、转化与分化,同时显著下调HT-29CSC细胞中Lgr5,c-Myc,CK20,Nanog mRNA水平和c-Myc,Gli1,Lgr5蛋白表达。动物实验表明,野黄芩苷显著抑制裸鼠皮下HT-29CSC细胞分化成瘤,并且下调肿瘤组织中CD133,Lgr5,Gli1,Ptch1,c-Myc,Ki-67,CK20,Nanog mRNA表达和c-Myc,Gli1,Lgr5,CD133,Ki-67蛋白表达。综上所述,野黄芩苷能够抑制结肠肿瘤干细胞的体外和体内分化,其作用机制在于下调hedgehog信号通路活性。     

超高CD34+采集的动员方案序贯二次自体造血干细胞移植治疗难治性 霍奇金淋巴瘤

目的:探讨超高CD34+采集的动员方案后序贯二次自体造血干细胞移植治疗难治性霍奇金淋巴瘤的疗效和安全性。方法:对1例经过多疗程一线、二线、新药、免疫等均难治的霍奇金淋巴瘤患者，予以IA+C方案化疗+G-CSF动员干细胞后采集出超高水平CD34+细胞，之后行自体造血干细胞移植，移植后获得完全缓解，再予序贯第二次自体造血干细胞移植进行巩固治疗。结果:总计输注单个核细胞数13.67×108/kg，CD34+细胞48.68×106/kg，第一次自体造血干细胞移植术后第7天造血功能恢复，复查全身PET-CT提示获得完全缓解，第二次自体造血干细胞移植术后第8天造血功能恢复，两次自体造血干细胞移植相关并发症均在可控范围内。结论:超高CD34+细胞采集的IA+C方案化疗+G-CSF动员可以让患者有机会进行多次自体造血干细胞移植，是临床动员的创新方案。对于难治性霍奇金淋巴瘤，序贯二次自体造血干细胞移植可达到更深层次缓解，且安全性较高，延长患者无疾病生存期及总生存期，为难治性霍奇金淋巴瘤治疗提供更多临床依据。     

miR-149与肿瘤关系的研究进展

miRNAs是一类长度约为20~25个核苷酸，参与基因调控表达的内源性非编码RNA。miR-149作为miRNAs的重要成员，在多种肿瘤中表达异常，其表达水平与肿瘤细胞增殖、转移、凋亡、耐药、患者的早期诊断及预后密切相关。因此，miR-149有望成为新一类抗肿瘤治疗的靶点。