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71.
目的探讨简单稳定、可靠的新生SD大鼠心室肌细胞原代培养方法,使分离的心室肌细胞存活率和纯度更高。方法用胰蛋白酶和胶原酶Ⅱ型联合消化,分离新生大鼠心室肌细胞,离心使用低转速(750r·6min-1),进行体外培养,观察使用培养板贴壁细胞的原位计数方法计算存活率,观察心室肌细胞生存过程当中的形态以及心率变化,并以细胞免疫荧光进行心室肌细胞纯度鉴定,结合共聚焦镜下观察心室肌细胞形态结构。结果最初分离下来的心室肌细胞为圆形,形状饱满,亮度高,培养第1天,心肌细胞多数贴壁,伸出伪足,少数贴壁的单个细胞开始出现搏动,搏动的频率和节律不齐,培养3~4d后可铺满成单层,呈大片同心圆状,开始同步搏动,收缩有力,搏动频率多在40~90次·min-1。培养第5~7天的心室肌细胞搏动频率趋于一致,搏动频率多在80~100次·min-1。直至第9d后细胞的搏动频率逐渐下降,成纤维细胞逐渐优势生长,搏动细胞的比例也逐渐降低,心室肌细胞形态开始明显改变,培养第20天时,部分细胞停止搏动,形态发生很大的改变,心室肌细胞的胞浆出现空泡,原先出现的伪足的地方变细,开始出现断续的表现,细胞大多脱落;免疫荧光显示培养的心室肌细胞纯度达93%以上;平均存活率达96%。结论改进的细胞培养技术可获得生长状态良好的心室肌细胞,提高存活率和心室肌细胞纯度。 相似文献
72.
为探讨细胞外组蛋白对小鼠原代单核细胞活力的影响以及可能机制,将小鼠原代单核细胞培养于含不同浓度组蛋白的培养基上,采用MTT染色法检测细胞活性并筛选合适的组蛋白浓度。将原代单核细胞培养于特定浓度组蛋白培养基上,利用MTT染色法检测不同时间的细胞活性。分别用自噬抑制剂和死亡抑制剂预处理细胞,采用MTT染色法结合PI-Annexin V双染法、流式细胞术检测细胞活性和死亡率。与对照组比较,组蛋白组细胞死亡率明显升高(P0.05),应用死亡抑制剂后,细胞死亡率明显下降(P0.05)。细胞外组蛋白可抑制原代单核细胞活性,诱导原代单核细胞死亡,且具有浓度和时间依赖性。自噬可能会增加组蛋白诱导的单核细胞死亡。 相似文献
73.
74.
肥胖症是一种复杂的多因素疾病,是糖、蛋白质和脂肪的代谢异常所致的脂肪存储量显著增加。成年女性随着年龄增长而出现体脂量明显增加的趋势,且绝经期后随着性激素水平的骤然下降--尤其是雌激素水平的降低,机体的脂肪细胞分化异常所造成的脂肪蓄积,主要集中在身体的中央(主要是腹部、臀部)区域。而绝经妇女性激素结合球蛋白水平与肥胖,尤其是腹型肥胖具有高度负相关性[1]。就许多疾病而言,局部脂肪异常堆积相较全身体脂含量的增多可能是更重要的 相似文献
75.
《中国老年学杂志》2015,(24)
目的研究心外膜脂肪细胞核因子(NF)-κB信号途径抑制在抗动脉粥样硬化中的作用。方法建立泡沫细胞模型,分为空白组,转染试剂组,siRNA干扰组,高脂组,高脂+SRT1720组,高脂+SRT1720+siRNA干扰组。采用油红O染色判断模型的建立,采用Western印迹方法进行蛋白表达的分析。结果建立模型成功;与高脂组比较,高脂+SRT1720组SIRT1蛋白表达量升高显著,NF-κB及其下游靶分子肿瘤坏死因子(TNF)-α蛋白表达量下降显著(P0.05)。与高脂+SRT1720组比较,高脂+SRT1720+siRNA干扰组SIRT 1蛋白表达量下降显著,NF-κB及其下游靶分子TNF-α蛋白表达量升高显著(均P0.05)。结论泡沫细胞中SIRT1是NF-κB信号通路的上游,通过抑制心外膜脂肪组织NF-κB炎症信号途径,参与调节泡沫细胞从动脉粥样硬化斑块中移出,可为防治冠状动脉粥样硬化的治疗提供新的手段。 相似文献
76.
目的:建立一种简便易行地获取大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元原代培养的方法。方法:窒息法处死大鼠,打开胸腔经心脏放血后,从背部取出一段脊柱。将脊柱稍加修剪后,从中轴线处打开脊柱,暴露脊髓,在其两侧找到椎间孔内的为DRG,用器械离断神经纤维,取出DRG。Ⅰ胶原酶联合Trypsin-EDTA先消化DRG,再用吹法DRG以获得单个神经元;用TNB-100 basal Medium的复合培养液在经过0.1 mg/ml PolyD-lysine hydrobromide和0.01 mg/ml lamina包被的培养皿内,于5%CO2,37℃孵箱内培养48 h。免疫组织化学方法检测神经元内标志物BetaⅢTubulin的表达,用Alexa flour 488标记的二抗进行显色,倒置荧光显微镜下观察。结果:获得了单层贴壁的神经元,其胞体形状多样,突起生长良好,细胞之间正在逐步形成网络连接;免疫荧光染色显示,细胞的胞体和突起中均可高表达BetaⅢTubulin,且荧光染色较强。结论:运用该方法可以简便地从大鼠DRG内获得单层贴壁的原代神经元。 相似文献
77.
棕色脂肪在体温调节和能量代谢方面发挥着重要的生理作用。而脂肪细胞分化及其调控失常与人类许多疾病如肥胖、2型糖尿病、高血压、高血脂及多种癌症等密切相关。本文从脂肪细胞的起源、前脂肪细胞向脂肪细胞的分化过程、脂肪细胞分化及调控等方面的研究进行了综述,以期为上述疾病的预防与治疗提供重要的分子生物学基础。 相似文献
78.
80.
背景:肠道菌群与棕色脂肪组织之间存在着复杂的调控机制和广泛联系,但是目前机制尚未阐明。目的:揭示棕色脂肪组织与肠道菌群间的潜在关系,为接下来的研究提供实验思路。方法:由第一作者应用计算机以“brown adipose tissue,intestinal flora,obesity,peroxisome proliferator activated receptor family”为英文检索词,以“棕色脂肪组织,肠道菌群,肥胖,过氧化物酶体增殖物激活受体家族”为中文检索词在PubMed、万方、维普、知网数据库中检索1994-01-01/2020-06-01的相关文献,并对文献的相关内容进一步筛选、归纳分析与总结,最终纳入38篇相关文献进行综述。结果与结论:①肠道菌群失调会影响过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptors,PPARs),PPARs又可以影响棕色脂肪组织的代谢进而调控肥胖;PPARα、PPARβ和PPARγ都与脂肪代谢有关,可以被相应的激活剂激活促进棕色脂肪组织的表达,其中PPARγ在肠道菌群和棕色脂肪组织中的联系最为密切,肠道菌群代谢的变化可以上调PPARγ的表达,从而激活棕色脂肪组织达到减肥的目的;②调节肠道菌群与棕色脂肪组织的关系可以治疗肥胖症;③从棕色脂肪组织、PPARs信号通路两者中研究抵抗肥胖的相关药物前景可观。 相似文献