左归降糖舒心方含药血浆对ox-LDL诱导J774 A.1巨噬细胞焦亡及凋亡的影响

目的 研究左归降糖舒心方含药血浆对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞焦亡及凋亡状态的影响,探讨该方治疗糖尿病动脉粥样硬化斑块的新靶点.方法 SD大鼠随机分成3组,连续5 d灌胃相应的药物制备含药血浆:空白组(灭菌超纯水)、左归降糖舒心方组(25.92 g/kg)、西药联合用药组(二甲双胍0.83 g/kg+阿托伐他汀钙12.45 mg/kg).应用ox-LDL诱导细胞焦亡及凋亡状态.通过CCK-8法比较各组J774A.1细胞增殖情况,计算细胞存活率,筛选含药血浆及ox-LDL干预浓度.将分化完全的J774A.1巨噬细胞随机分为空白血浆组、模型组、左归降糖舒心方含药血浆组、西药联合含药血浆组,每组6个复孔.诱导及给药24 h后,LDH释放实验检测细胞膜完整性及细胞焦亡水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测焦亡相关蛋白NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、gasdermin D(GSDMD)蛋白、凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及B细胞白血病淋巴瘤相关蛋白基因(Bax)蛋白的表达水平.结果 含药血浆及空白血浆在浓度为10％水平对细胞增殖无明显抑制作用,作为含药血浆实验干预浓度.ox-LDL在100 mg/L浓度下,可明显降低细胞存活率,故考虑以100 mg/L ox-LDL为诱导细胞焦亡及凋亡的造模浓度.与空白组比较,模型组细胞存活率明显降低,LDH释放率增高(P<0.01);同时细胞凋亡明显增多(P<0.01);模型组在ox-LDL诱导下,细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、GSDMD表达上调,促进凋亡相关因子Caspase-3及Bax表达增强(P<0.01).与模型组比较,左归降糖舒心方含药血浆组细胞存活率增高,LDH释放率及细胞凋亡率明显降低(P<0.01);左归降糖舒心方含药血浆可显著抑制ox-LDL所致的NLRP3、Caspase-1、GSDMD、Caspase-3及Bax表达水平上调(P<0.01).而且,左归降糖舒心方含药血浆组阻断ox-LDL引起的焦亡过程细胞膜破坏及凋亡的作用效应优于西药联合含药血浆组(P<0.01).结论 在体外左归降糖舒心方含药血浆可有效维持巨噬细胞正常功能状态,其作用机制可能与调控NLRP3、Caspase-1、GSDMD、Caspase-3及Bax表达,抑制细胞内焦亡及凋亡过程有关.     

CXC趋化因子配体14对高糖环境中脂肪细胞焦亡的影响

目的探讨CXC趋化因子配体14(CXCL14)对高糖暴露环境中脂肪细胞焦亡的影响。方法利用“鸡尾酒法”诱导3T3-L1细胞分化为成熟脂肪细胞,用5.5 mmol/L低糖(NG)或25 mmol/L高糖(HG)葡萄糖培养基培养脂肪细胞24 h;HG环境下用不同浓度CXCL14处理3T3-L1细胞不同时间。Western blot检测消化道皮肤素(GSDMD)、核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)蛋白、白细胞介素-6(IL-6)蛋白表达水平。实时荧光定量PCR检测GSDMD、NLRP3、白细胞介素-1β(IL-1β) mRNA转录水平。LDH测定试剂盒检测脂肪细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力;Annexin V-FITC荧光检测细胞死亡情况;CCK-8法检测各组细胞增殖活力。结果高糖环境下脂肪细胞焦亡发生率升高,CXCL14处理可提高脂肪细胞增殖活力,但脂肪细胞焦亡相关指标却受到CXCL14浓度梯度的不同影响。50 nmol/L CXCL14处理可降低高糖环境下脂肪细胞GSDMD、NLRP3、IL-1β mRNA以及NLRP3蛋白的表达,下调脂肪细胞LDH活力,减少Annexin V-FITC荧光染色细胞死亡率,但25、100、200 nmol/L CXCL14对其焦亡的指标却呈反向趋势。并且50 nmol/L CXCL14干预后脂肪细胞NLRP3、Caspase-1蛋白随干预时间的延长呈先下降再上升趋势。结论CXCL14对高糖环境中脂肪细胞焦亡的影响与其浓度存在相关性。     

卡维地洛对ox-LDL诱导内皮细胞中NLRP3炎症小体介导焦亡及炎症的影响

目的研究卡维地洛对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导内皮细胞中NLRP3炎症小体介导焦亡及炎症的调控作用。方法人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为对照组、ox-LDL组、低剂量组(0.01 mmol/L)、高剂量组(0.1 mmol/L);转染阴性对照腺病毒(Ad-NC)或过表达NLRP3腺病毒(Ad-NLRP3)后分为Ad-NC组、Ad-NC+ox-LDL组、Ad-NC+高剂量组、Ad-NLRP3+高剂量组。检测各组细胞活力和白细胞介素(IL)-1β、IL-18含量,以及GSDMD-N、NLRP3、Cleaved Caspase-1表达水平。 结果ox-LDL组细胞活力低于对照组,IL-1β、IL-18及GSDMD-N、NLRP3、Cleaved Caspase-1均高于对照组(P＜0.05)。低剂量组和高剂量组细胞活力高于ox-LDL组,IL-1β、IL-18及GSDMD-N、NLRP3、Cleaved Caspase-1均低于ox-LDL组(P＜0.05)。转染NLRP3腺病毒后,Ad-NLRP3+高剂量组和Ad-NC+ox-LDL组细胞活力低于Ad-NC+高剂量组,IL-1β、IL-18及GSDMD-N、NLRP3、Cleaved Caspase-1均高于Ad-NC+高剂量组(P＜0.05)。 结论卡维地洛显著抑制ox-LDL诱导HUVEC中NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡及炎症反应。     

黄芪丹参配伍调控ASIC1a/CaMKⅡδ信号抑制酸性微环境中心肌细胞焦亡

  目的  探讨黄芪丹参配伍对乳酸诱导的酸性微环境中心肌细胞焦亡损伤的保护作用及基于酸敏感离子通道1a(ASIC1a)/钙离子-钙调蛋白依赖性激酶Ⅱδ(CaMKⅡδ)信号通路的调控机制。  方法  采用Lactate刺激H9C2心肌细胞建立pH 6.5酸性微环境细胞损伤模型。分为正常对照组、模型组、黄芪丹参提取物(HQ)组、HQ+ASIC激动剂Nocistatin组和ASIC抑制剂NS383阳性药对照组。采用CCK-8法测定心肌细胞活力, 流式细胞术检测心肌细胞凋亡, 免疫荧光检测ASIC1a表达, qPCR分析NLRP3、Caspase-1、IL-1β及GSDMD mRNA表达, Western blot检测ASIC1a、CaMKⅡδ、NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-1、GSDMD及GSDME-N蛋白的表达。  结果  在pH 6.5酸性环境中, 心肌细胞活力显著降低(P < 0.01), 细胞凋亡明显增加(P < 0.01), NLRP3、Caspase-1、IL-1β及GSDMD mRNA表达明显增加(P < 0.01), ASIC1a、CaMKⅡδ、NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-1、GSDMD及GSDME-N蛋白表达明显增加(P < 0.01)。60 μg · mL-1HQ可显著促进pH6.5酸性微环境中心肌细胞活力(P < 0.01), 抑制心肌细胞凋亡(P < 0.01), 下调NLRP3、Caspase-1、IL-1β、GSDMD mRNA和ASIC1a、CaMKⅡδ、NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-1、GSDMD及GSDME-N蛋白表达(P < 0.01)。并且HQ的以上效应可被ASIC激动剂Nocistatin逆转。  结论  黄芪丹参配伍可下调ASIC1a/CaMKⅡδ信号抑制酸性微环境下NLRP3炎症小体介导的心肌细胞焦亡。      

红景天苷介导p38 MAPK信号通路抑制脂多糖诱导的心肌细胞焦亡及氧化损伤

目的 探究红景天苷对脂多糖(LPS)诱导的大鼠心肌细胞焦亡和氧化损伤及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的调控作用。方法 体外培养大鼠心肌H9C2细胞,分为对照组、LPS组、LPS+10、20、40、80μmol/L红景天苷组,筛选出最佳浓度红景天苷后,又分组：对照组、LPS组、LPS+20μmol/L红景天苷组、SB203580组、LPS+20μmol/L红景天苷+SB203580组和LPS+20μmol/L红景天苷+C16-PAF组。干预24 h后,用酶联免疫吸附试验检测白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、氧化应激因子丙二醛(MDA)和超氧化物岐化酶(SOD)的表达水平。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定细胞活力;实时荧光定量PCR测定细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3 mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法测定p38 MAPK信号通路相关蛋白、Cyclin D1、Caspase-3、Caspase-1、Gasdermin-D(GSDMD)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体...     

Mcc950在新生儿坏死性小肠结肠炎的作用及其机制研究

目的 研究NLRP3炎症小体及其特异性抑制剂Mcc950对新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)的作用及机制.方法 将120只1日龄新生SD乳鼠随机分为对照组、NEC组和Mcc950治疗组,每组40只.通过人工喂养、缺氧复氧、冷刺激加脂多糖(LPS)灌胃建立NEC动物模型.采用HE染色观察各组肠组织病理表现,并对肠组织行损伤评分;采用蛋白质印迹技术和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测炎症因子IL-1β和IL-18、炎症小体NLRP3、细胞焦亡主要标志分子Caspase-1和GSDMD的蛋白及mRNA表达水平.结果 与对照组相比,NEC组大鼠体重减轻,肠上皮细胞排列紊乱,部分绒毛坏死、脱落,黏膜层、黏膜下层及固有层可见水肿分离,相应的肠组织损伤评分升高,IL-lβ、IL-18、NLRP3、Caspase-1和GSDMD蛋白及mRNA表达水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05).与NEC组相比,Mcc950治疗组大鼠体重下降趋势变缓,肠组织病理损伤减轻,肠组织损伤评分降低,IL-1β、IL18、NLRP3、Caspase-1和GSDMD表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功建立NEC模型,Mcc950可抑制NLRP3介导的炎症及细胞焦亡,从而在NEC中发挥保护作用.     

同型半胱氨酸通过促进细胞焦亡和上调琥珀酸脱氢酶亚基A诱导神经炎症反应

目的探索同型半胱氨酸(Hcy)是否通过促进细胞焦亡和上调琥珀酸脱氢酶亚基A(SDHA)蛋白表达诱导神经炎症反应。 方法使用不同浓度Hcy(1.25、2.50、5.00 mmol/L)处理小鼠海马神经元细胞系HT22细胞。CCK-8检测细胞活力;免疫荧光法观察细胞形态和焦亡相关蛋白消皮素(GSDMD)与细胞膜的共定位情况;Western blotting检测细胞核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸蛋白水解酶-1前体(pro-Caspase-1)和Caspase-1的活性片段(cleaved-Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、GSDMD和GSDMD的N端结构域(GSDMD-N)等焦亡相关蛋白及SDHA蛋白表达水平。酶联免疫吸附测定法检测炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平。 结果Hcy可显著降低HT22细胞活力,损伤HT22细胞突触,增加GSDMD与细胞膜的共定位和细胞膜破裂程度,上调HT22细胞NLRP3、pro-Caspase-1、cleaved-Caspase-1、ASC、GSDMD和GSDMD-N等焦亡相关蛋白及SDHA蛋白表达水平,并增加IL-1β和IL-18水平。 结论Hcy可诱导神经炎症反应,其机制与其促进细胞焦亡和上调SDHA蛋白表达密切相关。     

羊栖菜多糖对血管内皮细胞氧化损伤的保护和修复作用的实验研究

目的 研究羊栖菜多糖(SFPS)对过氧化氢所致人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护及修复作用.方法 噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活力、NO水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性及细胞内丙二醛(MDA)含量.结果 羊栖菜多糖可剂量依赖性地抑制过氧化氢所致的细胞活力降低,阻止LDH外漏,增加NO释放,并减少MDA生成,提高SOD活性.结论 羊栖菜多糖对过氧化氢所致HUVEC损伤具有明显的保护及修复作用.     

钠-氢交换蛋白调节细胞内环境酸化并激活肝癌细胞焦亡的作用及相关机制

目的探讨钠-氢交换蛋白1（NHE1）调节细胞内环境酸化并激活肝癌细胞焦亡的作用及相关机制。方法采用Westernblot和RT-qPCR法检测4株肝癌细胞中NHE1蛋白及mRNA表达水平,选出表达最高的MHCC97细胞株进行实验。小干扰RNA（siRNA）技术沉默MHCC97细胞中NHE1,将常规培养的MHCC97细胞作分为对照组、NHE1无关对照的序列转染的细胞作为siRNA-NC组、NHE1转染的细胞株作为siRNA-NHE1组,检测3组细胞活性,细胞凋亡情况,细胞中半胱氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）、炎性小体（NLRP3）、消皮素D（GSDMD）表达水平,培养基中IL-1β、IL-18水平以及细胞乳酸脱氢酶（LDH）漏出水平,观察NHE1沉默对细胞焦亡的影响。另取NHE1沉默后细胞设立NHE1沉默组和Caspase-1抑制组（用Caspase-1抑制剂AC-YVAD-CMK干预）,观察阻断Caspase-1对细胞焦亡的影响。结果NHE1沉默后的MHCC97细胞活性下降（P＜0.05）,凋亡增多;细胞Caspase-1、NLRP3表达水平,培养基IL-1β、IL-18水平及LDH漏出水平升高,GSDMD表达水平降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。阻断Caspase-1后细胞活性增强（P＜0.05）,凋亡减少;细胞Caspase-1、NLRP3表达水平,培养基IL-1β、IL-18水平及LDH漏出水平降低,GSDMD表达水平升高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论NHE1沉默会造成细胞内酸化,同时激活细胞焦亡,这是NHE1在肝癌中的作用机制之一;阻断Caspase-1可以抑制细胞焦亡。     

高糖对脂多糖诱导的大鼠肺微血管内皮细胞自噬的影响

目的:探究高糖(HG)环境对脂多糖(LPS)处理的大鼠肺微血管内皮细胞(RPMECs)自噬的影响。方法:LPS联合HG处理RPMECs 24 h后;相应商品化试剂盒检测细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。免疫印迹法检测Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC-3Ⅱ)、GAPDH蛋白表达水平。结果:HG或LPS处理可导致RPMECs增殖活力、SOD含量显著降低,而LDH释放量、MDA含量及Beclin-1、LC-3Ⅱ蛋白表达水平显著升高;HG联合LPS处理可进一步导致上述变化。结论:HG可加重LPS诱导的RPMECs损伤,其机制与氧化应激增强及自噬功能过度活化密切相关。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

87株幽门螺旋杆菌VacA等位基因的分析

目的以研究方法LiPA（Line Probe Assay）分析VacA等位基因的表达,了解幽门螺旋杆菌致病机理的理解。方法从三个不同城市87位进行胃镜检查患者的胃粘膜中培养出幽门螺旋杆菌,提取DNA,用LiPA方法分析VacA等位基因。结果（1）87位患者以sic（88．5％）和m2a（63．2％）分布为主,未发现s1b和s2;（2）混合菌株感染率为41．4％,远远高于西方国家,其中上海的混合感染率最高（62．5％）,与北京（41．0％）和南宁（20．8％）相比具有显著性差异,P〈0．01;（3）北京、海、南京三个不同城市s1、m等位基因亚型分布率存在差异;（4）溃疡病和非溃疡病患者m1和m2的分布率没有显著性差异。结论我国幽门螺旋杆菌多重菌株感染率较高,不同的m基因型与消化性溃疡的发生无显著性相关。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

扩张兔皮肤超微结构的变化

目的：动态观察扩张兔皮肤超微结构的变化。方法：选用2--3kg新西兰大白兔64只，分为2大组，快速扩张组和常规扩张组，每组32只，每大组再分为4组，为扩张完成后即时、1周、12周、24周组。每组8只，其中4只为实验组，另4只植入扩张器不扩张作为对照组。透射电子显微镜观察各组皮肤超微结构的变化。结果：表皮扩张后经历--由扩张刺激引起的创伤至完全修复的过程。扩张后即时真皮中成纤维细胞大量增生，功能由静止转向活跃，胶原纤维碎裂成片，弹力纤维部分断裂，炎症细胞浸润；扩张后1周常规扩张组基底膜连续性基本恢复。显示成纤维细胞合成功能活跃。扩张后12周、24周，成纤维细胞趋于稳定、形态狭长，部分胶原排列紊乱，部分有似癜痕样改变。结论：扩张刺激可致兔皮肤创伤。扩张后真皮不可完全修复。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用

目的观察芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用。方法30只Long-Evans大鼠用动脉结扎法造成视网膜缺血模型,其中治疗组20只腹腔注射芹黄素,对照组10只注射溶媒二甲基亚酚。用视觉电生理仪检查视网膜功能恢复情况。结果芹黄素治疗组视网膜功能恢复明显好于对照组(P<0.05)。结论芹黄素能促进大鼠缺血视网膜的功能恢复。      

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

人体寄生虫学多媒体教学效果的初步评估

通过分析多媒体辅助教学方法与传统教学方法在人体寄生虫学教学中的应用,指出多媒体辅助教学对于提高教学质量效果显著,受到了绝大部分同学的赞同和欢迎.     

浅谈影响放疗摆位精度的相关因素

本文旨以经验交流的方式,阐述影响放疗摆位精度的各种相关因素,以最大努力去消除或减少放疗摆位误差,提高放疗摆位的精度,同时达到与放疗界其他同行的共勉的愿望。     

阴道炎1236例病原检查分析

对１２３６例阴道炎患者的阴道分泌物作直接镜检和病原菌分离培养检查；结果，细菌感染９００例，念珠菌２３４例，滴虫１０２例。９００例细菌经鉴定；葡萄球菌３００例，阴道加特纳菌２７６例，淋病奈瑟菌１７０例，其它细菌１２４例。结果表明，葡萄球菌，阴道加特纳菌，淋病奈瑟菌是细菌性阴道炎最常见的致病菌。