湖南省啮齿动物携带汉坦病毒的分子流行病学研究

目的研究湖南省啮齿动物中汉坦病毒(HV)流行情况及病毒型别。方法采用IFA法检测鼠肺中HV抗原;用RT-PCR法扩增阳性标本中HV的部分S和M片段;构建系统发生树进行系统发生分析及分型。结果在湖南省HV流行的地区共捕获啮齿动物344只,其中6份标本HV抗原阳性,病毒携带率为1.74%。对扩增出的部分S与M片段的核苷酸序列分析表明,5份标本中的病毒为汉城型HV(SEOV),1份为汉滩型HV(HTNV)。用S(620～990 nt)与M片段G2区(2001～2301 nt)核苷酸序列所构建的系统进化树显示,湘乡褐家鼠、黄胸鼠及黄毛鼠携带的病毒均为SEOV的S4亚型;宁远褐家鼠携带的病毒为SEOV的一个新亚型;石门小家鼠携带的病毒为HTNV的H4亚型。结论湖南省为混合型HV疫区,以汉城病毒为主,并具有宿主多样性。     

内蒙古自治区1955-2006年肾综合征出血热流行特征分析

目的阐明内蒙古地区肾综合征出血热（HFRS）的流行特征。方法对内蒙古地区52年来的疫情资料及监测情况进行统计分析，对重点疫区宿主动物分布及其汉坦病毒感染率进行流行病学调查。结果1955—2006年全自治区共报告HFRS 8310例，分布在9个盟（市）的61个旗（县、市、区）。呼伦贝尔市是全自治区HFRS流行最严重的地区，共报告病例7369例，占全区发病例数的88．68％。20世纪90年代前，疫情主要发生在内蒙古的东部地区；90年代后，疫情在中西部地区陆续出现。位于西部的巴彦淖尔市于1999年首次报告HFRS病例，随后发病例数逐年增多，2005年报告95例。在啮齿动物中，现已查明黑线姬鼠、褐家鼠、小家鼠、黑线仓鼠、子午沙鼠、莫氏田鼠、红背肝、大林姬鼠、小毛足鼠、三趾跳鼠、五趾跳鼠11种鼠携带汉坦病毒。结论内蒙古自治区HFRS疫区有可能还将扩大，疫情也会在一段时间内维持在较高水平。     

中国狂犬病的流行病学特征及防制建议

狂犬病是一种由狂犬病毒引起的人兽共患传染病。几乎所有的温血动物对狂犬病毒易感，但犬类是本病的主要宿主，在携带和传播狂犬病过程中起主要作用。人狂犬病通常由患病动物咬伤或黏膜接触后唾液中的狂犬病毒侵入体内而发生感染。狂犬病是迄今为止人类病死率最高的急性传染病，一旦发病，死亡率高达100％。全世界每年约有35000～50000人死于狂犬病，主要分布在亚洲、非洲和拉丁美洲等发展中国家。     

湖南省武岗市洞口县狂犬病流行病学研究

目的分析2003-2004年间在湖南省武岗市与洞口县发生的狂犬病并探讨局部地区流行的因素.方法对狂犬病进行个案调查,用直接免疫荧光法检测犬脑组织中的狂犬病毒抗原,用RT-PCR法扩增N基因片段,测定核苷酸序列并构建系统发生树进行遗传特征分析.结果自1991-2002年武岗市与洞口县仅各报告1例人狂犬病,但2003-2004年间,分别报告30例人狂犬病.62例狂犬病患者中61例被犬所伤,1例被猫所伤.在有完整记录的50例患者中,平均潜伏期为44.18天.其中7例（14%）狂犬病患者的潜伏期≤15天,16例（32%）潜伏期≤20天.在疫点周围采集的99只犬脑组织中,13只犬脑组织狂犬病毒抗原阳性,阳性率为13.13%.将Wg13与Dk13株病毒的部分N基因核苷酸序列与已报道中国病毒株比较,发现2株病毒与广西及安徽的毒株有最高的同源性,构建的系统发生树也分在同一分支.用全N基因核苷酸序列分析发现,Wg13与Dk13毒株全为Ⅰ型狂犬病毒,2株病毒之间的同源性为99.4%以上.比较分析2株病毒N基因编码的氨基酸序列,发现包括第Ⅳ抗原位点区在内的多个氨基酸位点发生了氨基酸的替代.结论引起武岗市与洞口县的狂犬病流行的病毒不是新型狂犬病毒,犬饲养量大与病毒携带率高是狂犬病暴发的直接原因.     

温州市瓯海地区汉坦病毒的分子流行病学调查

目的研究温州市瓯海地区宿主携带汉坦病毒的状况和型别。方法经间接免疫荧光（IFA）试验初筛为阳性的鼠肺标本,用巢式RT—PCR扩增阳性标本中汉坦病毒的S基因片段上的目的核苷酸序列（620～999nt）,并以ClustalX（1．831和Phylip3．63构建系统进化树进行分型和分子进化分析。结果温州市瓯海地区共捕获啮齿动物148只,5份鼠肺标本中汉坦病毒抗原阳性,其中褐家鼠3只,黄胸鼠2只,病毒携带率为3．38％,与汉坦病毒分型标准比较,均属于SEOV型。结论瓯海地区褐家鼠和黄胸鼠携带S1和S3亚型汉坦病毒,显示出汉坦病毒的多样性。     

外固定器治疗小腿严重开放性粉碎骨折

目的 探讨单边加压式外固定器在治疗小腿严重开放性粉碎骨折并软组织挤压伤中的疗效及经验.方法 笔者所在医院1998年1月至2007年1月采用单边加压式外固定器治疗小腿严重开放性粉碎骨折176例.结果 随访2～36个月,下肢功能恢复佳,仅4例延迟愈合,2例骨不愈合.结论 该手术操作简单,固定可靠,无畸形愈合,疗效满意.     

我国各地区动物狂犬病街毒的检测及分析

目的 检测我国不同地区动物中狂犬病毒带毒率并分析糖蛋白编码基因序列.方法 El.ISA、免疫荧光法分别检测586份采集自中国不同地区的犬、猫,蝙蝠和野鼠脑标本和16份犬唾液中狂犬病街毒,阳性标本乳鼠颅内接种.并测序.结果 ELISA、免疫荧光法均在犬脑中分离到10株狂犬病街毒,其中贵州省113份犬脑中分离到2株病毒,湖南省62份犬脑中分离到2株病毒,武汉市70份犬脑中分离到2株病毒,江苏省85份犬脑中分离到4株病毒,沈阳市69份犬脑中未分离到狂犬病毒;79份猫脑、100份蝙蝠脑及8份鼠脑中未检出狂犬病街毒,16份犬唾液标本未检出狂犬病毒.在贵州省和武汉市,冬季采集的112份犬脑末检出狂犬病毒.春夏季采集的40份犬脑中,4份阳性.分离的10株狂犬病毒阳性株颅内接种乳鼠后.均发病死亡.所有分离株均属狂犬病毒基因1型,可分为4个亚组.结论 同一地区的狂犬病毒分离株以及相邻省份的狂犬病毒分离株的同源性十分接近,动物样本采集时间与狂犬病毒阳检率有关.     

细胞培养法检测和分离狂犬病街毒的可行性研究

目的 研究MNA细胞培养法检测和分离狂犬病街毒的可行性.方法 用MNA细胞培养法、荧光抗体实验(FAT)和双抗体夹心ELISA方法分别检测33份狂犬病街毒样品、20份狂犬病毒阴性犬脑样品和4份正常鼠脑样品.结果 MNA细胞培养法检测57份待检样品,培养48 h的实验结果显示,33份狂犬病街毒样品均为阳性,狂犬病毒阴性犬脑样品和正常鼠脑样品均为阴性,与FAT、双抗体夹心ELISA方法的检测结果完全一致.结论 MNA细胞培养法对样品中狂犬病街毒的检测具有较高的灵敏度和特异性,可用于狂犬病街毒的检测和分离.     

北海道型汉坦病毒核蛋白基因的克隆表达及其免疫原性

目的 构建北海道型汉坦病毒(HOKV)核蛋白(NP)基因的重组杆状病毒表达载体,在昆虫细胞中表达出具有免疫原性的抗原,用于HOKV的检测及诊断.方法 应用RT-PCR方法扩增HOKVFusong-Cr-247株的NP基因,并将该基因片段克隆到PCR[R]2.1TA载体,转化到One ShortTM TOP10感受态细胞构建TA克隆载体,并与pFastBacTM1转座质粒载体分别用Kpn I和Not I双酶切,用T4连接酶连接,构建pFast PUUV-S重组转座质粒,经双酶切、PCR扩增及插入序列方向鉴定后.转化到DH10BacTM E.coli 感受态细胞,经三抗培养基筛选和PCR扩增鉴定后获得重组Bacmid质粒,将重组Baemid质粒转染Sf9昆虫细胞制备重组杆状病毒毒液,并继续扩增重组杆状病毒,以第三代毒液感染Sf9昆虫细胞,96h后收获细胞.用间接免疫荧光(IFA)、SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定和分析.结果 实验应用Bac-to-BacTM杆状病毒表达系统,成功构建了含普马拉类汉坦病毒核蛋白基因的重组杆状病毒表达载体.并在昆虫细胞中获得表达.IFA结果显示,感染细胞的胞浆中有亮绿色荧光颗粒,SDS-PAGE和Western blot检测细胞表达产物的50×103(M)的蛋白条带,证实重组病毒感染昆虫细胞后表达了相应的重组核蛋白,与预计的结果相符.并能与抗汉坦病毒抗体结合.结论 成功表达具有HOKV免疫原性及反应性的重组核蛋白,为研制HOKV的诊断试剂奠定了基础.     

防制狂犬病需长期坚持综合防制的策略

中国早在两千多年前就有狂犬病的记载,是世界上最早记载狂犬病的国家之一,也是世界上狂犬病高发国家之一。狂犬病是由狂犬病毒引起的人兽共患传染病,是迄今为止人类病死率最高的急性传染病,一旦发病,病死率高达100％。经过20世纪80年代的严重流行之后,狂犬病在90年代一度得到有效控制。然而近年来,我国狂犬病出现了第三次流行高峰,并且出现了一些新的流行特征。笔者从以下几个方面浅析对我国狂犬病防制的认识及对防治策略的建议。