盐城市狂犬病毒核蛋白及糖蛋白基因序列分析

目的 对江苏省盐城市狂犬病毒核蛋白及糖蛋白的基因进行遗传学分析，揭示流行于该地区的狂犬病毒与人用及兽用狂犬病疫苗株间的差异。方法 以直接免疫荧光法检测犬脑标本，用阳性犬脑组织悬液接种鼠脑分离病毒。以RT-PCR法扩增病毒核蛋白及糖蛋白全基因片段，克隆测序后进行遗传学分析。结果 从58份犬脑中发现两份样品狂犬病毒抗原阳性，分别命名为Jiangsu Yc87与Jiangsu Yc88。从两份阳性样品均扩增到全N基因与G基因序列。阳性犬脑组织接种乳鼠后，从JiangsuYc88样品分离到狂犬病毒。分析发现两株病毒均为基因1型狂犬病毒．两株病毒间N基因与G基因的核苷酸及氢基酸的同源性分别为99．8％和99．7％，氨基酸的同源性分别为99．3％和98．8％。与已知的狂犬病毒相比，两株病毒与我国宁夏、河南、湖南、印度尼西亚病毒株的同源性较高，N基因的核苷酸及氨基酸同源性分别为86．3％～98．7％和95．4％～99．8％，G基因核苷酸及氨基酸同源性分别为82．1％～92．1％和94．1％～95．7％；JiangsuYc87与JiangsuYc88N基因的氨基酸序列分别发生了4和2处氨基酸的替换，G基因的氨基酸序列发生了29和26处氨基酸的替换。与当前使用的疫苗株相比，两株病毒与CTN疫苗株同源性较高，N基因与G基因核苷酸同源性分别为90．2％和87．1％～87．3％，氨基酸同源性分别为98．4％和91．7％～92．3％．但G基因膜外区与所有疫苗株无显著差异；N基因的氨基酸序列分别发生了5和6处氨基酸的替换，G基因的氨基酸序列发生了31和28处氨基酸的替换。结论 两株狂犬病毒为基因1型狂犬病毒，其N基因和G基因的核苷酸序列以及推导出来的氨基酸序列与已知的1型狂犬病毒株及疫苗株均有一定的差异。     

中国广西登革3型病毒分离株基因组序列特征分析

目的对我国广西登革3型病毒分离株桂登-1株(GD-1株)和桂登-11株(GD-11株)进行全基因组序列测定和分析,为了解其地理来源提供依据。方法根据GenBank提交的登革3型病毒基因序列设计9对引物,RT-PCR方法分段扩增GD-1和GD-11株基因序列,测序后进行拼接,得到其全基因组序列。结果两株病毒全长均为10 707nt,与国际参考株H87株核苷酸同源性为96.0%,氨基酸同源性为98.8%。GD-1株和GD-11株间仅有4个氨基酸差异,二者与H87株分别存在39和41个氨基酸差异。对3’UTR二级结构进行预测,二者与H87株存在较大差异。根据E蛋白基因序列对两株病毒进行进化分析,GD-1和GD-11均属于亚型Ⅱ,与分离自泰国的两毒株进化关系较近。结论 GD-1和GD-11均属于登革3型病毒亚型Ⅱ,二者可能是源自泰国的病原。     

一株特殊抗原性乙脑毒株的分子生物学特征研究

目的对一株抗原性特殊的乙脑毒株进行生物学和分子生物学特征研究,以找出特殊抗原性的分子生物学基础。方法通过空斑减少交叉中和试验对乙脑病毒KT株的抗原性进行比较。提取KT株RNA,逆转录后扩增其E基因片段并测序,通过Blast与GenBank中所有乙脑病毒基因进行核苷酸和氨基酸序列比对,利用PdbViewer对KT株关键位点突变后的空间构象进行预测比对。结果交叉中和试验显示,KT株免疫血清对其他株乙脑病毒的中和作用较低,而其他乙脑病毒免疫血清对KT株的中和作用也较低。对E基因序列进行比对,KT株属于基因Ⅲ型,氨基酸序列上只在E62位存在一个独特的位点突变:组氨酸(H)→精氨酸(R)。空间构象显示,该位点位于结构域Ⅰ与结构域Ⅱ的连接交界处,当发生由组氨酸(H)到精氨酸(R)突变时,其与周围氨基酸形成的氢键数量和长度发生改变,空间构象也随之发生改变。结论乙脑病毒KT株的抗原性与其他乙脑病毒株存在较大差异,E62位组氨酸(H)→精氨酸(R)的突变是导致其抗原性差异的主要原因。     

黄病毒疫苗的最新研究进展(续)

本文介绍了利用各种不同新技术研发的黄病毒疫苗以及改良现有疫苗的进展。一些新型候选疫苗的效力和安全性已经临床试验评价并证实。除疫苗研发的技术进展外,还深入研究分析了诸如合适的动物模型、疫苗安全性、疫苗组成和接种、血清学诊断的复杂性和经济因素等问题的重要性。     

流行性乙型脑炎Vero细胞纯化灭活疫苗的研究

目的研制新的流行性乙型脑炎传代细胞疫苗。方法将流行性乙型脑炎弱毒株ＳＡ１４１４２适应于Ｖｅｒｏ细胞,作纯化灭活疫苗,比较不同培养方法病毒在Ｖｅｒｏ细胞的增殖规律,对病毒的浓缩和纯化条件进行研究,并将所制备的疫苗按不同蛋白浓度免疫动物。结果发现普通转瓶培养,可长时间维持病毒的高滴度。在感染病毒后,以无牛血清的培养基替代含牛血清的培养基,不仅可维持病毒的高滴度增殖,而且可多次收获,确立了应用８％ＰＥＧ８０００浓缩病毒液,１５％～６０％的蔗糖密度梯度超速离心纯化的工艺,每剂量为０５μｇ纯化疫苗的中和抗体水平,即可达到与现有商品疫苗相一致的滴度。结论ＳＡ１４１４２株制备的Ｖｅｒｏ细胞纯化疫苗,有望成为一种新的反应轻、效价高的疫苗。     

流行性乙型脑炎疫苗纯化工艺的建立

目前我国流行性乙型脑炎 (乙脑 )疫苗已形成规模化生产 ,并取得了较好的预防效果[1 ] ,但此种疫苗属粗制疫苗 ,其抗原含量较低 ,异源蛋白和亚细胞成分较多 ,临床应用存在一定副反应 ,因此有必要将疫苗进行浓缩纯化 ,以提高疫苗的免疫效果和降低副反应。经过几年的探索 ,我们建立了乙脑疫苗的纯化工艺 ,并在国内率先通过国家新药评审。现将纯化工艺报告如下。1 .材料与方法 :①乙脑SA1 4 1 4 2减毒株 ,由中国药品生物制品检定所提供。②地鼠肾细胞制备 :按现行地鼠肾细胞乙脑疫苗 (PHKJE)生产工艺进行。地鼠从卫生部北京生物制品研究所…     

肾综合征出血热疫苗研究现状

流行性出血热是由一种抗原性及其遗传特性相似的病毒群所致 ,又称肾综合征出血热[1 ] ,30年代在我国东北地区即有孙吴热、二道岗热、虎林热、黑河热等的称谓。至今已有70多年的历史。该病病死率高 ,严重危害着我国人民身体健康和生命安全 ,是我国重点的防治传染病之一 ,世界卫生组织将本病命名为肾综合征出血热 (hemorrhagicfeverwithrenalsyndrome ,HFRS)。 1976年 ,南朝鲜李镐旺在Hantaan河捕获的黑线姬鼠肺组织中分离到 (Koreanhemorrhagicfever,KHF)病原 ,并于 1978年证实为引起流行性出血热的病原体 ,后命名为Hantaan病毒 76～ 118…     

精制Vero细胞狂犬病疫苗的临床观察及免疫学效果 …

目的 目前我国使用的人用狂犬病疫苗生产工艺较落后,致使用后副反应较严重,而国际上Ｖｅｒｏ细胞狂犬病疫苗已研制成功和使用近２０年,不仅免疫效果良好而且副反应很轻。为了改变我国狂犬病疫苗生产工艺的落后和质量较差的状况,而开展此项研究。方法 海南省生物制品研究所和河南省生物技术研究所联合研制的Ｖｅｒｏ细胞狂犬病疫苗获得卫生部批准进行临床观察,该疫苗以ａＧ株适应Ｖｅｒｏ细胞后为生产毒种,转瓶培养、并浓缩适     

抗原性不同的乙型脑炎病毒株间的结构蛋白比较

乙型脑炎病毒(JEV)和其他黄病毒一样,含有约11000个碱基对的单链RNA,可编码3种结构蛋白,即核壳(C)蛋白、膜(M)蛋白和包膜(E)蛋白.这些结构蛋白的氨基酸序列在病毒株间的同源性大于98%.作者曾用JEV特异性单克隆抗体(McAb)作血凝抑     

实验性登革热病毒减毒活疫苗免疫后的T淋巴细胞激活:血浆中slL-2R和sCD4水平提高

登革热病毒感染在热带和亚热带地区是严重的健康问题。要控制登革热病毒感染,研制安全有效的疫苗尤为重要。作者以实验性减毒活疫苗免疫志愿者后检测血浆中可溶性白细胞介素2受体（sIL-2R）、可溶性CD4（sCD4）和可溶性CD8（sCD8）水平进行体内