检测烟曲霉菌GM抗原生物素-亲和素-夹心酶联免疫吸附试验法的建立

本研究用重组烟曲霉半乳糖甘露聚糖 (ＡＦＭＰ1) ,制备免疫血清 ,建立一种以生物素 亲和素 (ＢＡ)系统为基础的夹心酶联免疫吸附试验 (ＥＬＩＳＡ)法 ,快速检测烟曲霉ＧＭ抗原[1] 。一、材料与方法1.动物和菌株来源 :家兔和豚鼠购自第一军医大学动物所 ,表达ＧＳＴ ＡＦＭＰ1融合蛋白ＢＬ2 1菌种及全部真菌标准株均由香港大学微生物系提供。2 .主要试剂 :ＧＳＴ融合蛋白纯化试剂盒、ＰｒｏｔｅｉｎＧＳｅｐｈａｒｏｓｅ 4Ｂ和ＥＣＬ底物显色剂 (ＡｍｅｒｓｈａｍＰｈａｒｍａｃｉａ公司 ) ,弗氏佐剂 (Ｓｉｇｍａ产品 ) ,活化Ｓｕｌｆｏ ＮＨ…     

ECHO病毒9型致手足口病实验室鉴定1例

1病历摘要患儿,男,1岁11月,4 d前无明显诱因反复发热,次日发现口腔疱疹,伴刺痛及进食减少,无咳嗽、流涕。双手、双腿、双足出现散在红色小疱疹,周围有红晕,部分溃破,入院诊断"手足口病"。患儿入院后抽搐1次,表现为双上肢抖动,双眼上翻,持续2 min自行缓解,无口吐白沫。体格检查:体温38.1℃,脉搏120次/min,呼吸25次/min,体重10.5 kg,营养中等,发育良好,神志清楚,双手、下肢、足、口腔可见散在     

川芎嗪和阿斯匹林对组织培养中内皮细胞生长的影响

研究表明,川芎嗪、阿斯匹林能有效地提高PGI_2/TxA_2比值,从而提高内皮化人造血管的通畅率。本文旨在探讨这两种药物对内皮细胞生长的影响,对临床用药提供依据。 材料及方法 取成人大网膜10g,经D-Hank’s液清洗,0.8％胶原酶消化,淋巴细胞分离液分离出内皮细胞,加入含生长因子的1640-20培养基中,     

成人静脉内皮细胞单次传代大规模体外培养

用胶原酶消化成人静脉，总数：２５．９±６．７２×１０￣３个细胞。获取９．１２±４．３×１０￣３个细胞／ｃｍ￣２，活细胞率为９９％。以２．３９±０．４３×１０￣３个细胞／ｃｍ￣２的接种密度将其接种到一次性塑料培养皿中进行原代培养。待细胞进入增殖平台期后（生长时间为：７．２５±０．５ｄ），以１：２６比例将原代细胞进行传代培养。经８±０．８２ｄ培养后，细胞接触仰制形成。整个体外培养扩增时间为：１５±１．４ｄ，血管内皮细胞数增加了３３３±４０倍。经荧光标记第Ⅷ因子相关抗原单克隆抗体和透射电镜观察证实：１９９％以上的原代及传代细胞为血管内皮细胞。扩增后的血管内皮细胞染色体２ｎ＝４６条，未发现异倍体细胞。在原代和传代细胞的条件培养液内ｔ－ＰＡ和ＶＷＦ含量相差无统计学意义。     

Ⅰ型登革病毒NS1抗原捕获ELISA的建立和初步临床诊断应用

目的以登革病毒特异性非结构蛋白1（NS1）单克隆抗体为基础建立Ⅰ型登革病毒（DEN1）抗原检测的酶联免疫吸附（ELISA）法，并探索从病人早期血清样品中检测DEN1-NS1的可行性。方法利用已制备的抗DEN1-NS1单克隆抗体（单抗），进行多种抗体组合配对优化模式的分析，建立双抗体夹心抗原捕获ELISA，以469份健康人血清样品确定cut off值，检测DEN1感染患者急性期血清样品。结果对多种抗体组合反复筛选，最终确立了最佳的包被单抗和酶标测定单抗，建立了抗体夹心捕获DEN1-NS1抗原的酶联免疫测定方法，能特异检测DEN1，与其他血清型登革病毒不发生交叉反应。检测16例临床确诊DEN1感染病人急性期血清样品，15例呈特异的抗原反应阳性。结论成功建立了DEN1-NS1抗原捕获ELISA并应用于临床血清样品的检测，为登革热的早期实验室诊断提供技术方法。     

恒河猴血管内皮细胞原位获取的实验研究

应用原位获取法从５６条恒可猴中的５４条血管中获取了内皮细胞。、Ａ组用０．１％Ⅱ胶原酶消化２５ｍｉｎ，Ｂ组用０．１％Ⅱ型胶原酶消化１５ｍｉｎ。结果表明，Ａ组的内皮细胞获取率明显高于Ｂ组。Ａ组及Ｂ组中颈外静脉，上肢浅静脉、髂总动脉的内皮细胞获取率明显高于既往的机械获取法，灌注酶解消化法，外翻酶解消化法（Ｐ〈０．０１０，Ｂ组中下腔静脉及腹主 在消化过程中出现胶魇酶自血管壁渗出，使得内皮细胞获取率明显下降     

体外扩增恒河猴自体内皮细胞人工血管移植研究（一）

目的:为恒河猴人工血管移植研究提供内皮化人工血管.方法;将恒河猴表浅静脉内皮细胞在体外培养13.89±1.36天;扩增培养的内皮细胞衬里于用纤维蛋白胶预衬的ePTEE人工血管,继续培养9天.结果:细胞数增加147.93±88.68倍.所培养的细胞为二倍体细胞,纯度99%.原代及传代细胞培养上清液中6-keto-PGFla和vWF含量无显著性差异.细胞种植后2小时和9天、人工血管腔面见一层均匀的基质,基质表面有一层连续的内皮细胞单层.内皮细胞紧密排列,呈梭状,形态饱满.细胞种植后9天,内皮细胞胞浆内微丝、微管数量明显增加,表明细胞骨骼成熟.结论:内皮化人工血管可用于置换恒河猴动脉.     

曲霉抗原双抗体夹心ELISA法特异性检测

目的 用2组曲霉单克隆抗体(mAbs)建立特异性识别不同种类曲霉抗原的检测方法.方法 采用天然烟曲霉抗原免疫,获得广谱针对曲霉抗原的单克隆抗体;采用重组烟曲霉抗原获得特异性针对烟曲霉抗原的单克隆抗体,用间接免疫荧光鉴定,并分别建立2种双抗体夹心ELISA法,对19种常见的环境和临床分离曲霉株、马尔尼菲氏青霉菌及念珠菌培养液进行检测.结果 间接免疫荧光显示,用天然烟曲霉抗原免疫获得的单克隆抗体(mAbs-1)可广谱识别多种曲霉分离株,而重组烟曲霉抗原获得的单克降抗体(mAbS-2)仅能特异性结合临床和环境分离的烟曲霉抗原.用mAbs-1建立的双抗体夹心ELISA法可检测19种常见曲霉株培养液;用特异性针对烟曲霉抗原单克降抗体(mAbs-2)建立的双抗体夹心ELISA法可特异性检测临床和环境分离株烟曲霉培养液;与其他曲霉株无交叉反应;2种双抗体夹心ELISA法与马尔尼菲氏青霉菌及念珠菌培养液均无交叉反应.结论 2种曲霉单克降抗体双抗体夹心ELISA法,除可广谱检测环境和临床分离曲霉株,还可以区分烟曲霉与其他曲霉,可作为监测环境、农产品、食品中的曲霉污染和早期诊断曲霉病的新技术手段.     

血管内皮细胞生长因子及其受体在大肠癌组织中的表达

目的观察血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）及其受体（ＫＤＲ）在大肠癌组织中的表达情况。方法利用免疫组化ＳＡＢＣ 法检测８０例大肠癌组织及１０例正常大肠组织中的ＶＥＧＦ及ＫＤＲ的表达。结果ＶＥＧＦ染色性物质主要位于肿瘤细胞 膜及胞浆,ＫＤＲ染色性物质主要位于癌组织及癌组织旁的血管内皮细胞上,大肠癌组织中ＶＥＧＦ和ＫＤＲ的表达阳性 率显著高于正常对照组织（Ｐ＜０．０１）,ＶＥＧＦ和ＫＤＲ的表达与肿瘤的分化程度及Ｄｕｋｅｓ分期密切相关（Ｐ＜０．０５）,与病理 分型无关（Ｐ＞０．０５）。结论ＶＥＧＦ和ＫＤＲ在大肠癌的发生和发展中起着重要作用,可反映大肠癌的恶性程度和进展情 况,并作为预后的指标。