兔骨髓间充质干细胞向神经元的诱导分化

目的 :探讨兔骨髓间充质干细胞 (bonemarrowmesenchymalstemcells ,BM -MSCs)向神经元定向诱导分化及分化前后体外培养的条件。方法 :无菌条件下收集兔股骨骨髓 ,用相对密度为 1 0 77的淋巴细胞分离液分离出白膜层细胞群 ,贴壁法筛检其中的MSCs ,用DMEM H条件培养基进行原代及传代培养。分别取 5和 10代的MSCs向神经元定向诱导。诱导后更换为神经培养基继续培养 ,并在 1～ 2 0d用免疫细胞化学方法检测分化细胞的特异性表面标志。结果 :兔骨髓MSCs在DMEM H条件培养基中建立高纯度的细胞培养 ,能够稳定地连续传代达 10代以上。不同代数的MSCs诱导后均表达巢蛋白 (nestin)和神经特异性烯醇化酶 (neuron specificenolase ,NSE)。诱导后NSCs在神经培养基中继续存活 2 0d以上 ,但未见扩增。结论 :兔骨髓MSCs能够诱导表达神经元特异性标志 ,且诱导前后的MSCs均可在体外培养条件下存活。     

水果鲜样中铅含量的检测探析

1 仪器与试剂。日立Z-500型原子吸收光谱仪；铅空心阴极灯(日立)；玻璃三角烧瓶；可调式电热板。     

重组人类Tau蛋白的大量制备及鉴定

目的:重组人Tau蛋白的大量制备。方法:将携带人类全长Tau蛋白基因的质粒转入工程菌E.ColiBl21,经IPTG诱导表达后,通过差速离心、离子交换层析、凝胶过滤层析方法纯化Tau蛋白,以SDS-PAGE电泳和Western印迹法进行鉴定。结果:纯化Tau蛋白的得率约为43.3%。在SDS-PAGE上呈均一的蛋白条带,其相对分子质量约为60 000。结论:本实验以较高产量成功地纯化了重组Tau蛋白,纯化的蛋白质可以满足制备Tau抗体的需要,且其生物活性保存较好,可用于Tau蛋白生化特性的研究。     

大豆超微细精粉中微量水的快速测定

大豆超微细精粉是利用高新技术,在低温或常温条件下粉碎成(30~50)μm左右的超微细粉,从而最大程度地保持食品所含有的各种成份,使大豆中人体不可缺少而又难以吸收的营养成份充分地进入人体,极易被人体消化吸收。用这种工艺生产的产品也避免或减少了传统的湿法处理工艺产生的微生物污染问题,使成品中水份含量大为降低,由原来的10%左右降为5%左右,可广泛应用于食品工业、饲料工业、医药工业等许多领域,为大豆的加工及综合利用开辟了一条新的途径[1]。对食品中水份含量的测定,通常采用烘干法和共沸蒸馏法[2]。但用这些方法测定都需较长时间,一…     

EGF和bFGF对脐血单个核细胞τ蛋白及微管相关蛋白-2 mRNA表达的影响

目的：探讨脐血单个核细胞在细胞因子诱导作用下τ蛋白及微管相关蛋白-2(MAP2) mRNA的表达。方法：用密度梯度离心法分离脐血单个核细胞，接种于含20%胎牛血清H-DMEM培养瓶内。以不加任何生长因子的培养为对照组，其余3组分别加入细胞因子EGF+bFGF、bFGF、EGF,终浓度均为20 μg/L。倒置显微镜下观察细胞形态变化，RT-PCR方法检测脐血单个核细胞培养前后τ蛋白及MAP2 mRNA，免疫细胞化学方法检测τ蛋白及MAP2阳性细胞。结果：培养前，脐血单个核细胞胞体小呈圆形；培养后EGF+bFGF组细胞胞体较大，突起粗而长，EGF组细胞胞体呈梭形，有1-2个长突触，bFGF组细胞胞体较小、有多个细长突起，形似星形细胞，对照组细胞形态类似于bFGF组，但数量较少。RT-PCR检测未培养脐血单个核细胞MAP2 mRNA表达阳性而τ蛋白mRNA呈阴性，培养后MAP2 mRNA表达增强，τ蛋白mRNA亦呈阳性；免疫细胞化学方法可检测MAP2及τ蛋白阳性细胞在EGF+bFGF组、EGF组、bFGF组、对照组分别为33.5%、25.6%、19.6%、14.4%和29.8%、21.4%、15.3%、13.5%。结论：脐血单个核细胞中存在的神经元特异性分子，经培养和生长因子调控后表达增强，联合使用bFGF、EGF具有协同作用。     

骨髓间充质干细胞分化神经元后多巴胺D2受体的表达

目的:检测骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分化为神经元后多巴胺D2受体(dopamine receptor D2,DRD2)的表达,探讨体外分化神经元的基本功能。方法:采用密度梯度离心法和贴壁培养的方法分离纯化MSCs,流式细胞仪检测MSCs表面标志,DMSO/BHA/FSK作为诱导剂来诱导分化;硝酸银染色法检测神经纤维丝,RT-PCR和免疫细胞化学法检测NSE、DRD2 mRNA及蛋白的表达情况。结果:分离纯化的MSCs经流式细胞仪检测显示CD34、CD45表达阴性;间充质干细胞相对特异性标志CD44强阳性表达;加入诱导剂后,MSCs形成多极神经元的形态。银染色法显示神经纤维丝阳性表达,RT-PCR显示诱导后细胞表达NSE、DRD2 mRNA,免疫组化显示NSE、DRD2蛋白表达阳性。结论:MSCs分化为神经元后可以表达神经受体DRD2。     

植入微型刺激器对大鼠神经损伤后自残及神经再生的影响

本实验利用大鼠坐骨神经钳夹损伤模型，观察了电针（Ａ组）、直流刺激器（Ｂ组）及双向平衡电脉冲刺激器（Ｃ组）对神经损伤后自残及神经再生的影响，Ｄ组为对照。结果：（１）术后１７ｄ，Ｃ组的右后足趾自残率为１３％，而Ａ、Ｂ及Ｄ组分别为４６％、５３％及８０％，Ｃ组的自残率显著低于其它各组（Ｐ＜０．００１）；（２）右侧屈肌反射阈：当刺激强度为３５±５Ｖ（Ｃ组）、４５±５Ｖ（Ａ和Ｂ组）时，可引出短潜伏期（４５～１５０ｍｓ）的Ａ类及长潜伏期（１２５～５２５ｍｓ）Ｃ类传入纤维反应，而当刺激强度增至６５±５Ｖ时，于Ｄ组仅见长潜伏期（１９０～６００ｍｓ）的Ｃ类传入纤维反应；（３）术后１７ｄ脊神经节的标记细胞百分享分别为１１．１％（Ｃ组）、５．７％（Ｂ组）、５．２％（Ａ组）及１．１％（Ｄ组）；脊髓前角的标记细胞百分率分别为１６．６％（Ｃ组）、８．１％（８组）、７．４％（Ａ组）及１．９％（Ｄ组）。上述结果表明：双向平衡电脉冲刺激器在抑制神经损伤后自残及促进周围神经再生等方面具有更显著的生理功效。     

蝎毒镇痛酊抑制大鼠躯体痛实验研究

Ｗｉｓｔａｒ大鼠１００只，随机分为１０组，每组１０只。５组动物用于注射Ｆｏｒｍａｌｉｎ致痛模型镇痛实验：动物注射Ｆｏｒｍａｌｉｎ液后１ｍｉｎ开始涂蝎毒镇痛酊或生理盐水（其中１组于注射前３０ｍｉｎ口服阿斯匹林，观察早反应及迟反应。另５组动物用于神经干结扎慢性痛镇痛模型：戊巴比妥钠腹腔麻醉，在镜下于腓总神经与胫神经分支处结扎神经干，４８ｈ后分别涂蝎毒镇痛酊、生理盐水或口服阿斯匹林，第２０ｄ记录肌电变化。结果：蝎毒镇痛酊外用，对大鼠注射Ｆｏｒｍａｌｉｎ引起阵发性肌电发放、神经干结扎慢性痛及结扎后自残率均有显著的抑制作用，并具有一定的剂量效应关系。提示蝎毒镇痛酊对急、慢性躯体痛具有抑制作用。     

蝎毒纯化因子Ⅱ对大鼠神经肌肉兴奋性的影响

雄性大鼠２１只（体重２００～２５０ｇ），随机分为Ａ、Ｂ、Ｃ三组，氨基甲酸乙酯（１ｇ／ｋｇ）腹腔麻醉，双针记录电极置于右侧股二头肌以记录肌电，双侧腋窝皮下埋藏板状电极以引导心电信号。肌电信号及心电信号，经生物信号处理系统（ＳＭＵＰ－ＰＣ）Ｚ自动记录心电幅值、频率及屈肌反射阈值、潜伏期，并进行定量分析处理。尾静脉注射蝎毒纯化因子Ⅱ（ＡＦＳＶＣ－Ⅱ）的剂量，Ａ组为４３μｇ／ｋｇ，Ｂ组为６５μｇ／ｋｇ，Ｃ组为１３０μｇ／ｋｇ，注入容量均为０．３ｍｌ。ＡＦＳＶＣⅡ注射前及注射后（每隔１０ｍｉｎ测定１次，８０ｍｉｎ停止观察）分别对上述各项生理指标进行测定。结果：ＡＦＳＶＣ－Ⅱ尾静脉注射４３～６５μｇ／ｋｇ对心电幅值没有显著影响，但注射１３０μｇ／ｋｇ１０～３０ｍｉｎ，可明显减低心电幅值；ＡＦＳＶＣ－Ⅱ尾静脉注射４３～６５μｇ／ｋｇ对屈肌反射没有显著影响，但注射１３０μｇ／ｋｇ１０～３０ｍｉｎ，可明显减低神经肌肉的兴奋性及减慢神经传导的速度。提示：蝎毒可通过抑制Ｎａ＋通道，从而明显降低神经肌肉的兴奋性。