5-氮胞苷诱导间质干细胞为心肌细胞的实验研究

分离SD大鼠下肢骨，培养获得骨髓间质干细胞（MSCs），经5-氮胞苷（5-aza）定向诱导24h后t用免疫细胞化学法检测诱导细胞对连接蛋白43和α横纹肌肌动蛋白的表达，用逆转录-聚合酶链反应鉴定心肌细胞特异性蛋白的表达情况。结果显示，MSCs经5-aza诱导后，细胞形态不规则；3周后5-aza 10μm组细胞连接蛋白43、α横纹肌肌动蛋白阳性表达；RT-PCR显示细胞表达心肌肌钙蛋白Ⅰ、α心肌肌动蛋白。提示5-aza可体外诱导MSCs分化为心肌细胞，用于心肌梗死的治疗。     

增强型绿色荧光蛋白基因转入人骨髓间充质干细胞诱导其向神经元样细胞分化的示踪标记观察

目的：建立携带示踪标记的人骨髓间充质干细胞，并将其向神经元样细胞定向诱导分化。方法：实验于2003—10／2005-01在郑州大学干细胞研究中心完成。用阳离子脂质体转染法将增强型绿色荧光蛋白基因转入人骨髓间充质干细胞中，然后用表皮生长因子和碱性成纤维生长因子联合诱导法将其向神经元样细胞诱导分化，并用反转录聚合酶链反应法对诱导后的细胞进行鉴定。结果：①转染48h后，在荧光显微镜下观察，对照组的人骨髓间充质干细胞不发荧光，而实验组的人骨髓间充质干细胞开始发荧光，经G418筛选后得到稳定表达增强型绿色荧光蛋白的人骨髓间充质干细胞。②转染后的人骨髓间充质干细胞经重组人表皮生长因子和碱性成纤维生长因子的联合诱导后，较多细胞出现了典型的神经元样形态，经反转录聚合酶链反应法证明，神经元特征性蛋白微管相关蛋白2和神经丝亚单位-M表达增强。结论：应用阳离子脂质体转染法将增强型绿色荧光蛋白基因转入人骨髓间充质干细胞中可获得稳定表达，转染后的人骨髓间充质干细胞，经表皮生长因子和碱性成纤维生长因子联合诱导后可以向神经元样细胞定向分化。     

β-淀粉样蛋白诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化过程中Tau蛋白的过度磷酸化

背景:大多数学者认为β-淀粉样蛋白是阿尔茨海默病发病的始动因素,而Tau蛋白过度磷酸化可能是阿尔茨海默病最重要的分子病理变化之一.目的:观察β-淀粉样蛋白25~35对大鼠骨髓间充质干细胞分化的神经元样细胞Tau蛋白磷酸化的影响.方法:体外分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,将第4代骨髓间充质干细胞分为两组:实验组中加入预诱导培养基和20 μmol/L β-淀粉样蛋白25~35,24 h后用含2%二甲基亚砜和200 μmol/L丁羟茴醚的DMEM诱导其向神经细胞分化,5 h后收取细胞.对照组诱导方法同实验组,但在诱导过程中未加入β-淀粉样蛋白25~35.结果与结论:光镜下可见纺锤状的骨髓间充质干细胞诱导后出现长突起,呈现神经细胞样形态,但实验组突起数量和长度均少于对照组;免疫细胞化学法检测两组诱导后的神经元样细胞为神经元特异性烯醇化酶阳性;免疫蛋白印记法证明实验组的GSK-3β、Tau[pSer262]和Tau[pSer396]表达均显著高于对照组.结果提示β-淀粉样蛋白25~35能够通过GSK-3β途径诱导骨髓间充质干细胞分化的神经元样细胞Tau蛋白过度磷酸化.     

β-淀粉样蛋白25~35和人参皂苷Rb1对神经干细胞分化过程中tau蛋白磷酸化水平的影响

背景：通过调节神经干细胞分化过程中的tau蛋白磷酸化水平可提高神经干细胞移植治疗阿尔茨海默病的效果。 目的：观察β-淀粉样蛋白25~35和人参皂苷Rb1对神经干细胞分化过程中tau蛋白磷酸化水平的影响。 方法：分离、培养新生大鼠海马神经干细胞,诱导第3代神经干细胞分化1周后,分别采用免疫荧光细胞化学和Western-blot检测Tau[pS396] 、Tau[pS262] 及GSK-3β[pTyr279,216]表达情况。 结果与结论：正常神经干细胞分化过程中有Tau[pS396] 和Tau[pS262]的表达,β-淀粉样蛋白25~35可以使Tau[pS396]、Tau[pS262]和GSK-3β[pT279/216]表达上调,而人参皂苷Rb1可以逆转β-淀粉样蛋白25~35的作用。提示β-淀粉样蛋白25~35和人参皂苷Rb1通过调节GSK-3β的活性对tau蛋白的磷酸化水平产生调控作用。     

4.1蛋白家族在大鼠大脑皮质神经细胞中的表达和定位

背景:研究发现不同组织和细胞表达的4.1蛋白种类和剪切形式差别很大,不同4.1蛋白的不同结构域和细胞定位与其功能有必然的联系.目的:观察4.1蛋白家族中4.1R,4.1N,4.1G和4.1B在大鼠大脑皮质神经细胞中的mRNA和蛋白表达和细胞定位.方法:用RT-PCR,Western blot和免疫细胞化学染色及激光扫描共聚焦显微镜技术检测4.1蛋白家族在新生SD大鼠大脑皮质神经细胞中的mRNA和蛋白表达和在细胞中的定位.从细胞水平分析4.1蛋白家族中4.1R,4.1N,4.1G和4.1B的细胞内表达和定位的差异.结果与结论:4.1蛋白家族mRNA和蛋白在大鼠大脑皮质神经细胞均有所表达.4.1R主要表达在神经细胞胞膜和胞浆中,特别是突起延伸或轴突延伸部位高表达.4.1G主要表达在神经细胞的胞浆中,尤其是突起部位.4.1N主要表达在突起胞浆和胞膜.4.1B主要表达在胞体部位的胞浆和胞膜中.结果提示,4.1R,4.1G,4.1N和4.1B蛋白在体外培养的皮质神经细胞中均有不同程度的表达,并且在细胞内定位不同.     

脐血间充质干细胞移植后帕金森病大鼠纹状体内多巴胺含量的变化

背景:目前干细胞移植对帕金森病动物模型的研究多集中在骨髓间充质干细胞和胚胎干细胞方面,关于脐血间充质干细胞移植对帕金森病动物模型的研究相对较少,且未见测量脐血间充质干细胞移植前后多巴胺含量变化的报道.目的:观察脐血干细胞移植对帕金森病大鼠纹状体内多巴胺含量的影响.方法:帕金森病模型大鼠随机分成实验组和对照组.将第3代脐血间充质干细胞用Hoechst33258标记后植入实验组大鼠纹状体内,对照组注射磷酸盐缓冲溶液.移植后2,4,8周用免疫荧光双标法检测间充质干细胞的存活、迁移以及胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶、酪氨酸羟化酶和突触素的表达.移植后8周利用高效液相色谱-电化学检测仪检测纹状体多巴胺含量.结果与结论:脐血间充质干细胞移植后可在大鼠脑内存活,随时间延长迁移范围扩大,分布于纹状体、胼胝体和皮质;胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶、酪氨酸羟化酶都有表达,突触素无表达.多巴胺水平与对照组相比有明显提高 (P < 0.05).     

面制食品中铝含量测定预处理方法的研究

目的探讨面制食品中铝含量测定的比较简便快速的方法。方法在对面制食品中铝含量测定的基础上,对样品预处理方法改进研究。结果对比灰化法和微波消解法测定结果,对不同的面制品采用不同的样品预处理方法,能使铝含量测定结果更准确,方法更简便。结论对于馒头、发糕一类的少油或无油的面制品采用微波消解的预处理方法效果更好,对于油条、油饼含油量高的面制品适合采用灰化法的样品预处理。     

人骨髓间充质干细胞分化神经元样细胞表达单胺类受体mRNA

目的 检测体外人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)经DMSO/BHA联合诱导后所分化的神经元样细胞表达单胺类受体基因的状况,以探讨体外诱导hMSCs向神经元样细胞分化的条件和机制.方法 采用密度梯度离心法和贴壁培养的方法分离纯化hMSCs,DMSO/BHA联合诱导分化,免疫细胞化学法检测神经元特异性烯醇化酶(neurone specific enolase,NSE)的表达,RT-PCR检测5-HT2受体和多巴胺2受体(DRD2)mRNA.结果 分离纯化的hMSCs加入诱导剂后,hMSCs形成多极神经元的形态;免疫组化结果显示NSE蛋白表达阳性;RT-PCR结果显示诱导后细胞表达5-HT2受体的mRNA,而不表达DRD2的mRNA.结论 DMSO/BHA可诱导hMSCs表达5-HT2受体基因,但不表达DRD2受体基因.     

脐血间充质干细胞移植后帕金森病大鼠纹状体内多巴胺含量的变化

背景：目前干细胞移植对帕金森病动物模型的研究多集中在骨髓间充质干细胞和胚胎干细胞方面,关于脐血间充质干细胞移植对帕金森病动物模型的研究相对较少,且未见测量脐血间充质干细胞移植前后多巴胺含量变化的报道。 目的：观察脐血干细胞移植对帕金森病大鼠纹状体内多巴胺含量的影响。 方法：帕金森病模型大鼠随机分成实验组和对照组。将第3代脐血间充质干细胞用Hoechst33258标记后植入实验组大鼠纹状体内,对照组注射磷酸盐缓冲溶液。移植后2,4,8周用免疫荧光双标法检测间充质干细胞的存活、迁移以及胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶、酪氨酸羟化酶和突触素的表达。移植后8周利用高效液相色谱-电化学检测仪检测纹状体多巴胺含量。 结果与结论：脐血间充质干细胞移植后可在大鼠脑内存活,随时间延长迁移范围扩大,分布于纹状体、胼胝体和皮质;胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶、酪氨酸羟化酶都有表达,突触素无表达。多巴胺水平与对照组相比有明显提高 (P < 0.05)。     

脊髓亚急性联合变性14例临床分析

目的分析脊髓亚急性联合变性（Subacute combined degeneration of the spinal cord,SCD）的临床表现及相关检查特点,以提高对SCD的认识。方法对14例SCD患者的临床表现、实验室检查、神经电生理和影像学检查结果进行回顾性分析。结果14例患者,均为中老年患者,亚急性或慢性病程,以双下肢感觉异常、乏力、深浅感觉减退为最常见的临床症状及体征,部分患者合并自主神经损害,所有患者应用VitB12治疗后均有不同程度的好转。结论VitB12对SCD患者治疗有效,血清VitB12浓度、MRI、电生理检查、治疗后网织红细胞计数是SCD重要的诊断与鉴别诊断依据。