重组汉滩病毒核蛋白及其26 ku片段的免疫学特性初步鉴定

目的 研究基因重组表达的汉滩病毒核蛋白及其氨基端２６ｋｕ片段在刺激机体免疫应答中的作用,为汉滩病毒基因工程疫苗研究打下基础。方法 采用基因重组技术和新和层析技术对汉滩病毒核蛋白及其氨基端２６ｋｕ片段进行表达和纯化,并通过体外和体内试验对上述表达产物刺激小鼠免疫应答的作用及其特性进行了初步鉴定。结果 汉滩病毒核蛋白及其２６ｋｕ片段对小鼠均具有较强的免疫原性。ＥＬＩＳＡ检测免疫鼠抗体滴度可达１：３２０     

抗MTB FurB单克隆抗体制备及特性分析

目的制备针对结核分支杆菌FurB蛋白的单克隆抗体(mAb)并分析其特性。方法利用纯化的FurB蛋白,采用腹股沟皮下包埋硝酸纤维素膜和腹腔内注射FurB的方法免疫小鼠,然后进行细胞融合、克隆化制备抗FurB mAb,用Western-blot鉴定其特异性,用ELISA法初步分析其特异性位点和相对亲和力。结果获得3株抗FurB mAb,分别为DD12、BH1和DH8,经Western-blot分析都可与FurB蛋白特异性结合。三株mAb中DH8效价最高达到10-10,相对亲和力,BH1>DH8>DD12,3株mAb的抗原表位相近。结论获得的抗FurB mAb效价高、特异性强,可以作为进一步研究FurB功能和作用的有效工具。     

肝动脉灌注阿霉素毫微粒在荷肝瘤鼠体内的药物分布及药效研究

目的研究阿霉素毫微粒（ＮＡＤＭ）经肝动脉灌注后在荷肝肿瘤鼠体内的药物分布与药效．方法ＳＤ纯系大鼠９０只，建立Ｗ２５６移植性肝癌模型并随机分为６组，每组１５只动物，其中２组供药物分布研究，４组供药效研究．药物分布组经肝动脉以２ｍｇ／ｋｇ药物剂量分别注入ＮＡＤＭ与游离阿霉素（ＦＡＤＭ），每组于给药后１，５，１５ｈ各处死５只大鼠，分别提取血浆、肝、心、脾、肺、肾、肝肿瘤样品，采用反相高效液相色谱荧光检测法测定药物浓度；药效组经肝动脉分别灌注生理盐水（ＮＳ），ＦＡＤＭ、阿霉素加空白毫微粒（ＡＤＭ＋ＮＰ）和ＮＡＤＭ．结果给药后１，５，１５ｈ时ＮＡＤＭ组大鼠肝、脾、肝肿瘤中阿霉素浓度均显著高于ＦＡＤＭ组（Ｐ＜００１），而血浆、心、肺中阿霉素浓度则显著降低（Ｐ＜００１）．与ＦＡＤＭ及ＡＤＭ＋ＮＰ组相比，经ＮＡＤＭ治疗的大鼠生存期显著延长（Ｐ＜００１），对肿瘤生长的抑制更为明显（Ｐ＜００１），肿瘤坏死更广泛，更彻底．结论ＮＡＤＭ经肝动脉给药后改变了阿霉素的体内分布特征，对肝肿瘤表现出明显的靶向性，并显著提高阿霉素的疗效     

结核分支杆菌铁调控蛋白FurA的基因表达及单克隆抗体的制备

目的表达结核分支杆菌FurA蛋白,并制备针对该蛋白的单克隆抗体(mAb)。方法将重组质粒转化入E.coliBL21,挑出阳性克隆,IPTG诱导表达重组的6×His融合蛋白。采用小鼠腹股沟皮下NC膜免疫的方法免疫小鼠,并进行细胞融合、克隆化制备抗FurAmAb,用ELISA法初步鉴定其特异性位点和相对亲和力。结果获得了高表达的融合蛋白,融合蛋白经SDS-PAGE分析,在相对分子量Mr为23×103处有特异的蛋白条带,为目的蛋白。用该融合蛋白免疫小鼠后,获得了1株抗FurAmAb。结论所获得的抗FurAmAb特异性强、效价高,对进一步研究FurA在结核分支杆菌铁代谢及致病中的作用提供了有力的工具。     

乙型脑炎的流行病学与临床

流行性乙型脑炎 (简称乙脑 )为最常见的病毒性脑炎 ,由日本脑炎病毒 (JEV)引起。乙型脑炎的命名最初是用于区别昏睡性脑炎 ,即甲型脑炎 (后者现已非常少见 )。据估计 ,目前乙脑每年发病约有 5万例 ,其中约 1/ 3的病例死亡 ,且有一半的幸存者可发生严重的神经精神后遗症。中国、东南亚、印度的发病率较高。蚊虫传播的其他嗜神经性黄病毒还包括 :澳大利亚的墨累谷脑炎、北美的圣路易脑炎、以及在非洲、中东和部分欧洲地区发现的西尼罗病毒。JEV与其他的嗜神经性黄病毒具有许多相同的流行病学和病毒学特性 ,所致疾病也有相似的临床特征。1　…     

益气活血化痰通络汤治疗急性脑梗死64例疗效分析

目的:探讨益气活血化痰通络汤治疗急性脑梗死的临床效果.方法:将我院收治的64例急性脑梗死患者,随机分为对照组和观察组.对照组采用常规治疗,观察组采用益气活血化痰通络汤治疗.分析治疗效果,神经功能缺损程度评分改善情况.结果:经治疗后,对照组总有效率71.9%,观察组总有效率93.8%.观察组总有效率显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).观察组与对照组治疗前神经功能缺损程度评分经统计学分析,差异无统计学意义(P＞0.05).观察组治疗后神经功能缺损程度评分显著优于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:采用益气活血化痰通络汤治疗急性脑梗死,疗效优于常规治疗.治疗后患者神经功能缺损程度评分显著优于常规治疗,使用方便,值得临床推广应用.     

结核分枝杆菌Ag85B-ESAT6融合蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答及其保护力

目的: 研究Ag85B与ESAT6融合蛋白在小鼠体内诱导的体液和细胞免疫应答以及对MTB感染小鼠的保护力.方法: 采用皮下包埋的方法,将预先转移到硝酸纤维素膜上的表达蛋白免疫小鼠3次,每次间隔2 wk,用MTB培养上清滤液蛋白(culture filtrate proteins, CFP)作为抗原,ELASA测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度.为了检测融合蛋白免疫小鼠引起的细胞免疫应答,最后一次免疫完成后4 wk,取一部分免疫小鼠分离脾淋巴细胞,体外用抗原刺激,MTT法检测淋巴细胞刺激反应,ELISA检测悬液中IFN-γ水平. 另一部分免疫的BALB/c小鼠经尾静脉感染MTB毒株H37Rv,4 wk后计数脾脏细菌负荷数. 结果: Ag85B-ESAT6 蛋白免疫小鼠血清特异性抗体滴度为1: 1000,ESAT6-Ag85B 蛋白免疫小鼠血清特异性抗体滴度为1: 5000. 融合蛋白Ag85B-ESAT6和ESAT6-Ag85B免疫组淋巴细胞刺增殖指数分别为2.40±0.17 和2.60±0.25,而生理盐水组只有0.90±0.21;相对应的IFN-γ含量分别为(3.51±0.30) μg/L和(4.05±0.41) μg/L,显著高与生理盐水对照组(0.50±0.25) μg/L, P<0.05,但不及BCG免疫组(5.55±0.31) μg/L. 与生理盐水免疫组(细菌负荷6.31±0.13)相比较,融合蛋白免疫的BALB/c小鼠,对攻击感染后抗MTB在脾脏中增殖有显著作用(细菌负荷分别为5.04±0.11和5.15±0.29, P<0.05),但与BCG免疫组相比脾脏细菌负荷减少甚微. 结论: Ag85B与ESAT6融合蛋白可作为新型结核疫苗的候选组分.     

结核分枝杆菌furA基因片段的克隆、表达和分离纯化

目的: 获得结核分枝杆菌furA基因片段并高效表达、纯化. 方法: 用PCR技术从MTB毒株H37Rv-DNA中扩增出相应大小的DNA片段,将片段与pGEM-T-easy 载体连接后测序. 将测序正确的furA按照BamHⅠ和HindⅢ酶切位点克隆入原核表达载体pRSET-A,将连接产物转化入E.coli BL21,挑出阳性克隆,IPTG诱导表达重组的(His)6融合蛋白. 对重组融合蛋白通过镍柱进行纯化. 结果: PCR获得的furA序列与Genbank报道的一致(为453 bp). 重组载体在E.coli BL21中以可溶形式高效表达,融合蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析,在Mr为23.0×103处有特异的蛋白条带,目的蛋白表达量占菌体总蛋白量的10%,重组蛋白经镍柱进行纯化后,得到了高纯度的FurA融合蛋白. 结论: 成功克隆结核分枝杆菌furA基因片段,并在E.coli BL21中高效表达,亲和层析纯化后获得高纯度FurA融合蛋白.     

半套式PCR扩增人抗HFRS病毒抗体基因及Fd段基因的克隆和序列分析

从肾综合征出血热恢复期患者外周血淋巴细胞（ＰＢＬ） 中提取细胞总ＲＮＡ, 反转录成ｃＤＮＡ 。以之为模板,用半套式聚合酶链反应（ＰＣＲ） 扩增人Ｉｇ Ｇ 抗体Ｆｄ 段及轻链基因,并将Ｆｄ 段基因克隆入噬菌体载体ｐｃｏ ｍ ｂ３ ;经酶切鉴定后,再亚克隆入ｐＧＥＭ７ｚｆ ,筛选阳性克隆测序。经计算机分析,Ｆｄ 段基因的全长为６３９ｂｐ ,编码２１３ 个氨基酸,属于人Ｉｇ Ｇ２ 亚类。     

单克隆抗体用于肾综合征出血热病原学及感染动物保护作用的研究

本项研究是基础与应用相结合的系列研究,主要包括以下五个方面的内容。 1.高特异性、高中和活性抗 HFRS病毒McAb的制备先后建立了89株稳定分泌抗肾综合征出血热(HFRS)病毒单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系。(1)上述McAb的特异性各不相同,包括HFRS病毒组特异性的、亚组特异性的、