弹状病毒的分类和进化

弹状病毒科病毒给人类健康、农业、畜牧业和渔业带来重大影响。不同属病毒之间在基因组结构、宿主范围、传播方式等方面性状各异。目前弹状病毒划分为9个属,但仍有不少新发现病毒有待分类。病毒的进化与媒介（宿主）、传播方式、生态环境等多种因素密切相关。     

长角血蜱和微小扇头蜱的形态与分子生物学鉴定

目的 建立鉴定长角血蜱和微小扇头蜱的形态学和分子生物学相结合的方法.方法 采集自湖北和河南省布尼亚新病毒疫区家养动物体表寄生的蜱及草丛、灌木中的蜱;先以形态学鉴定,后用PCR方法扩增得到蜱的12S rDNA,测序后进行同源性和系统进化分析.结果 形态学方法鉴定采集到两种蜱:长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)和微小扇头蜱(Rhipicephalus microplus).蜱的12S rDNA经克隆、测序,用PAUP 4.0软件构建系统发生树,湖北、河南省两种蜱的12S rDNA序列分别与长角血蜱和微小扇头蜱聚类,与形态学鉴定结果一致.结论 在传统形态学分类的基础上结合分子生物学鉴定方法能更准确地鉴定蜱的种类.

Abstract：

Objective To establish a method combined morphology and molecular marker for identifying Haemaphysalis longicomis and Rhipicephalus microplus. Methods Ticks were collected from domestic animals and wild environment in epidemic area of Hubei and Henan provinces where cases of fever with thrombocytopenia syndrome were prevalent. We classified the ticks by morphology characteristics before 12S rDNA of ticks were amplified by PCR and subsequently sequenced. Phylogenetic tree was constructed by PAUP4.0. Results The ticks belonged to Haemaphysalis longicomis and Rhipicephalus microplus through observation and analysed by the morphological characteristics of the ticks. 12S rDNA was cloned and sequenced while data confirmed the morphological identification of the results. Conclusion The method based on morphology that combined with molecular marker seemed a good method for the identificaton of ticks.     

1980-2010年广州市狂犬病监测分析

目的分析广州市1980-2010年30年间狂犬病的流行病学特征。方法收集狂犬病疫情资料及狂犬病病例个案调查表,用回顾性调查方法分析资料;采集疫区犬脑组织,用免疫荧光法和RT？PCR法检测狂犬病病毒抗原。结果 1980-2010年广州市共报告655例人间狂犬病,其中597例为1980-1989年报告的病例,占总病例数的91.15%,45例为2005-2010年报告的病例,占总病例数的6.87%,形成了2次流行高峰;45例患者中男性多于女性,10～55岁年龄组发病人数较多,学生、民工和农民居多。在疫区共捕捉86只犬,取脑组织,经免疫荧光和PCR检测,全部为阴性。结论广州市过去30年人间狂犬病有2次流行高峰;1990年以前犬免疫率低,人暴露后疫苗接种率低使人狂犬病发病率达到最高峰;2005年后,养犬数增多,人们预防狂犬病的意识放松,忽视伤口处理及暴露后免疫,导致狂犬病发病率回升;86只犬中未检测到狂犬病病毒,说明广州地区狂犬病病毒在家养犬中的流行强度较低。     

汉坦病毒系统发生分析及其基因分型的研究

目的寻找适于汉坦病毒进行系统发生分析的系统发生树构建方法及其基因片段。选用GenBank中部分有代表性的汉坦病毒株，用M、S、M＋S全序列。以及G1、G2的2003—2302、2741—2950核苷酸片段分别以邻位相连法（NJ）和最大简约法（MP）构建系统发生树。用M＋S、M、G1、以及G2的2003—2302片段以NJ法构建的系统发生树将所选25株病毒分为5个分支，分别对应于HTN、SEO、DOB、PUU血清型及引起HPS的Sin Nomhre血清族。但用G2区的2741—2950片段构建的系统发生树将DOB型与HTN型分为一支。以MP法用M、M＋S及G1片段构建的发生树，结果与NJ法相同。但用S与G2的2003—2302、2741—2950片段构建的系统发生树则不能将所有的病毒株分在相应的血清型。因此，汉坦病毒的基因分型及系统发生分析时，NJ法优于MP法；用M片段的G1核苷酸序列可以替代M-9S片段全序列进行基因分型及系统发生分析。     

辽宁地区汉坦病毒分离株的基因分型

目的　分离辽宁地区汉坦病毒并对分离株 (SY 13)进行基因分型 ,以查清辽宁地区汉坦病毒流行株的基因型和基因亚型。方法　采用组织细胞培养法分离汉坦病毒 ;用RT PCR法分别扩增SY 13的M片段G1、G2区和S片段 ;采用邻位相连法 ,通过DNAStar、Clustalx、Phylip等序列分析软件分别对 3个基因片段的序列与从GenBank下载的序列进行同源性分析 ,并构建种系发生树。结果　通过对 3个基因片段进行比较分析 ,SY 13与HTN型同源性较高 ,为 79.3%～ 97.0 % ;通过M片段G2区的比较分析 ,SY 13与BAO 10、BAO 14、JIANG 13、BAO 9、Q 33处于同一分支 ,同源性为 95.0 %～97.0 %。结论　辽宁地区汉坦病毒SY 13株与黑龙江地区分离株属同一亚型 ,为HTN型病毒中的H4亚型     

中国狂犬病流行现状

在中国，人狂犬的流行从建国至今经历了几次起伏，近年来狂犬病发病数持续快速上长，病死数居各种传染病的首位，如不采取有效措施，2005年发病数将仍有可能快速上升，因此我们面临着非常严峻的狂犬病防制形势。而造成这种情况的一个重要因素就是狂犬病疫功的质量不稳定。影响了免疫接种的效果。     

汉坦病毒辽宁地区黑线姬鼠体内分离株的基因分型

目的 分离辽宁地区汉坦病毒，对分离株(SY13)进行基因分型，以弄清辽宁地区汉坦病毒流行株的基因型和基因亚型。方法 采用组织细胞培养法分离汉坦病毒：用RT—PCR法分别扩增SY13的M片段G1、G2区和S片段，通过DNAstar序列分析软件分别对三个基因片段的序列与从GenBank下载的序列进行同源性分析，并构建种系发生树。结果 通过对三个基因片段进行比较分析，SY13与HTN型同源性较高，为79．3％～97．0％；通过M片段G2区的比较分析，SY13与BA010、BA014、JIANG13、BA09、Q33处于同一分支，同源性达到95．0％～97．0％。结论 辽宁地区汉坦病毒分离株(SY13)与黑龙江地区分离株属同一亚型，为HTN型病毒中的H4亚型。     

浙江省啮齿动物中温州病毒的基因组学分析

目的 为了解国内发现的新型沙粒病毒（温州病毒）在温州地区啮齿类动物中的流行情况。方法 采用巢式RT-PCR方法分别对采集自温州（48份）及龙泉（156份）的啮齿动物样本筛查沙粒病毒。结果 在温州地区采集的5份啮齿动物样本中再次检测到温州病毒,阳性率为10.41%;但在龙泉地区采集的156份样本中均未发现温州病毒。分析病毒的全基因组序列发现其中4株病毒与已知的温州病毒有很高的同源性;而编号为Wencheng-Rn-288病毒株的S和L节段与已知病毒同源性分别为87.5%和91.6%,在进化树上为一独立分支,为温州病毒的新亚型。结论 温州病毒在温州地区啮齿动物中有较高的流行率,且呈多样性。鉴于在柬埔寨已发现温州病毒能引起人呼吸道疾病,因此我国应加强温州病毒的监测。     

吉林省汉城型汉坦病毒基因分型研究

目的 查明吉林省褐家鼠中汉城型汉坦病毒的基因亚型及其分布情况。方法 在吉林省的主要疫区采集啮齿类宿主动物，用免疫荧光法检测鼠肺标本，对汉坦病毒抗原阳性标本以RT-PCR法扩增部分M和S基因片段上的核苷酸序列并测序，将扩增片段的核苷酸序列与已知病毒序列进行系统发生分析并分型。结果 褐家鼠携带的汉坦病毒均为汉城病毒。序列分析发现在吉林省主要疫区褐家鼠流行的汉城病毒均为S3亚型，与辽宁、黑龙江省褐家鼠中的病毒株同源性较高，进化关系较近。结论 吉林省褐家鼠主要携带S3亚型的汉城型汉坦病毒。     

大林姬鼠中汉坦病毒的分离及其S片段的序列分析

目的 分析吉林省大林姬鼠携带的汉坦病毒(HV)在进化过程中的系统发生关系。方法采用病毒分离技术、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、克隆以及测序技术对中国大林姬鼠携带的HV进行研究。结果从4只大林姬鼠Hv抗原阳性的肺组织标本中分离到2株HV(CJ189和CJ193)，对其中CJ193病毒株的S片段进行克隆、测序以及分析，基因分型结果为汉滩型(HTN)汉坦病毒。根据S片段的核苷酸序列同源性分析，CJ193与Aa2499核苷酸序列的同源性最高(94．3％)，而与Ap61、Ap63的同源性最小(83．3％，82．9％)。由全S片段构建的HTN型汉坦病毒的系统发生树表明CJ193与Aa2499等俄罗斯黑线姬鼠携带的HV的亲缘关系最近，其次为中国的HTN型病毒，然后才是Ap61、Ap63等俄罗斯大林姬鼠携带的HV。结论从我国吉林省大林姬鼠分离到的CJ193株是HTN型汉坦病毒的新亚型。