扁塑藤素对LPS诱导的HUVEC细胞功能损伤和焦亡的作用

目的研究扁塑藤素对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及可能机制。方法 建立LPS诱导HUVEC损伤模型,HUVEC细胞分为对照组、LPS组以及低、中、高剂量扁塑藤素组(0.1、0.2、0.4 μmol/L扁塑藤素)。CCK-8法测定细胞活力;试剂盒法检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量;ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18蛋白水平;蛋白免疫印迹法、实时荧光定量PCR法检测焦亡相关分子NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白和mRNA表达量。 结果与对照组比较,LPS组细胞活力和SOD含量显著下降(P＜0.05),LDH和MDA含量、NLRP3、Caspase-1、GSDMD的蛋白和mRNA表达量均显著升高(P＜0.05)。扁塑藤素呈剂量依赖性提高细胞活力和SOD含量,抑制LDH、MDA,降低NLRP3、Caspase-1、GSDMD的蛋白和mRNA表达水平(P＜0.05)。 结论扁塑藤素呈剂量依赖性抑制细胞焦亡和减轻氧化应激,从而改善LPS诱导的HUVEC功能损伤。     

芪归银方对大鼠巨噬细胞NR8383免疫调节作用初探

目的 初步探索芪归银方(Qiguiyin,QGY)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383免疫功能的调节作用,为揭示其抗炎分子机制提供实验基础。方法 以LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞NR8383,构建体外炎性细胞模型;设置空白对照组(control组)、模型对照组(LPS组)和芪归银实验组(LPS+QGY组),以CCK-8法检测QGY干预24、48及72h时巨噬细胞活力;以ELISA法检测QGY干预24、48及72h时NR8383炎性细胞上清液中白介素(interleukin,IL)-1β、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、单核细胞趋化蛋白(monocyte chemoattractant protein,MCP)-1和大鼠精氨酸酶(arginase,Arg)-1等免疫因子的浓度。结果 以1μg/ml的LPS成功构建了NR8383炎性细胞模型。0.125~2.000mg/ml的QGY在72h内对NR8383巨噬细胞无明显毒性不良反应;1~2mg/ml的QGY显著促进NR8383巨噬细胞的增殖(P＜0.05)。与control组比较,LPS组中IL-1β、TNF-α和MCP-1的含量均显著增高(P均＜0.05),Arg-1的含量差异无统计学意义(P＞0.05)。与control组比较,1~2mg/ml的QGY可显著降低IL-1β和MCP-1的含量(P均＜0.05),2mg/ml则可显著降低TNF-α的含量(P＜0.05)。其中,2mg/ml的QGY作用48h,可显著降低TNF-α和MCP-1的含量(P均＜0.01)。与control组比较,QGY对NR8383巨噬细胞Arg-1的含量比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。结论 QGY对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383有明确的免疫调节作用。     

NLRP3炎性小体在脂多糖诱导的高糖心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用及机制

目的 探究NLRP3炎性小体在脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的心肌细胞高糖缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)损伤中的作用及机制。方法 取正常对数期生长的H9C2心肌细胞,随机分为4组,即高糖(H)组(n=3)、高糖+缺氧/复氧(H+H/R)组(n=3)、高糖+LPS+H/R(H+LPS+H/R)组(n=3)和BAY11-7082干预高糖+LPS+H/R(H+LPS+BAY+H/R)组(n=3)。采用CCK-8法检测细胞活力,ROS检测试剂盒测定线粒体氧化应激水平,RT-PCR检测细胞NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β的mRNA表达水平,Western blot法检测细胞NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β的蛋白表达水平。结果 与高糖组比较,H+H/R组细胞活性降低、LDH水平升高、线粒体ROS产生增加,NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β的mRNA表达上调,NF-κB、NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β蛋白水平增高(P<0.05);LPS处理后,H/R的高糖心肌细胞损伤进一步加重(P<0.05),而加用BAY11-7082后,LPS加重的损伤得以改善(P<0.05)。结论 BAY11-7082可以抑制NLRP3炎性小体激活,从而减轻LPS介导的H9C2细胞高糖H/R损伤。     

炎症状态下人牙周膜成纤维细胞中SLC7A11和GPX4的表达水平及其意义

探讨在牙龈卟啉单胞菌脂多糖（P.g-LPS）刺激的炎症环境下,人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）中溶质载体家族7成员11（SLC7A11）和谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）表达的变化,阐明P.g-LPS诱导牙周炎的可能机制。     

脂多糖诱导C57BL/6J小鼠急性炎症对听力损失的影响

目的 采用脂多糖(LPS)腹腔注射的方法诱导C57BL/6J小鼠机体产生急性炎症,观察急性炎症期小鼠听力情况,并分析其相关机制。方法 将C57BL/6J小鼠30只随机分为空白组、LPS组及对照组,每组10只,LPS组予以2.5 mg/kg的LPS,对照组输注相等体积的生理盐水,其余生活条件保持一致。注射LPS 3、7、15 d后,通过听性脑干反应(ABR)评估小鼠听力情况。冰冻耳蜗组织切片HE染色观察耳蜗组织形态学变化。ELASA方法观察小鼠体内TNF-α、IL-1β、IL-6的变化。同时观测小鼠饮水、饮食及体质量的变化。结果 与对照组比较,LPS组在注射3、7 d后的听力阈值均明显升高,P<0.05,但是注射15 d后两组听力阈值比较,差异无统计学意义,其余频率下阈值变化不明显。注射LPS 3 d后,LPS组的TNFα,IL-6及NF-κB水平明显高于对照组,P<0.05,IL-1β无明显变化。LPS组螺旋神经节细胞有丢失,血管纹部分空泡化,形态异常。但是,LPS不影响小鼠的饮食饮水及体质量。结论 LPS可以引发小鼠耳蜗急性炎症,造成听力损失,主要表现为高频听力损失。     

肠道微生物与心房颤动相关性研究进展

<正>心房颤动(atrial fibrillation,AF)是一种在成人中最常见的心律失常,文献报道成人AF患病率为2%～4%[1],2019年全球约有AF/房扑(atrial flutter,AFL)患者5970万人[1],造成沉重医疗负担、损害患者的生活质量。近期研究表明,肠道微生物及其代谢产物不仅可促进AF的发生和进展[2-5],且在AF人群的危险分层,包括预测血栓风险[6-7]、主要不良心血管事件(major adverse cardiovascular events,MACE)风险[8]等方面起重要作用,本文就其研究进展作一综述。     

牛蒡子苷对ARDS细胞模型的抗炎作用及PI3K-AKT-NF-кB信号通路的影响

[目的] 研究牛蒡子苷(Arctiin,Arc)对急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)细胞模型的抗炎作用及其相关机制。[方法] 将RAW 264.7细胞分为4组:对照组,模型组和Arc高、低剂量组。Arc高、低剂量组在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激24 h前用Arc预处理24 h。采用噻唑蓝法(methy thiazolyl tetrazolium,MTT)测定Arc对RAW 264.7细胞的毒性,采用共聚焦显微镜观察细胞形态变化,以酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞上清液中白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis-α,TNF-α)水平,免疫印迹法检测细胞中磷酸酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、核因子-κB抑制蛋白(inhibitor of NF-κB,IкBα)磷酸化水平。[结果] Arc对RAW 264.7细胞增殖活性无明显抑制作用(P＞0.05),Arc高、低剂量组细胞形态与对照组相似。与对照组比较,模型组IL-6、IL-1β、TNF-α水平显著升高(P＜0.001);与模型组比较,Arc高、低剂量组IL-6、IL-1β、TNF-α水平降低(P＜0.05)。与对照组比较,模型组PI3K、AKT、NF-κB、IкBα磷酸化水平显著升高(P＜0.001);与模型组比较,Arc高、低剂量组PI3K、AKT、NF-κB、IкBα磷酸化水平显著降低(P＜0.05)。[结论] Arc对LPS诱导的ARDS细胞模型具有抗炎作用,其机制可能与抑制PI3K-AKT-NF-кB信号通路的活化有关。     

AVpH联合血清sCD14-ST、LDH预测感染性休克严重程度及预后的临床意义

目的 研究动-静脉血pH差值（AVpH）联合血清可溶性脂多糖受体亚型（sCD14-ST）及乳酸脱氢酶（LDH）,在预测感染性休克严重程度及预后中的价值。方法 将35例脓毒症休克患者纳为观察组,53例脓毒症未发生休克患者纳为对照组。采集被研究者进入ICU第1天外周血,检测血清sCD14-ST、LDH及降钙素原（PCT）水平,监测患者中心静脉血气,检测AVpH水平。分析以上指标在评估脓毒症休克患者病情严重程度及预后中的价值。结果 观察组急性生理与慢性健康状况评分（APACHEⅡ）、序贯器官衰竭评分（SOFA）及血清PCT水平均显著高于对照组（t=7.294,13.812,7.958,P<0.05）;观察组患者AVpH及血清sCD14-ST、LDH水平均显著高于对照组（t=3.518,6.533,3.912,P<0.05）。相关性分析提示,观察组AVpH及血清sCD14-ST、LDH水平与其APACHEⅡ及SOFA评分、血清PCT水平均呈正相关（P<0.05）。观察组28d死亡率为57.14%,显著高于对照组的30.19%（χ²=6.335,P<...     

脂多糖对U937细胞中microRNA-107与NF-κB信号通路的影响

目的分析单核细胞在炎症状态下microRNA-107与NF-κB信号通路的相关性。方法经50ng/ml佛波酯(PMA)诱导成熟的U937细胞随机分为对照组和LPS(10μg/ml)刺激组,LPS刺激时间为1、3、6h,采用qRT-PCR检测各组细胞中microRNA-107、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL~(-1)β)的mRNA表达量;Western blot法检测细胞NF-κB(p65)与磷酸化p65(p-p65)蛋白含量。结果与对照组比较,LPS组细胞microRNA-107、TNF-α、IL~(-1)βmRNA表达量明显升高(P0.05);p-p65/p65蛋白含量比值明显升高(P0.01)。Spearman相关性分析显示,microRNA-107表达量与p-p65/p65蛋白含量比值呈中度正相关(r=0.69,P0.01);与TNF-αmRNA表达量(r=0.835,P0.01)、IL~(-1)βmRNA表达量(r=0.839,P0.01)呈高度正相关。结论脂多糖刺激PMA诱导的U937细胞后microRNA-107的表达升高可能与NF-κB信号通路有关。     

槲皮素脂质体抑制小鼠肺组织炎症作用的研究

目的 制备槲皮素脂质体以提高水溶性,研究槲皮素脂质体对脂多糖（LPS）诱导的小鼠炎症性肺损伤的作用。方法 采用薄膜分散法将槲皮素包裹于脂质体中,使用粒度分析仪测定其粒径和电位,使用透射电镜观察脂质体形貌特征。将20只C57BL/6小鼠随机分为5组：对照组、模型组、空白脂质体组、槲皮素（20mg·kg^-1）组和槲皮素脂质体（以槲皮素计20mg·kg^-1）组,每组4只。对照组不做处理,其余各组ip 3mg·kg^-1LPS,2h后ip相应药物,24h后取出肺组织进行苏木素-伊红染色观察肺组织病理变化;Westernblotting法检测白细胞介素（IL）-1β蛋白表达;实时荧光定量PCR（qRTPCR）法检测IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的mRNA表达。结果 槲皮素脂质体呈圆球状,粒径135nm,多分散系数0.260,电位（-4.28±0.66）mV。与模型组比较,槲皮素脂质体20mg·kg^-1能显著改善炎症引发的肺部结构变化,减轻免疫细胞浸润肺组织导致的肺泡壁增厚和肺泡结构紊乱,而槲皮素20mg·kg^-1没有表现出治疗效果;与模型组比较,槲皮素脂质体20mg·kg^-1可显著抑制肺组织成熟IL-1β蛋白表达（P＜0.01）,显著下调IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达（P＜0.01）,而槲皮素20mg·kg^-1不具有抑制作用。结论 脂质体制剂增强了槲皮素对小鼠肺部炎症的抑制作用,减轻了LPS引起的肺组织损伤。