骨肉瘤特异性细胞毒T淋巴细胞的诱导及研究

本研究探讨骨肉瘤特异性细胞毒T淋巴细胞(OSS-CTL)的诱导方法及其抗瘤特性和杀伤机制.通过生化方法从HOS-8603人骨肉瘤细胞系中提取、纯化、鉴定骨肉瘤相关抗原(OSAA66),然后与低剂量IL-2(100U/ml),CD3(10μg/ml)单折协同刺激骨肉瘤致敏的外周血淋巴细胞,诱导产生OSS-CTL.检测其细胞表型、杀伤机制、体内外的增值能力及抗瘤活性,并与骨肉瘤TIL进行了比较.①流式细胞仪检测OSS-CTL的表型特征为CD3~ (87.6±6.3)%,CD4~ (21.7±4.1)%,CD8~ (94.7±5.3)%,CD11b~ (1.9±0.9)%,HLA-DR~ (79.3±8.7)%,即以CD3~ CD8~ CTL为主异质细胞群.②[3~H]-TdR释放法测定细胞毒性,结果OSS-CTL对HOS-8603和自体骨肉瘤细胞的杀伤活性分别为97.3%和95.2%,而对K562和SHG-44细胞仅为11.2%和9.6%,两组差异显著(P<0.05).提示,OSS-CTL对OSAA66有关的骨肉瘤细胞具有高效的特异杀伤活性.杀伤机制研究表明,在光镜和电镜下观察到OSS-CTL通过接触溶解和诱导凋亡途径杀伤靶细胞.通过流式细胞仪检测发现,效靶比为1:1,50:1,     

兔回肠膀胱扩大术与结肠膀胱扩大术后细菌粘附性比较

本研究对兔施行回肠或结肠膀胱扩大术。动物模型建立后 ,对扩大膀胱的膀胱部位、回肠部位和结肠部位进行细菌粘附能力比较。作者对 8周的兔施行回肠或结肠膀胱扩大术 ,术后 3个月行尿 ｐＨ值测定和尿培养 ,用ＰＣＲ对致病性埃希大肠杆菌 (Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ)进行检测 ,在培养阴性的兔中接种Ｅ .ｃｏｌｉＣ5或Ｅ .ｃｏｌｉＣ92型大肠杆菌 ,浓度为 10 5个克隆形成单位 / 0 .3ｍｌ,2周后测定扩大膀胱的膀胱片和肠片的每ｃｍ2 的细菌克隆形成单位。结果发现 ,在培养阴性的兔中 ,回肠扩大膀胱术后的尿 ｐＨ值(7.35± 0 .33)明显高于…     

人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶-2对胶质瘤细胞U251中MMP-2、TIMP-2 mRNA表达及细胞迁移能力的影响

目的探讨多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶-2（ppGalNAc-T2）对胶质瘤细胞侵袭转移的作用。方法将ppGalNAc-T2的真核表达正义载体、RNA干扰载体通过脂质体稳定转入胶质瘤细胞U251;通过荧光显微镜观察及RT-PCR检测ppGalNAc-T2的表达来确定载体正确转入细胞;细胞分为以下5组：U251转染正义载体组与空载体组、U251转染干扰载体组与对照载体组、U251未转染组,通过RT-PCR方法检测各组细胞基质金属蛋白酶（MMP）-2、基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP）-2mRNA表达的变化;通过划痕法检测各组细胞的迁移差异。结果荧光显微镜观察及RT-PCR检测结果表明,载体成功转入细胞;RT-PCR检测结果发现,随着ppGalNAc-T2的增高,MMP-2的表达降低,而TIMP-2的表达升高（P〈0.05）;划痕结果显示,正义组细胞迁移能力随ppGalNAc-T2的上调而减弱（P〈0.05）,干扰组划痕修复较快（P〈0.05）,其他对照组相近（P〈0.05）。结论 ppGalNAc-T2的上调可抑制细胞的划痕修复,由此推测ppGalNAc-T2可能与胶质细胞的侵袭转移密切相关。     

细胞表面α2,3唾液酸结构与胃癌细胞AGS增殖、迁移的关系及相关基因表达的初步研究

目的 检测6个α2,3唾液酸转移酶基因在胃癌细胞AGS的表达,以及AGS细胞表面的α2,3唾液酸结构对增殖、迁移能力的影响.方法 通过RT-PCR分别检测6个基因在胃癌细胞AGS mRNA水平的表达情况.以不同活性浓度的α2,3唾液酸酶处理AGS细胞,通过MTT法检测其生长曲线的改变,通过划痕试验检测其迁移能力的改变.结果 在胃癌细胞AGS中,α2,3唾液酸转移酶家族的6个成员有两个在mRNA水平表达.分别是ST3Gall和ST3Ga14;α2,3唾液酸酶处理后,AGS生长周期缩短,迁移能力显著增强.结论 AGS细胞表面的α2,3唾液酸结构可能通过影响细胞之间的识别、改变信号通路,延长AGS细胞的生长周期,抑制其迁移能力.     

壳聚糖对肝癌和肺癌细胞株糖基化作用的影响

目的:观察中药壳聚糖对肝癌和肺癌细胞株糖基转移酶表达的影响,探讨中药多糖在肿瘤预防和治疗的应用。方法:以浓度为50,100和200 mg/L的壳聚糖分别作用于肝癌细胞株SMMC-7721和肺癌细胞株A549,采用RT-PCR方法检测多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAcT2)和β3GalT7的表达水平。结果:肝癌细胞株中pp-GalNAcT2和β3GalT7仅微弱表达,加药后作用不明显;肺癌细胞株中ppGalNAcT2和β3GalT7均有所表达,加入不同浓度的壳聚糖之后,ppGalNAcT2和β3GalT7的表达均受到抑制,且随着壳聚糖浓度的增加,抑制作用越明显。结论:肝癌细胞株SMMC-7721和肺癌细胞株A549 ppGalNAcT2和β3GalT7的表达不同,壳聚糖能够抑制肺癌细胞株A549中的糖基转移酶ppGalNAcT2和β3GalT7的表达,从而抑制了糖基化作用,对肺癌的预防和治疗具有一定的价值。     

β射线对NIH3T3成纤维细胞细胞周期的影响及牛磺酸的干预作用

目的：观察β射线对NIH3T3成纤维细胞周期的影响,探讨β放射损伤的机制及牛磺酸（taurine）的辐射防护作用。方法：以不同剂量的高能电子射线模拟β射线照射NIH3T3细胞,加药组分别为（50mg／L、100mg／L、200mg／L）选择15Gy照射剂量,采用流式细胞术检测各组细胞的细胞周期率。结果：β辐射后细胞发生G2期阻滞,且与照射剂量呈正相关（P≤0．01）。在0-15Gy剂量范围内,β辐照12h后未观察到细胞发生凋亡。加入牛磺酸后,G2期受阻现象得到缓和,G2／M期百分率与药物剂量呈负相关（P≤0．01）。结论：β辐射后NIH3T3细胞属于G2期延迟细胞,牛磺酸可通过一定机制使受损的细胞不能通过G1期,从而有助于加强对细胞受损DNA的修复,起到辐射防护的作用。     

β3Gn-T8对胃癌AGS细胞增殖能力的影响

目的:研究β1,3-N-乙酰葡萄糖胺转移酶8(β3Gn-T8)对胃癌细胞及胃癌移植瘤生物学行为的影响。方法:将β3Gn-T8正义表达载体pEGFP-C1-β3Gn-T8转染人胃腺癌AGS细胞,通过MTT法和活细胞计数检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率。建立AGS细胞皮下移植瘤模型,检测移植瘤的生长情况。结果:转染pEGFP-C1-β3Gn-T8的AGS细胞活力明显增加(P<0.05),但是凋亡率无明显变化。转染pEGFP-C1-β3Gn-T8的移植瘤生长速度及最终体积均较对照组明显增加(P<0.05)。结论:β3Gn-T8可以促进胃癌AGS细胞的活力,明显促进AGS细胞移植瘤的生长。     

ppGalN Ac-T1和-T2在乳腺癌相关药物敏感性、细胞凋亡及侵袭中的作用

目的 探讨N-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAc-T )1和-T2对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231恶性表型的影响.方法 分别将 siRNA-ppGalNAc-T1(A组)、siRNA-ppGalNAc-T2 (B组)和空载体对照(C组)转染MDA-MB-231细胞.采用荧光定量PCR检测ppGalNAc-T1和-T2 mRNA表达 ,MTT法和 Hoechst 33258染色分别检测各组对多西他赛和吉西他滨的药物敏感性及细胞凋亡率的变化 ,T ransw ell实验检测各组细胞的侵袭能力.结果 M DA-M B-231细胞中ppGalNAc-T1和-T2 mRNA表达水平均高于正常乳腺细胞(P＜0 .05).与C组相比 ,A组、B组药物敏感性和细胞凋亡率升高(P＜0 .05) ,而细胞侵袭能力受到抑制(P＜0 .05).结论 ppGalNAc-T1和-T2可能是潜在预测和治疗三阴性乳腺癌的有效靶点.     

中国南方四省区流行的HIV-1 CRF01_AE病毒株基因特征研究

目的 分析中周南方四省区HIV-1感染者中流行CRF01 AE病毒株的遗传特征.方法 从广东、广西、江西和湖南省(自治区)2006年新报告HIV-1感染者的血浆样本中提取病毒RNA,用反转录/巢式PCR方法扩增gag和env基因片段,对获得的CRF01 AE病毒株核酸序列进行系统进化分析,并通过计算基因距离和Entropy核苷酸多态性差异方法分析毒株的遗传特征.结果 从210例CRF01_AE病毒株感染者中,发现四省区流行的CRF01 AE病毒株存在2个主要的流行簇.流行簇Ⅰ共有123例样本,未发现与之直接相关的国际参考毒株.流行簇Ⅱ共有57例样本,与越南CRF01 AE病毒株关系密切,且存在不同时间样本的混杂.gag和env基因遗传距离分析结果表明,流行簇Ⅰ内基因遗传多样性均明显小于流行簇Ⅱ;核苷酸多态性分析结果显示,在gag基因片段42个位点核苷酸组成具有显著差异,env基因片段40个位点核苷酸组成存在显著差异;流行簇Ⅰ相对于流行簇Ⅱ多态性减少的位点上有61个,多态性增加的位点有21个.结论 在中国南方四省区流行的CRF01 AE病毒株中首次观察到2个独立的流行簇.流行簇Ⅰ病毒株为该地区最主要的CRF01 AE病毒株,其流行时间相对较短,在人群中所占比例较多,可能是病毒在流行过程中形成的具有传播优势的病毒株.流行簇Ⅱ病毒与来自于越南的CRF01 AE病毒株有较高同源性,且存在与越南病毒株间的多次传播.     

β3GnT8基因对HL60细胞体外侵袭能力的影响

目的：初步探讨β3GnT8/GalT7基因对HL60细胞体外侵袭的作用。方法通过脂质体介导将实验室构建好的β3GnT8真核正义表达载体pEGFP-C1-T8-Sense和反义表达载体pEGFP-C1-T8-AntiSense转染入HL60细胞;RT-PCR和Western blot检测浸润转移相关的功能基因TGFβ1、MMP2、MMP14在mRNA水平和蛋白质水平的表达变化;Transwell侵袭实验检测β3GnT8对HL60细胞侵袭转移能力的影响。结果随着β3GnT8表达上调,细胞侵袭能力高于对照组（P＜0.05）,MMP2、MMP14在mRNA和蛋白质水平的表达上调,而TGFβ1表达下调;随着β3GnT8表达下调,细胞侵袭能力下降,MMP2、MMP14在mRNA和蛋白质水平的表达下调,而TGFβ1表达上调。结论β3GnT8可在体外增强HL60细胞的侵袭能力,而该作用可能源于它能够诱导肿瘤侵袭相关蛋白的表达变化。