中国淮阳山地区由新蜱传布尼亚病毒引起的出血热

病毒性出血热是一种临床症状表现为急性发热和出血的疾病.病原体为人兽共患及节肢动物携带传播的RNA病毒,包括丝状病毒科(如埃博拉出血热、马尔堡出血热)、沙粒病毒科(拉沙热)、黄病毒科(如登革出血热、黄热病)和布尼亚病毒科(如克里米亚-刚果出血热、肾综合征出血热).     

温州市瓯海地区汉坦病毒的分子流行病学调查

目的研究温州市瓯海地区宿主携带汉坦病毒的状况和型别。方法经间接免疫荧光（IFA）试验初筛为阳性的鼠肺标本,用巢式RT—PCR扩增阳性标本中汉坦病毒的S基因片段上的目的核苷酸序列（620～999nt）,并以ClustalX（1．831和Phylip3．63构建系统进化树进行分型和分子进化分析。结果温州市瓯海地区共捕获啮齿动物148只,5份鼠肺标本中汉坦病毒抗原阳性,其中褐家鼠3只,黄胸鼠2只,病毒携带率为3．38％,与汉坦病毒分型标准比较,均属于SEOV型。结论瓯海地区褐家鼠和黄胸鼠携带S1和S3亚型汉坦病毒,显示出汉坦病毒的多样性。     

外固定器治疗小腿严重开放性粉碎骨折

目的 探讨单边加压式外固定器在治疗小腿严重开放性粉碎骨折并软组织挤压伤中的疗效及经验.方法 笔者所在医院1998年1月至2007年1月采用单边加压式外固定器治疗小腿严重开放性粉碎骨折176例.结果 随访2～36个月,下肢功能恢复佳,仅4例延迟愈合,2例骨不愈合.结论 该手术操作简单,固定可靠,无畸形愈合,疗效满意.     

北海道型汉坦病毒核蛋白基因的克隆表达及其免疫原性

目的 构建北海道型汉坦病毒(HOKV)核蛋白(NP)基因的重组杆状病毒表达载体,在昆虫细胞中表达出具有免疫原性的抗原,用于HOKV的检测及诊断.方法 应用RT-PCR方法扩增HOKVFusong-Cr-247株的NP基因,并将该基因片段克隆到PCR[R]2.1TA载体,转化到One ShortTM TOP10感受态细胞构建TA克隆载体,并与pFastBacTM1转座质粒载体分别用Kpn I和Not I双酶切,用T4连接酶连接,构建pFast PUUV-S重组转座质粒,经双酶切、PCR扩增及插入序列方向鉴定后.转化到DH10BacTM E.coli 感受态细胞,经三抗培养基筛选和PCR扩增鉴定后获得重组Bacmid质粒,将重组Baemid质粒转染Sf9昆虫细胞制备重组杆状病毒毒液,并继续扩增重组杆状病毒,以第三代毒液感染Sf9昆虫细胞,96h后收获细胞.用间接免疫荧光(IFA)、SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定和分析.结果 实验应用Bac-to-BacTM杆状病毒表达系统,成功构建了含普马拉类汉坦病毒核蛋白基因的重组杆状病毒表达载体.并在昆虫细胞中获得表达.IFA结果显示,感染细胞的胞浆中有亮绿色荧光颗粒,SDS-PAGE和Western blot检测细胞表达产物的50×103(M)的蛋白条带,证实重组病毒感染昆虫细胞后表达了相应的重组核蛋白,与预计的结果相符.并能与抗汉坦病毒抗体结合.结论 成功表达具有HOKV免疫原性及反应性的重组核蛋白,为研制HOKV的诊断试剂奠定了基础.     

细胞培养法检测和分离狂犬病街毒的可行性研究

目的 研究MNA细胞培养法检测和分离狂犬病街毒的可行性.方法 用MNA细胞培养法、荧光抗体实验(FAT)和双抗体夹心ELISA方法分别检测33份狂犬病街毒样品、20份狂犬病毒阴性犬脑样品和4份正常鼠脑样品.结果 MNA细胞培养法检测57份待检样品,培养48 h的实验结果显示,33份狂犬病街毒样品均为阳性,狂犬病毒阴性犬脑样品和正常鼠脑样品均为阴性,与FAT、双抗体夹心ELISA方法的检测结果完全一致.结论 MNA细胞培养法对样品中狂犬病街毒的检测具有较高的灵敏度和特异性,可用于狂犬病街毒的检测和分离.     

湖南省武岗市洞口县狂犬病流行病学研究

目的分析2003-2004年间在湖南省武岗市与洞口县发生的狂犬病并探讨局部地区流行的因素.方法对狂犬病进行个案调查,用直接免疫荧光法检测犬脑组织中的狂犬病毒抗原,用RT-PCR法扩增N基因片段,测定核苷酸序列并构建系统发生树进行遗传特征分析.结果自1991-2002年武岗市与洞口县仅各报告1例人狂犬病,但2003-2004年间,分别报告30例人狂犬病.62例狂犬病患者中61例被犬所伤,1例被猫所伤.在有完整记录的50例患者中,平均潜伏期为44.18天.其中7例（14%）狂犬病患者的潜伏期≤15天,16例（32%）潜伏期≤20天.在疫点周围采集的99只犬脑组织中,13只犬脑组织狂犬病毒抗原阳性,阳性率为13.13%.将Wg13与Dk13株病毒的部分N基因核苷酸序列与已报道中国病毒株比较,发现2株病毒与广西及安徽的毒株有最高的同源性,构建的系统发生树也分在同一分支.用全N基因核苷酸序列分析发现,Wg13与Dk13毒株全为Ⅰ型狂犬病毒,2株病毒之间的同源性为99.4%以上.比较分析2株病毒N基因编码的氨基酸序列,发现包括第Ⅳ抗原位点区在内的多个氨基酸位点发生了氨基酸的替代.结论引起武岗市与洞口县的狂犬病流行的病毒不是新型狂犬病毒,犬饲养量大与病毒携带率高是狂犬病暴发的直接原因.     

定量ELISA检测小鼠血清中抗LDH-C4IgG2b抗体的水平

用定量ELISA的方法检测背部携带分泌抗LDH -C4IgG2b抗体杂交瘤小鼠的血清中IgG2b抗体浓度 ,结果表明 :本法稳定 ,批间变异系数为 7 0 4%～ 13 30 % ,批内变异系数为 3 6 1%～ 10 2 0 % ;标准曲线相关性良好 ,相关系数从 0 96 2 884～ 0 996 795 ;灵敏度较高 ,最低检出浓度为 0 0 1mg/L ;特异性亦较好     

防制狂犬病,中国须建立长效机制

中国早在2 000多年前就有狂犬病的记载,是世界上记载本病最早的国家之一,也是世界上该病高发国家之一[1].狂犬病是由狂犬病毒引起的人兽共患传染病,是迄今为止人类病死率最高的急性传染病,一旦发病,病死率高达100%.经过20世纪80年代的严重流行之后,狂犬病在90年代一度得到有效控制.然而,近年来我国狂犬病不但出现了第三次流行高峰,还出现了一些新的流行特征[2-4].现从以下方面浅析对我国狂犬病防制的认识及对防治策略的建议.     

埃立克体和埃立克体病

埃立克体属(Ehrlichia)细菌属于α-变形菌纲(α-Proteobacteria)立克次体目(Rickettsiales)的无形体科(Anaplasmataceae).埃立克体在自然界中借助节肢动物媒介和脊椎动物宿主而存在,能引起人或动物埃立克体病.1925年世界首次发现引起牛羊等反刍动物水胸病(heartwater disease)的病原体为立克次体类病原体,并命名为反刍动物立克次体(Rickettsia ruminantium)^[1].1991年首次报道埃立克体能对人致病^[2].在过去的30多年中,随着PCR检测方法的完善与测序技术的发展,新的埃立克体在世界各地不断被发现,更多的国家与地区证实了埃立克体及埃立克体病的存在.随着社会生态环境的改变,人类与节肢动物及野生动物的接触增加,由新埃立克体引起的新发传染病时有报道^[3].为此本文对近年来国内外在埃立克体病原学、流行病学、致病性方面的研究进展综述如下.     

浙江省龙泉市汉坦病毒宿主动物自然感染状况研究

目的 调查浙江省龙泉市肾综合征出血热(HFRS)疫源地小动物中汉坦病毒(HV)的自然感染情况及其流行的基因型.方法 用鼠笼在龙泉市查田镇、小梅镇、小梅镇黄南村捕鼠.捕获的小动物进行分类鉴定并解剖取肺脏,用间接免疫荧光法(IFA)检测肺组织中HV抗原,用RT-PCR对HV抗原阳性的样本扩增部分S片段核苷酸序列并测序,构建系统发生树进行基因分型.结果 共捕获小动物319只,其中野外312只,室内7只.黑线姬鼠和东方田鼠为野外优势鼠种.肺组织标本中共检测到9份抗原阳性,带病毒率为4.97%,用部分S片段(620～999nt)的核苷酸序列构建系统发生树,结果表明均为汉滩病毒(HTNV),并与Z251分离株的亲缘关系最近.结论 龙泉市野外主要存在以黑线姬鼠为宿主的HTNV感染,且携带率较高.

Abstract：

Objective To investigate the situation of the natural infection of hantaviruses (HV) in small mammals and to provide evidence for the control and prevention of hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) in Longquan area,Zhejiang province. Methods Small mammals were captured by night trap, and lung tissue samples were collected and stored in liquid nitrogen. HV antigens were detected by indirect immuno-fluorescence assay (IFA). The partial S genome segment sequences were amplified by RT-PCR. DNAStar program was used for editing and comparing the sequences. Phylogeny was analyzed through PAUP*4.0 software. Results 319 small animals were collected in Longquan, and 9 hantavirus antigen-positive samples were identified. The positive rate of hantavirus in Apodemus agrarius was 4.97% . Phylogenetic tree constructed by partial S segment (620-999 nt) showed that the 9 strains carried by A agrarius from Longquan all belonged to HTNV,and had a closer evolutionary relationship with isolate Z251 from Zhejiang province. Conclusion Our results indicated that the main host was A. agrarius and the infection rate of HTNV was high in Longquan area.