北京大学转化医学论坛暨中国动脉粥样硬化前沿论坛会议纪要

<正>2011年7月16日至17日,北京大学转化医学论坛暨中国动脉粥样硬化前沿论坛在北京港澳中心瑞士酒店隆重召开,本届会议是由北京大学医学部心血管内科学系、卫生部心血管分子生物学与调节肽重点实验室主办,中国医师协会心血管内科医师分会合办,人民卫生出版社《中国医学前沿杂志(电子版)》编辑部、北京力生心血管健康基     

RhoC、ROCKⅠ在宫颈癌前病变和宫颈癌中的表达及意义

目的:探讨RhoC和ROCKⅠ基因在不同等级宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和宫颈癌中的表达情况及二者与宫颈癌发生的相关性.方法:采用免疫组化的方法检测慢性炎症28例、CINⅠ25例、CINⅡ28例、CINⅢ28例、宫颈癌27例中RhoC和ROCKⅠ基因的表...     

苯肾上腺素荧光标记物的合成及其生物活性的鉴定

目的:合成α1-肾上腺素受体特异性激动剂--苯肾上腺素(phenylephrine,PE)荧光标记物,检测其药理学生物活性.方法:用化学合成的方法将绿色荧光染料BODIPY-FL和PE进行微量缩合反应,薄层色谱法分离和纯化,用薄层色谱和质谱分析对其纯度和分子结构进行鉴定.通过分子生物学Western blot方法检测其药理学生物活性.结果:将BODIPY-FL与PE在无水、无氧和避光条件下进行羧合反应,经薄层色谱分离、纯化得到具有荧光的新化合物--BODIPY-FL-PE,结构经紫外光谱和质谱分析得到证实.Western blot实验表明BODIPY-FL-PE与PE同样具有激动α1-肾上腺素受体,使胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)激活的药理作用.结论:经微量缩合反应合成的BODIPY-FL-PE具有α1-肾上腺素受体激动剂药理学特性,可以用于肾上腺素受体行为观测,为进一步研究活细胞中肾上腺素受体的动态行为提供了工具.     

不同交感-儿茶酚胺系统激活模式在心脏重塑中的作用

目的交感神经的过度激活是导致心肌肥厚的重要因素，但它在生理性及病理性心肌重塑中所起的作用是否存在差异及其机制，目前尚不清楚。本研究旨在探讨不同的交感．儿茶酚胺系统激活模式在生理性和病理性心肌重塑中的作用及其可能的机制。方法分别采用大鼠游泳训练与去甲肾上腺素（norepinephrine，NE）微泵灌注模拟两种不同的儿茶酚胺分泌模式（间断型及持续型），制备心肌肥厚动物模型；利用超声心动图检测、免疫组化等手段观察心脏的功能及结构变化；采用Westernblot及生化方法检测能量代谢的关键激酶——腺苷酸．活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）α亚单位的活性。结果与对照组相比，游泳训练与NE灌注均可显著增加大鼠血浆中去甲肾上腺素的水平。但是，NE灌注组大鼠的心肌肥厚和组织纤维化程度均较游泳训练组明显增强，且伴有心功能的进行性下降，出现心力衰竭。NE灌注同时可诱导心肌组织AMPK活性显著增强。结论上述资料提示，不同的交感-儿茶酚胺激活模式可能是影响心肌重塑转归的一个重要因素，而AMPK可能参与调控病理性心脏重塑过程中能量代谢的适应性变化。     

p38MAPK参与千金藤素诱导的心肌细胞凋亡

目的: 探讨千金藤素(CEP)致Sprague-Dawley(SD)乳大鼠心肌细胞的凋亡作用及其信号途径。方法: 应用MTT法检测千金藤素对心肌细胞活性的抑制作用;利用Hoechst 33342染色及Western blotting方法检测凋亡相关信号分子caspase-3,观察CEP致心肌细胞凋亡的作用;采用Western blotting法观测 CEP对有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)家族3个主要信号分子c-Jun氨基端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)、p38 MAPK磷酸化水平的影响,并利用ERK和p38 MAPK的特异性抑制剂,分别验证两种分子所介导的信号通路在CEP致心肌细胞凋亡中的作用。结果: (1)CEP能够剂量依赖和时间依赖地抑制心肌细胞的活性。(2)CEP作用于心肌细胞,出现细胞核碎裂现象和caspase-3激活。(3)CEP作用下p38 MAPK和ERK磷酸化水平显著增强,JNK的磷酸化状态未发生显著改变。(4)p38 MAPK磷酸化抑制剂SB203580显著减轻CEP对心肌细胞活性的抑制作用;ERK磷酸化抑制剂PD98059不能影响CEP对心肌细胞活性的抑制作用。结论: p38 MAPK参与CEP致心肌细胞凋亡作用。     

压力负荷诱导大鼠心肌重塑早期左室舒张功能评价

目的: 探讨压力负荷诱导大鼠心肌肥厚和左室舒张功能的评价方法。方法: 采用横向主动脉缩窄法(TAC)建立压力负荷诱导大鼠心肌重塑模型,应用超声心动图、有创血流动力学检测及心肌组织中羟脯氨酸含量测定等方法评价左室结构和舒张功能。结果: (1)超声心动图测定的TAC组术后3周大鼠左室壁厚度显著大于假手术组 ;TAC组术后3周左室后壁心肌舒张早期运动速度(E')与假手术组相比显著下降 ,术后6周进一步降低。(2)解剖称重左室重量/胫骨长度在TAC组显著高于假手术组 。(3)TAC组校正的左室内压力最大下降速度(dp/dt_min/LVSP)在术后3周有下降趋势(48.9±5.9 vs 63.5±9.9 ),术后6周下降显著(35.4±4.0 vs 54.4±2.9,P<0.01)。 (4)天狼猩红染色可见TAC组血管周围胶原沉积明显多于假手术组,术后6周TAC组心肌组织中羟脯氨酸含量显著高于假手术组 。 结论: 超声心动图组织多普勒测定左室后壁心肌运动速度是评价压力负荷心肌重塑大鼠早期左室舒张功能异常的可靠指标。     

长期饮用普萘洛尔对大鼠心脏和血淋巴细胞β肾上腺素受体效应及亚型的影响

采用放射配体结合实验，离体左心房收缩功能实验，逆转录聚合酶链反应及高效液相色谱等方法研究长期饮用普萘洛尔（７０ｍｇｋｇ－１ｄ－１，８ｗｋ）对大鼠心脏β肾上腺素受体（β－ＡＲ）及其亚型，外周血淋巴细胞β２－ＡＲ和血浆儿茶酚胺水平的影响．结果表明长期饮用普萘洛尔后：（１）心脏β－ＡＲ密度从对照组的４１±８ｐｍｏｌｇ－１蛋白上调到６１±９ｐｍｏｌｇ－１蛋白，ＣＧＰ２０７１２Ａ竞争抑制曲线２位点分析结果显示为β１和β２－ＡＲ同等程度上调；（２）心脏β１－ＡＲｍＲ－ＮＡ水平不变而β２－ＡＲｍＲＮＡ水平显著增加；（３）β－ＡＲ及其亚型介导的离体左心房正性变力效应增强，以β２－ＡＲ的功能改变更为显著；（４）血淋巴细胞β２－ＡＲ数目从对照组的１９±７ｐｍｏｌｇ－１蛋白上调至３２±８ｐｍｏｌｇ－１蛋白；（５）血浆去甲肾上腺素水平（０．２１±０．１２μｇＬ－１）明显低于对照组（０．３８±０．１５μｇＬ－１）．     

大鼠前列腺α1-肾上腺素受体亚型分析

用离体组织收缩功能实验和放射配体结合实验, 分析大鼠前列腺α₁-肾上腺素受体(α₁-AR)三种亚型的分布及其介导的收缩效应. 结果显示: 标本经用氯乙基可乐定(CEC)预处理后,去氧肾上腺素(PE)介导的最大收缩效应无明显下降, α₁-AR亚型选择性拮抗剂5-MU, WB4101, 萘哌地尔, 尼古地平, BMY7378抑制PE介导前列腺收缩的pA₂值与克隆α_1A-AR亚型的K_i值呈高度相关(r=0.91). 在放射配体结合实验中, 标本经CEC预处理后, ［¹²⁵I］BE与α₁-AR的最大结合容量由1.09±0.32 nmol·g^-1蛋白质明显下降至0.33±0.08 nmol·g^-1蛋白质. α_1A-, α_1B- , α_1D-AR密度分别约占总受体密度的15%, 65%和20%. 结果提示大鼠前列腺中尽管α₁-AR三种亚型均有分布, 但引起平滑肌收缩的功能性α₁-AR以α_1A-AR为主.     

12月龄与3月龄大鼠心脏α1肾上腺素受体亚型的比较

采用［¹²⁵I］BE2254放射配体结合实验和离体灌流左心房收缩功能实验, 比较12月龄与3月龄大鼠心脏α₁肾上腺素受体(α₁-AR)三种亚型分布及其介导的正性变力效应的差别. 结果显示与3月龄大鼠相比, 12月龄大鼠: (1) 心脏α₁-AR最大结合容量显著减少; 去甲肾上腺素(NE)通过激动α₁-AR引起的左心房累积浓度-收缩效应曲线显著右移; (2) (+)尼古地平, BMY7378和WB4101的高亲和性位点所占百分比显著下降; (3)氯乙基可乐定预处理使NE引起的左心房最大收缩效应的下降幅度, 以及舍吲哚, BMY7378和WB4101拮抗NE介导正性变力效应的pA₂值均无显著差异. 提示12月龄大鼠较3月龄大鼠心脏α₁-AR总数减少, 且以α_1A和α_1D-AR亚型更为显著; α₁-AR介导的正性变力效应明显降低, α_1B-AR的功能效率降低最为明显.