脂联素在LPS预处理减轻高糖高脂膳食诱导NASH中的表达

目的 研究脂多糖(lipopalysaccharide,LPS)预处理对高糖商脂膳食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steato-hepatitis,NASH)的影响及血浆脂联素(adiponectin,APN)表达的变化.方法 24只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、LPS预处理组和肝损伤组.肝损伤组饲以高糖高脂饲料;LPS预处理组饲料同肝损伤组,隔日皮下注射LPS 0.5 mg/kg;正常对照组饲以普通饲料;所有大鼠自由进食与饮水.于实验第9周末处死动物.制备肝组织切片,计数浸润肝组织的淋巴细胞;测定血浆内毒素(endotoxin,ET)水平和丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)活性、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、APN含量.结果 肝损伤组血浆ET水平与正常对照组相比显著升高;LPS预处理组血浆ALT水平、肝组织淋巴细胞计数与肝损伤组比较均显著降低;血浆TNF-α水平LPS预处理组与肝损伤组比较明显降低,而血浆APN则相反,经统计学分析差异均有统计学意义(P<0.05).肝组织切片HE染色结果显示,LPS预处理组与肝损伤组相比,肝细胞内脂肪空泡小、数量少,脂肪变性明显减轻.结论 LPS预处理可以减轻高糖高脂膳食诱导的NASH,其机制可能与高水平的脂联素抑制TNF-α的产生,从而降低TNF-α介导的肝细胞损害有关.     

脂多糖注射结合高温环境制作大鼠温病暑热证模型

目的:探索通过高温环境、醋酸铅致敏和静脉注射脂多糖的综合方法制作大鼠温病暑热证模型的方法。方法:人工气候箱制造高温环境,麻醉动物,颈总动脉置入导管并连接生理多导仪,尾静脉注射醋酸铅致敏,1/2h后尾静脉注射脂多糖,动态观察肛温、脉搏、呼吸、收缩压、舒张压和脉压差,检测炎症介质IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-18、TNF-α,并进行肝、肺病理检查。结果:模型组的脉搏较对照组增快,肛温、呼吸、收缩压、舒张压和脉压差无组间差别;模型组的IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α高于对照组,差别有统计学意义;模型组在4、5、6h的死亡率高于对照组,差别有统计学意义。结论:成功建立了大鼠温病暑热证模型,该模型病情比较严重,具有明显的炎症特点和中医暑热证的特点。     

利多卡因对LPS诱导巨噬细胞HMGB1释放及转位的影响

目的    观察不同浓度利多卡因对脂多糖(LPS)诱导大鼠腹腔巨噬细胞高迁移率蛋白1（HMGB1）释放及转位的影响。方法    取Wistar大鼠腹腔巨噬细胞置12孔板培养2～3d,分为对照组(C组)、LPS组、利多卡因2mg/L+LPS组(Ll+LPS组)、利多卡因20mg/L +LPS组(L2+LPS组)、利多卡因200mg/L +LPS组(L3+LPS组),分别于6、12、24、48h酶联免疫吸附试验（ELISA）测培养液中HMGB1蛋白浓度。免疫细胞化学染色法观察HMGB1在巨噬细胞内的转位情况。结果    HMGB1蛋白的释放在LPS组刺激12h开始增多,24h达高峰。与LPS组相比,3个利多卡因处理组HMGB1的释放均有不同程度的减少,以终浓度在20mg/L时最显著（P＜0.05）。同时,免疫细胞化学染色法还观察到利多卡因对HMGB1从细胞核到细胞浆的转位有抑制作用。结论    利多卡因20mg/L可显著抑制LPS诱导大鼠腹腔巨噬细胞HMGB1释放及转位。     

IL-6抑制LPS诱导的小鼠髓源性DCs成熟的实验研究

目的观察白细胞介素-6(IL-6)对于内毒素(LPS)诱导的小鼠髓源性树突状细胞(DC)成熟效应的抑制作用。方法分离小鼠骨髓细胞,采用黏附法结合GM-CSF和IL-4刺激法在体外培养髓源性DCs(BMDCs)。用相差倒置显微镜观察BM-DCs的形态特点。用LPS诱导DC成熟。采用FACS结合混合淋巴细胞反应,观察IL-6处理与否,LPS诱导的BMDCs在表型和刺激同种淋巴细胞增殖功能上的变化。结果形态观察和FACS分析的结果表明:体外成功培养了纯度较高的高表达CD11c的BMDCs,LPS能明显诱导BMDCs表面MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子CD40的表达上调;而经过IL-6处理后,LPS诱导BMDCs表面CD80、CD86、CD40表达上调的能力被显著削弱(P0.05)。混合淋巴细胞反应显示,与单独用LPS处理的BMDCs相比,经IL-6处理后的BMDCs刺激同种淋巴细胞增殖的能力明显减弱,并呈剂量依赖关系(P0.05)。结论IL-6能明显抑制LPS诱导的BMDCs成熟,可能是肿瘤免疫逃逸的重要机制之一。     

混合游离脂肪酸对大鼠肺微血管内皮细胞Toll样受体4表达的影响及其介导的炎症反应机制

目的研究混合游离脂肪酸（FFA）对大鼠肺微血管内皮细胞（RRPMVECs）Toll样受体4（TLR4）的激活作用及其介导的链式炎症反应机制。方法以不同浓度的FFA处理体外培养的RPMVECs,Westernblotting检测TLR4蛋白的表达。用干扰小RNA（siRNA）转染体外培养的RPMVECs（TLR4 siRNA组和杂序siRNA组）,设立阴性对照组。分别用0．1mmol／LFFA、10ng／mL脂多糖（LPS）和5ng／mL肿瘤坏死因子-α（TNF-α）处理各组细胞,以未加药细胞作为相应的空白组。Real-TimePCR检测TLR4mRNA和NF-κB抑制蛋白激酶β（IKKβ）mRNA的表达,Westernblotting检测磷酸化核因子κB抑制因子（p-IκBα）和核因子κB（NF-κB）的表达,ELISA法检测细胞培养上清液中炎症因子白介素-1β（IL-1β）的表达。结果RPMVECs的TLR4蛋白相对表达量在0．1mmol／LFFA处理后显著增高（P〈0．05）,并随FFA浓度的升高而增加。在杂序siRNA和阴性对照组,TLR4mRNA的相对表达量在LPS和FFA处理后显著升高（P〈0．05）,TNF-α处理无明显变化;而在TLR4干扰组,3种处理后TLR4mRNA的表达均无显著变化。在杂序siRNA和阴性对照组,3种方式处理后RPMVECs的IKKβmRNA、p-IκBα及IL-1β的相对表达量均显著升高（P〈0．05）,而TLR4siRNA干扰抑制了其在FFA和LPS处理组的表达,但对TNF-α组无抑制作用。结论FFA通过TLR4／IKKβ／NF-κB信号通路介导RPMVECs的炎症反应。     

TLR4对胃癌细胞放射敏感性的影响探讨

目的探讨Toll样受体4（TLR4）对肿瘤细胞放射敏感性的影响。方法小鼠胃癌细胞株MFC分别经脂多糖（LPS）、瑞沙托维（TAK-242）和磷酸缓冲液（PBS）处理后进行5Gy照射和0Gy照射,分析MFC细胞TLR4表达情况、增殖活性、放射敏感性、凋亡率和细胞周期变化。结果 MFC细胞经5Gy X射线照射24h后TLR4表达水平显著下降;增殖活性、放射敏感性显著下降,凋亡率显著升高;细胞阻滞于G2/M期。经TAK-242和LPS处理后增殖活性、放射敏感性等均发生不同程度改变。结论 TLR4可对胃癌细胞放射敏感性产生较大影响。     

孕鼠腹腔注射脂多糖致新生鼠肺损伤模型的构建

目的:探讨孕鼠腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致新生鼠肺损伤模型的构建方法?方法: 孕18 d SD大鼠随机分为生理盐水对照组(control组)和LPS组,观察腹腔注射不同剂量LPS(2.5?2.0?1.5?1.0?0.5 mg/kg)与等量灭菌生理盐水后的孕鼠反应并统计孕鼠死亡率及流产率,依上述实验结果选定较低死亡率的LPS剂量?分别予孕鼠腹腔注射LPS(0.9?0.8?0.7?0.6?0.5 mg/kg)及等量灭菌生理盐水后记录各组新生鼠肺的病理评分?湿/干重比值(W/D)及肺组织中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α mRNA?白细胞介素(interleukin,IL)-1β mRNA和TNF-α蛋白的表达量?进一步研究LPS 0.7 mg/kg组中孕19 d胎盘?胎肺及新生鼠生后第1?4?7 d肺组织中炎症因子(TNF-α?IL-1β)mRNA表达量变化与组织病理改变?结果:①LPS组中随着药物剂量递减,孕鼠死亡率及流产率逐渐降低,当LPS剂量小于1.0 mg/kg时孕鼠死亡率及流产率降低至25%以下;②LPS 0.5~1.0 mg/kg时,与对照组比较,LPS< 0.7 mg/kg时新生鼠肺病理评分?W/D?组织TNF-α及IL-1β mRNA表达差异无统计学意义(P均> 0.05),LPS≥0.7 mg/kg时上述指标均显著升高,且差异有统计学意义(P均< 0.05);③孕鼠腹腔注射LPS 0.7 mg/kg时,胎盘?胎肺炎症因子较对照组显著升高,且LPS组新生鼠生后第1?4?7天肺组织中TNF-α?IL-1β mRNA表达水平均显著高于对照组(P均< 0.05)?结论: SD大鼠孕18 d腹腔注射0.7 mg/kg LPS可导致新生鼠肺病理损害?肺水肿,炎症因子TNF-α?IL-1β增高,并延续到生后7 d,是制备宫内感染新生鼠肺损伤模型稳定?可靠的方法?     

地塞米松拮抗脂多糖对TRPC6表达及足细胞损伤的影响

目的观察脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导足细胞（podocyte,PC）瞬时受体电位阳离子通道蛋白6（transient receptor potential cation channel 6,TRPC6）表达及胞内Ca2＋浓度的变化,探讨地塞米松（dexamethasone,DEX）对TRPC6及Ca2＋变化的影响。方法体外分化培养的永生化小鼠PC随机分为：1对照组;2LPS组;3DEX组;4LPS＋DEX组。Fura-2/AM负载检测细胞内Ca2＋浓度,Annexin V-FITC/PI标记流式细胞测定PC的凋亡百分率,免疫荧光染色及半定量分析骨架蛋白F-肌动蛋白分布及数量,Western blotting检测足细胞TRPC6、nephrin及desmin蛋白的表达。结果1对照组、DEX组、LPS组、LPS＋DEX组PC Ca2＋荧光强度变化分别为15.6±6.1、17.8±6.5、116.2±15.4、57.2±13.6;凋亡百分率分别为（0.44±0.24）%、（0.45±0.18）%、（2.28±0.36）%、（1.78±0.33）%;F-肌动蛋白平均荧光强度分别为925±136、924±148、217±44.4、634±71.9;TRPC6蛋白的表达分别为0.33±0.09、0.36±0.08、0.81±0.13、0.61±0.12;nephrin表达为1.14±0.15、1.10±0.15、0.39±0.11、0.68±0.10;desmin表达为0.32±0.05、0.38±0.04、1.01±0.15、0.84±0.14。2与对照组及DEX组相比,LPS组足细胞Ca2＋浓度增加,凋亡百分率增加,F-肌动蛋白减少,TRPC6、desmin表达增加,nephrin表达降低。3与LPS组相比,LPS＋DEX组足细胞Ca2＋浓度及凋亡百分率降低,F-肌动蛋白增加,TRPC6、desmin表达下调,nephrin表达上调。结论 DEX拮抗LPS引起足细胞TRPC6高表达及细胞内Ca2＋水平增加,对足细胞有保护作用。     

CUGBP1在人肺腺癌组织和细胞中的表达

目的比较分析CUGBP1基因在人肺腺癌组织和细胞内表达的特点,及其CUGBP1表达水平与癌细胞增殖活性的关系。方法以人肺腺癌组织标本和人肺腺癌细胞株A549为研究对象,应用免疫组化、WesternBlot、RT—PCR方法检测人肺腺癌组织、细胞内CUGBP1蛋白和基因的表达,并分析其特点。结果CUGBP1基因主要在人肺腺癌组织的细胞核呈强阳性表达,在所有类型腺癌组织中80％以上的癌巢细胞CUGBPl基因呈阳性表达,阳性表达率明显高于正常对照组,差异有显著性（t=100．01,P＜0．001）。95％以上的A549细胞CUGBP1表达呈阳性,且CUGBP1表达量明显低于LPS组,差异有显著性（t=407．53,P＜0．001）。结论CUGBPl基因在人肺腺癌癌巢细胞和A549细胞的胞核内高表达;炎性刺激可增强人肺腺癌细胞株A549的增殖和CUGBPl基因表达;CUGBP1基因可能成为人肺腺癌的早期诊断和增殖状态判断的新指标。     

Thl immunity is not required for the effect of lipopolysaccharide exposure on modifying asthmatic responses of mice before sensitization

Background Disequilibrium of Th1/Th2 is known as an important cause of allergic asthma with a biased Th2 type response. It has been shown that lipopolysaccharide （LPS） administration during post-sensitization modified the inflammation of asthma via upregulating the Thl response that decrease the Th2 immunity. We would like to know if, during pre-sensitization, the elevated Thl response is necessary for LPS exposure to modify the asthmatic response. Methods During pre- or post-sensitization, 40 IJg LPS were intraperitoneal injected （i.p.） to asthmatic mice sensitized and challenged by Dermatophagoides farinae （D. farinea）. Inflammation was assessed by examining bronchoalveolar lavage fluid （BALF） for the number and identity of cells and by cytokine titers measured by ELISA. Semi-quantified RT-PCR was used to evaluate the level of Toll-like receptor 4 （TLR4） mRNA in dendritic cells （DCs） from bone marrow （BMDCs）. Results These investigations demonstrated that LPS exposure during pre-sensitization inhibited the Th2 cytokine and inflammatory infiltration, the same as with LPS exposure during post-sensitization in allergic asthma mice. Contrary to post-sensitization LPS exposure, the Thl cytokines were not upregulated by pre-sensitization with LPS. Finally, the study failed to show any significant difference between TLR4 mRNA expressed in BMDCs with the two times of LPS exposure. Conclusions Our data suggest that elevated Thl immunity is not required for the modification of the Th2 response induced by LPS exposure during pre-sensitization in asthmatic mice and that pre-sensitization differs from post-sensitization. Immune modulation with treatment is independent of TLR4 expression in BMDCs. This study implicates a potential wav to protect from allergic disease and an inflammatory response.