ROS影响有丝分裂时期细胞内线粒体的形态及分布

目的：利用稳定表达线粒体荧光信号的细胞系,检测活性氧（ reactive oxygen species,ROS）对有丝分裂时期细胞的线粒体形态及分布的影响。方法构建表达线粒体荧光信号的病毒表达载体,经测序鉴定和Western印迹检测正确后,通过病毒包装及感染的方法构建稳定表达线粒体荧光信号的HeLa s3细胞系HeLa s3-COX4tp-EGFP;进一步用免疫荧光法观察线粒体在ROS影响下形态及分布的变化。结果成功构建表达线粒体荧光信号的病毒表达载体及稳定细胞系,通过激光共聚焦显微镜观察,发现H2 O2处理能显著影响有丝分裂时期细胞线粒体的形态及分布。结论初步证明ROS可影响线粒体有丝分裂时期的形态及分布,为后续研究线粒体功能与细胞有丝分裂的调控奠定基础。     

利用Mps1特异性siRNA抑制人宫颈癌HeLaS3细胞增殖的研究

目的验证所设计的Mps1小干扰RNA(siRNA)的特异性,为其应用于肿瘤治疗提供研究基础。方法针对Mps1基因的5’端设计合成一个siRNA(简称为siMps1),利用Western印迹检测siMps1的干扰效果,以及干扰后对肿瘤细胞的增殖和有丝分裂的影响。进一步构建稳定表达siMps1的细胞系SW480-YFPMps1siR/shRNA,检测过表达外源Mps1能否恢复其内源基因缺失的表型。结果转染siMps1能够降低细胞中的Mps1蛋白水平,导致有丝分裂指数降低,染色体中期排列异常;进而通过克隆形成实验发现,HeLaS3细胞转染siMps1后大量死亡,出现多核细胞;构建的稳定细胞系SW480-YFPMps1siR/shRNA能够恢复Mps1缺失后的表型。结论该设计得到的siMps1具有很高特异性,有望应用于肿瘤的治疗中。     

重组金葡菌肠毒素A的抗癌效应研究

目的: 金黄色葡萄球菌肠毒素A作为一种超抗原,其抑瘤活性一直受到关注,其直接应用于肿瘤治疗的报道较少,本研究对其抑瘤活性进行了分析.方法: 利用亲和层析纯化出重组SEA,注射接种了黑色素瘤的小鼠,观察其抑瘤效应.结果: 各组剂量的重组SEA均能有效抑制肿瘤的生长,其高、中、低剂量重组SEA的抑瘤率分别为79.3%、75.6%和73.8%,而原位注射(中剂量)的抑瘤率为90.6%.治疗小鼠的肿瘤组织出现大量的T细胞浸润;此外,SEA以免疫的形式刺激动物,能明显产生特异性抗体,并在一定程度上增强小鼠对肿瘤转移的抵抗力.结论: 重组SEA对小鼠黑色素瘤的能产生明显的抑制效应,尤其是原位注射,这为SEA的靶向治疗肿瘤奠定了基础.