用于膜片钳研究的大鼠背根神经节细胞急性分离技术的改良

目的通过技术改良,进一步摸索适于膜片钳实验的成年大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)细胞的急性分离方法。方法应用显微外科技术获取成年大鼠DRG,采用改良的双酶顺序消化(先胶原酶,后胰蛋白酶)及双血清(胎牛血清+马血清)共同培养法,急性分离培养DRG。倒置显微镜下观察神经元的形态,选取已贴壁的细胞,用全细胞膜片钳技术记录其基本膜电生理特性。加入河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)后再次记录DRG神经元的钠离子电流变化。结果本实验可获得形态良好、结构完整的单个DRG神经元,表面光亮,胞膜完整清晰,呈圆形或椭圆形。其静息膜电位为(55.22±4.39)mV,加入TTX后可记录到缓慢失活的河豚毒素不敏感(tetrodotoxin-resistant,TTX-r)的钠离子电流。其中,中等直径DRG神经元高阻封接成功率为73.2%,高于小直径和大直径DRG神经元的封接成功率(P<0.05)。结论经改良的DRG急性分离方法分离效率高、可操作性强。分离得到的中等直径DRG神经元状态良好,更适合膜片钳实验。     

在体记录清醒小鼠丘脑网状核场电位多通道电生理技术平台的建立和验证

目的 建立能够在体记录清醒自由活动小鼠丘脑网状核场电位多通道电生理记录平台.方法 在小鼠丘脑网状核植入记录电极,采用OmniPlex神经数据采集系统记录清醒自由活动小鼠丘脑网状核的局部场电位,用Offline Sorter和NeuroExplore等软件对局部场电位滤波,对滤波后的γ和θ振荡场电位进行频谱分析.小鼠ip...     

爪蟾卵母细胞双电极电压钳记录技术及其内源性外向电流的研究

目的：建立爪蟾卵母细胞双电极电压钳记录技术。方法：在去除滤泡膜的非洲爪蟾卵母细胞上，建立双电极电压钳记录技术，并使用该技术观察爪蟾卵母细胞表达的内源性递质门控性和电压门控性离子通道电流。结果：灌流液中分别加入NMDA受体、γ-氨基丁酸和烟碱受体激动剂，均未能在爪蟾卵母细胞上诱发出电流。去极化刺激仅可诱发出一外向电流。此电流的幅度随细胞外液中Ca^2＋浓度的增加而增大。当外液中无Ca^2＋或无Cl^-时，电流消失。此电流不被TEA所阻断，但能被MnCl2可逆性阻断。结论：成功建立了爪蟾卵母细胞双电极电压钳记录技术。去极化刺激在爪蟾卵母细胞上诱发出的外向电流为钙依赖性Cl^-电流。     

螺环类N型钙通道阻断剂的合成及其生物活性

目的：寻找具有高镇痛活性的小分子N型钙通道阻断剂。方法：以苄基哌啶酮、芳胺为起始原料,经水解、环合、氢化脱苄等多步反应合成系列化合物,并通过小鼠乙酸扭体模型和N型钙通道电流抑制实验评价化合物的镇痛活性和作用机制。结果：共合成并评价了47个化合物,其中10个化合物具有明显镇痛活性,1个化合物的镇痛活性明显高于阳性化合物。结论：所合成的以螺环为特征的系列化合物具有N型钙通道阻断活性,其中化合物405的电流抑制率为（85±2．7）％,且具有明显的镇痛活性,值得进一步研究。     

爪蟾卵母细胞表达hERG1b钾通道的电生理学特性研究

目的建立人类ether-a-go-go相关基因1b（human ether-a-go-go-related gene 1b,hERG1b）钾通道在爪蟾卵母细胞上的异源性表达方法和hERG1b钾通道电流记录方法,研究hERG1b钾通道的电生理学特性。方法将编码hERG1b亚基的cRNA注入爪蟾卵母细胞中表达hERG1b钾通道,使用双电极电压钳技术记录全细胞电流,分析hERG1b钾通道电流门控动力学特征和电生理特性。结果与结论利用双电极电压钳技术,记录到hERG1b钾电流,该电流具有内向整流特性,胞外钾离子浓度升高可增大hERG1b钾通道电流幅度。与hERG1a钾通道电流相比,hERG1b钾通道电流的去激活速度明显加快,表现出快速去激活的电生理特征。     

吗啡对大鼠海马神经元钾、钙通道的作用

吗啡是常见的阿片类镇痛药，长时间应用可导致吗啡耐受和依赖，其作用机制十分复杂。海马中同时包含μ，κ，δ阿片受体，与吗啡耐受及依赖有一定的关系，并参与机体的痛觉调制过程，因而了解吗啡对海马神经元离子通道的作用对阐明吗啡的镇痛、耐受及依赖机制具有重要的理论及实际意义。本文报导吗啡对培养的海马神经元电压门控性钾、钙     

吗啡对大鼠海马神经元突触传递的作用及机制

目的从离子通道角度研究吗啡对中枢神经系统兴奋性及抑制性突触传递的作用,以探讨吗啡镇痛机制.方法原代培养新生Wistar大鼠的海马神经元.采用膜片钳技术研究吗啡对其兴奋性及抑制性突触后电流及谷氨酸诱发电流的影响.结果①吗啡可明显增强海马神经元兴奋性突触传递,加吗啡后自发兴奋性突触后电流发放频率增加了207.8%(t=42.182 8,P＜0.01).此作用可被阿片受体阻断剂纳洛酮阻断;②吗啡对微小兴奋性突触后电流的发放频率及谷氨酸诱发电流的幅度没有明显影响(t=0.962,t=0.791,P＞0.05);③吗啡可明显抑制神经元自发抑制性突触后电流,纳洛酮可拮抗吗啡作用(P＜0.01).结论吗啡对海马神经元的兴奋作用不是由于吗啡直接作用于兴奋性氨基酸-谷氨酸突触传递过程,而是可能由于抑制了抑制性中间神经元,间接产生的兴奋达到镇痛作用.     

吗啡对新生鼠海马神经元抑制性突触后电流的作用

目的 观察吗啡急性作用于新生鼠海马神经元时，对神经元微小抑制性突触后电流（mIPSC)和自发抑制性突触后电流（sIPSC)的作用。方法 应用全细胞膜片钳技术。结果 吗啡急性刺激海马神经元时，使mIPSC和sIPSC的幅度及频率减低，纳洛酮对其有翻转作用。结论 吗啡抑制了突触前膜GABA随机量子释放，使mIPSC幅度及频率降低；突触前膜GABA随机量子释放的减少间接影响了由突触前膜自发动作电位诱发的GABA量子释放数目，导致sIPSC频率与幅度降低，从而降低了突触抑制，纳洛酮对其有翻转作用。     

白黎芦醇对垂体腺瘤GH3细胞生长及其分子机制的研究

白黎芦醇(RE)是一种植物雌激素，具有多种有益作用，如调节脂代谢、抑制血小板聚集、保护心血管缺血性损伤、抗炎和抗肿瘤等，其生化机制包括抗自由基、诱导细胞凋亡、调节细胞周期和肿瘤相关酶的活性等。鉴于其多方面的有益作用，人们希望把RE开发成选择性雌激素受体调节剂(SERM)，用于与雌激素相关的疾病和抗肿瘤药物或化学预防药。垂体泌乳素腺瘤是人类最常见的功能性垂体肿瘤，