氧化应激致心室重构的研究进展

心室重构意味着血管壁中氧化应激水平的提高,当机体受到有害刺激时,氧化和抗氧化之间失衡,导致大量活性氧簇（ ROS）的产生,加速心室重构的进展。近年来,新型抗氧化剂成为治疗或预防心室重构的靶点,观察抗氧化剂治疗在心室重构患者的长期应用是当下趋势。该文就氧化应激与心室重构之间的关系及相关药物治疗进行综述。     

热休克蛋白90对氧化应激激活的大鼠血管平滑肌细胞细胞外信号调节激酶的作用

目的探讨热休克蛋白90对氧化应激激活的细胞外信号调节激酶的作用。方法取SD雄性大鼠胸主动脉做原代平滑肌细胞培养。用1μmol/L可溶性鸟苷酰环化酶抑制剂6-Anilinoquinoline-5,8-quinolinedione(LY83583)处理4~12代大鼠血管平滑肌细胞不同时间,蛋白免疫印迹检测细胞内热休克蛋白90、磷酸化和未磷酸化细胞外信号调节激酶1/2。用格尔德霉素(热休克蛋白90的特异性阻断剂)预处理细胞30 min,再用LY83583处理120 min,免疫共沉淀和蛋白免疫印迹检测热休克蛋白90与细胞外信号调节激酶及磷酸化的细胞外信号调节激酶的结合,免疫荧光检测细胞核内磷酸化的细胞外信号调节激酶。结果LY83583处理120 min时细胞内热休克蛋白90表达达高峰,较0 min时增加9倍,与细胞外信号调节激酶1/2的第二个活化高峰一致。LY83583处理血管平滑肌细胞120 min后,热休克蛋白90与磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2结合较对照组升高了5.5倍(P<0.01),磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2的量增加了6.1倍(P<0.01),而细胞核内的磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2也明显增加;5μmol/L格尔德霉素预处理后,LY83583的这些效应则被阻断。结论氧化应激增加大鼠血管平滑肌细胞内热休克蛋白90,并增加其与细胞外信号调节激酶1/2及磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2的结合,促进磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2核转位。这可能是氧化应激激活大鼠中膜血管平滑肌细胞内细胞外信号调节激酶1/2信号通路活性的重要机制之一,为抗氧化应激引起的血管中膜平滑肌细胞增殖提供新的分子靶点。     

晚期糖基化终末产物刺激下内皮细胞活性氧的变化及来源分析

目的探讨晚期糖基化终末产物刺激下内皮细胞活性氧的变化及来源。方法培养人脐静脉内皮细胞,观察不同浓度和不同作用时间晚期糖基化终末产物刺激下人脐静脉内皮细胞内活性氧的生成情况,进而分别应用线粒体呼吸链酶复合体、黄嘌呤氧化酶、一氧化氮合酶及NADPH氧化酶抑制剂,观察抑制相应氧化酶后细胞内活性氧的变化,分析各种氧化酶作用大小。结果晚期糖基化终末产物刺激后,内皮细胞内活性氧明显增加,并且随晚期糖基化终末产物浓度和孵育时间的增加而增加,NADPH氧化酶抑制剂二亚苯基碘几乎完全抑制了晚期糖基化终末产物刺激下细胞内活性氧的生成,线粒体呼吸链酶复合体I抑制剂鱼藤酮、线粒体呼吸链酶复合体Ⅱ抑制剂噻吩甲酰三氟丙酮、线粒体呼吸链酶复合体Ⅲ抑制剂抗霉素A、黄嘌呤氧化酶抑制剂别嘌醇对活性氧生成无明显影响,而一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯反而引起细胞内活性氧的轻度增加。结论NADPH氧化酶是晚期糖基化终末产物刺激下内皮细胞活性氧生成的主要来源,可能是晚期糖基化终末产物启动和加重动脉粥样硬化病理生理过程中的重要防治靶点。     

线粒体活性氧类及其对心血管系统影响的研究进展

线粒体是真核细胞中制造能量的机构,其在维持细胞内钙稳态、信号转导以及细胞凋亡中发挥重要作用。当线粒体产生大量活性氧类而无法消除时,可引起线粒体功能障碍,导致细胞死亡和组织损害。线粒体活性氧类在动脉硬化、高血压、心肌缺血/再灌注、心力衰竭等心血管疾病的发生、发展中起重要作用,深入了解线粒体活性氧类与线粒体功能障碍的关系,对更好地理解心血管疾病的发生机制有重要意义。     

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶对血管疾病病理过程的影响

氧化应激是一种活性氧(ROS)代谢引起的分子失调,以一氧化氮生物利用度下降为特征。使用抗氧化维生素E和维生素C对心血管疾病无明显疗效,这使得对氧化应激的分子本质的理解产生了变化。氧化应激不再被认为是产生和消除ROS之间的不平衡,而是酶功能的异常,特别是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶功能的异常。因此,NADPH氧化酶已成为重要的治疗靶点。为了设计正确的抗氧化治疗方案,必须考虑NADPH氧化酶的分子调节作用,以及新型该家族人类同源物Nox1、Nox2、Nox3、Nox4和Nox5。通过发展和评估可靠的局部和系统抗氧化应激技术抑制NADPH氧化酶,可能比使用抗氧化剂非选择性消除所有ROS更加有效。     

培养神经细胞的氧自由基损伤及银杏叶提取物的治疗作用

目的 探讨氧自由基在Alzheimer病(AD)发病中的作用和评价银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract，EGb)的临床应用价值。方法 以产生超氧阴离子系统黄嘌呤／黄嘌呤氧化酶(X／XO)作用于PC12细胞，并以EGb拮抗其作用，电镜观察细胞形态变化，MTF法检测细胞存活率，流式细胞术分析细胞凋亡情况，RT-PCR技术分析凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达变化。结果 经X／XO损伤后，细胞存活率降低，凋亡率增加，促凋亡基因Bax表达上调。EGb(20mg／L)能改善凋亡情况。结论氧 自由基可诱导神经细胞凋亡而促进AD发生，EGb对神经细胞有保护作用，提示可用于AD的临床治疗与预防．     

活性氧在人内皮细胞中介导同型半胱氨酸诱发的线粒体生物合成

有人提出,同型半胱氨酸可能通过产生活性氧而诱发内皮功能失调及动脉粥样硬化。曾有报道,同型半胱氨酸促使线粒体损伤。考虑到氧化应激对线粒体生物合成会产生影响,我们提出这样一个假设:在内皮细胞同型半胱氨酸诱发的活性氧导致线粒体生物合成加强。我们发现同型半胱氨酸诱发的活性氧(1.85倍)引起核因子kB的激活和3硝基酪氨酸的增加。在同型半胱氨酸处理的细胞,线粒体生物合成因子,如核呼吸因子1和线粒体转录因子A的表达明显加强。伴随出现的还有线粒体增大,细胞色素C氧化酶亚基ⅢmRNA和蛋白表达增加。用抗氧化剂儿茶酸和trolox预处理可…     

Nintedanib对Ang Ⅱ诱导肾脏成纤维细胞产生细胞外基质的拮抗作用

目的探讨尼达尼布(Nintedanib)对抗血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)诱导的肾脏成纤维细胞产生细胞外基质的作用及其机制。方法 Ang Ⅱ处理大鼠肾脏成纤维细胞(NRK-49F),Western 印迹法检测相关分子的蛋白表达量,DHE荧光探针法检测活性氧簇(ROS)的水平。结果 肾脏成纤维细胞中Ang Ⅱ通过诱导PI3K/Akt 信号通路的激活,引起纤维连接蛋白和胶原蛋白Ⅰ的积聚。Nintedanib能抑制Ang Ⅱ诱导的PI3K/Akt信号通路的激活。Nintedanib还可以抑制Ang Ⅱ引起的ROS水平升高。结论 Nintedanib可以抑制Ang Ⅱ诱导的ECM成分升高,其作用机制与其抑制PI3K/Akt激活并抑制ROS产生有关。     

ROS影响有丝分裂时期细胞内线粒体的形态及分布

目的：利用稳定表达线粒体荧光信号的细胞系,检测活性氧（ reactive oxygen species,ROS）对有丝分裂时期细胞的线粒体形态及分布的影响。方法构建表达线粒体荧光信号的病毒表达载体,经测序鉴定和Western印迹检测正确后,通过病毒包装及感染的方法构建稳定表达线粒体荧光信号的HeLa s3细胞系HeLa s3-COX4tp-EGFP;进一步用免疫荧光法观察线粒体在ROS影响下形态及分布的变化。结果成功构建表达线粒体荧光信号的病毒表达载体及稳定细胞系,通过激光共聚焦显微镜观察,发现H2 O2处理能显著影响有丝分裂时期细胞线粒体的形态及分布。结论初步证明ROS可影响线粒体有丝分裂时期的形态及分布,为后续研究线粒体功能与细胞有丝分裂的调控奠定基础。     

多巴胺D5受体通过抑制氧化应激对扩张型心肌病的调节作用研究

目的 探讨多巴胺D5受体是否会通过抑制氧化应激来影响扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy)的发生发展。方法 建立心脏特异表达人多巴胺D5受体突变基因F173L(α-MHC-hD5F173L)和正常基因(α-MHC-hD5WT)转基因小鼠。用3月龄小鼠, 首先检测比较转基因小鼠心脏内ROS的产量和NOX2的表达量。然后对α-MHC-hD5F173L小鼠通过皮下给NADPH氧化酶的抑制剂罗布麻宁(Apocynin)4周, 同时给PBS作为对照组, 然后检测各项心肌病相关指标。同时构建人多巴胺D5受体突变基因(hD5F173L)和正常多巴胺D5受体基因(hD5WT)的大鼠心肌细胞(H9C2), 检测两者在基础条件下ROS产量的变化。结果 α-MHC-hD5F173L转基因小鼠的NADPH氧化酶的活性和NOX2蛋白的表达量均明显高于野生型α-MHC-hD5WT 小鼠, 罗布麻宁能显著改善α-MHC-hD5F173L转基因小鼠的心脏功能。H9C2-hD5F173L大鼠细胞系NOX2的表达量及ROS产量高于H9C2- hD5WT对照细胞。结论 多巴胺D5受体可能通过抑制氧化应激而防止扩张型心肌病的发生发展。