HMGB1 siRNA干扰对食管鳞癌细胞放射敏感性的影响

目的： 采用siRNA技术干扰人食管鳞癌细胞中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）基因表达，观察经X射线照射后细胞增殖活性、存活能力及细胞凋亡率的变化。方法： 针对HMGB1 mRNA序列，设计合成有效的干扰序列HMGB1 siRNA，并转染食管鳞癌KYSE30细胞，同时设置转染阴性对照序列的阴性对照组以及未进行转染的空白对照组。采用实时荧光定量PCR（qPCR）和Western blot法检测各组细胞HMGB1 mRNA和蛋白的表达；分别用MTS比色、克隆形成实验、流式细胞术和Western blot法检测HMGB1 siRNA干扰对食管鳞癌细胞KYSE30细胞的增殖活力、存活能力、细胞凋亡率及凋亡相关蛋白表达的影响。结果： HMGB1 siRNA干扰后，KYSE30细胞HMGB1 mRNA和蛋白的表达水平明显降低（P均 < 0.01）；MTS数据显示HMGB1 siRNA干扰后经X射线照射显著抑制了食管鳞癌细胞的增殖水平（与空白对照组和阴性对照组比较，P < 0.05）；克隆形成实验结果显示空白对照组、阴性对照组、HMGB1 siRNA组的D₀值分别为2.57、2.54、1.55 Gy；D_q值分别为1.69、1.65、1.30 Gy；SF₂值分别为0.27、0.27、0.13；外推数N值分别为1.93、1.91、2.31；X射线照射后HMGB1 siRNA组肿瘤细胞的凋亡率明显增加，同时bcl-2蛋白表达显著降低，而bax、caspase-3蛋白的表达明显增加（与空白对照组和阴性对照组比较，P < 0.01）。结论： siRNA干扰技术可用来抑制食管鳞癌细胞中HMGB1基因的表达，联合X射线照射降低了肿瘤细胞的增殖水平和存活能力，诱导了细胞凋亡，增加了放射敏感性，该作用可能与调控bcl-2、bax和caspase-3基因表达有关。     

MiR-429及Bmi-1 mRNA在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及其临床意义

目的：研究miR-429和Bmi-1 mRNA在弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）组织中的表达及其临床意义。方法：选取自2014年1月—2015年12月河北医科大学第四医院的45例DLBCL患者瘤组织和28例正常对照人群淋巴结组织，用实时荧光定量反转录PCR（RT-qPCR）技术检测组织中miR-429及Bmi-1 mRNA的表达水平，并分析二者之间的关系及其与患者临床病理指标之间的关系。结果：DLBCL组织中miR-429表达水平较正常淋巴结组织明显降低，而Bmi-1 mRNA的表达水平明显升高（P < 0.01）。miR-429低表达组和Bmi-1 mRNA高表达组患者临床分期、骨髓浸润程度、Ki-67阳性率和IPI积分均分别高于miR-429高表达组和Bmi-1 mRNA低表达组（P < 0.05）。结论：DLBCL组织中miR-429及Bmi-1 mRNA的表达水平与患者病情进展和预后密切相关。组织中低表达miR-429及高表达Bmi-1 mRNA可能是患者临床预后较差的预测指标。     

MiR-429及Bmi-1 mRNA在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及其临床意义

目的:研究mi R-429和Bmi-1 m RNA在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中的表达及其临床意义。方法:选取自2014年1月-2015年12月河北医科大学第四医院的45例DLBCL患者瘤组织和28例正常对照人群淋巴结组织,用实时荧光定量反转录PCR(RT-q PCR)技术检测组织中mi R-429及Bmi-1 mRNA的表达水平,并分析二者之间的关系及其与患者临床病理指标之间的关系。结果:DLBCL组织中mi R-429表达水平较正常淋巴结组织明显降低,而Bmi-1 mRNA的表达水平明显升高(P<0.01)。mi R-429低表达组和Bmi-1 mRNA高表达组患者临床分期、骨髓浸润程度、Ki-67阳性率和IPI积分均分别高于miR-429高表达组和Bmi-1 m RNA低表达组(P<0.05)。结论:DLBCL组织中mi R-429及Bmi-1 mRNA的表达水平与患者病情进展和预后密切相关。组织中低表达miR-429及高表达Bmi-1 mRNA可能是患者临床预后较差的预测指标。     

RNA干扰HMGB1基因对食管鳞癌细胞X线照射后增殖与迁移能力影响

目的 RNAi技术干扰人食管鳞癌细胞中HMGB1基因表达,观察X线照射后细胞增殖活性、迁移和存活能力及细胞周期分布。方法 RT-PCR和Western blot法检测HMGB1 mRNA和蛋白表达;分别采用MTS和Transwell方法检测食管鳞癌细胞ECA109、KYSE30细胞增殖活性和迁移能力;克隆形成实验检测各组细胞的存活能力;流式细胞术检测照射后各组的细胞周期分布。结果 照射组ECA109、KYSE30细胞中HMGB1 mRNA和蛋白表达水平较未照射组明显增加(P<0.05),且存在剂量-效应和时间-效应关系;MTS结果显示食管鳞癌细胞的增殖水平在照射后不同时间点均明显降低(P<0.01);HMGB1沉默组细胞中HMGB1 mRNA和蛋白的表达均明显低于对照组和NC组(P<0.01);克隆形成实验结果显示HMGB1表达降低后,肿瘤细胞的放射敏感性明显增加(P<0.01);Tanswell侵袭小室模型检测显示照射后4 h沉默组穿膜细胞数明显降低(P<0.01),且沉默组G0/G1期比例明显高于对照组和NC组,S期比例显著低于其他组,照射后这种趋势更明显(P<0.01)。结论 RNAi干扰技术降低食管鳞癌细胞中HMGB1的表达,降低了细胞增殖和迁移能力,通过诱导照射后G0/G1期阻滞增加了放射敏感性。     

沉默FAM83D基因调控上皮-间质转化对食管鳞癌放射敏感性影响

目的 探讨沉默FAM83D对X线照射后食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖、存活能力及侵袭、迁移能力的影响及机制。方法 采用免疫组化法检测 69例ESCC患者组织中FAM83D、E-cadherin、vimentin的表达。免疫印迹法检测ECA109、KYSE30细胞FAM83D基因沉默效果。MTS、克隆形成实验和Transwell方法检测ECA109、KYSE30细胞增殖活性、存活能力及侵袭能力。流式细胞术和免疫印迹法检测ECA109、KYSE30细胞凋亡分布、上皮-间质转化(EMT)及凋亡相关蛋白表达。结果 ESCC组织中55%(38/69) FAM83D强表达,36%(25/69) E-cadherin强表达,61%(42/69) vimentin强表达;FAM83D强表达与E-cadherin强表达呈负相关(r=-0.350,P<0.01),与vimentin强表达呈正相关(r=0.470,P<0.01)。ECA109、KYSE30细胞沉默FAM83D后降低了FAM83D蛋白表达(P<0.01)。MTS和克隆形成实验数据显示照射后沉默FAM83D显著抑制了ECA109、KYSE30细胞增殖水平(P<0.05)、增加了放射敏感性(P<0.01)。照射后FAM83D shRNA组ECA109、KYSE30细胞侵袭力降低(P<0.01)、E-cadherin表达增加,而N-cadherin、vimentin、Snail、p-Akt、p-GSK-3β表达降低(P<0.01)。照射后FAM83D shRNA组ECA109、KYSE30细胞凋亡率明显增加(P<0.01),同时Bcl-2、Mcl-1表达下调,Cleaved caspase-3的表达上调(P<0.01)。结论 FAM83D与ESCC的侵袭发展密切相关。沉默ECA109、KYSE30细胞FAM83D表达联合X线照射降低了其增殖、侵袭和存活能力,诱导了细胞凋亡,增加了放射敏感性,该作用可能通过Snail/Akt/GSK-3β信号途径来调控EMT。     

RNF2和PCNA在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的：探讨多梳基因家族成员环指蛋白2（RNF2）和增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白在食管癌组织中的表达及其临床意义。方法：应用免疫组化法检测64例食管癌患者癌组织、30例癌旁正常组织中RNF2和PCNA蛋白的表达情况,分析其与临床病理指标及预后的关系。随访并分析RNF2阳性表达与食管癌患者术后5年存活率的关系。结果：RNF2和PCNA蛋白在肿瘤组织中均高表达,RNF2在癌组织和癌旁组织中的阳性表达率分别为54.69%（35/64）和30.00%（9/30）,差异有统计学意义（χ²=5.000,P < 0.05）;PCNA在癌组织和癌旁组织中的阳性表达率分别为60.94%（39/64）和46.67%（14/30）,差异有统计学意义（χ²=6.237,P < 0.05）;2种蛋白的阳性表达均与食管癌的肿瘤大小、TNM分期和淋巴结转移有关（P < 0.05）,而与患者年龄、性别、分化程度无关（P > 0.05）;食管癌组织中PCNA蛋白表达与RNF2蛋白表达具有正相关关系（r=0.494,P < 0.01）。5年总生存期分析结果显示RNF2阳性表达者的生存时间更短（P < 0.01）。结论：RNF2和PCNA与食管癌的发生发展密切相关,且二者在食管癌发生发展中具有协同作用。     

HMGB1对食管癌患者预后生存及裸鼠移植瘤放射敏感性的影响

目的探讨肿瘤组织标本中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达水平与食管鳞癌患者接受放化疗后预后生存的关系以及对裸鼠移植瘤放射敏感性的影响。方法收集接受放化疗的食管鳞癌患者90例, 取其内镜活检组织标本, 免疫组织化学检测HMGB1蛋白表达水平, 以细胞核染色阳性细胞比例50%为界, 分为高表达组(48例)和低表达组(42例), 并对其生存信息进行回顾性统计分析。构建HMGB1低表达食管鳞癌ECA109细胞株, 建立裸鼠移植瘤模型, 放射线照射后记录肿瘤体积变化和重量, 检测凋亡水平。通过Kaplan-Meier方法进行生存分析, log-rank法单因素预后分析, 通过方差分析比较不同实验组数据之间的差异。结果 HMGB1表达水平与肿瘤体积、肿瘤最长径、T分期、远处转移显著相关(χ2=9.663、5.625、4.068、7.146, P值均<0.05), 并且HMGB1低表达患者的总生存(OS)(χ2=4.826, P=0.028)、无进展生存(PFS)(χ2=4.390, P=0.036)均优于高表达患者。进一步对HMGB1高表达患者进行分析发现, 放化联合治疗、照射剂量对患者O...     

RNA干扰HMGB1基因对食管鳞癌细胞X线照射后增殖与迁移能力影响

目的 RNAi技术干扰人食管鳞癌细胞中HMGB1基因表达,观察X线照射后细胞增殖活性、迁移和存活能力及细胞周期分布。方法 RT-PCR和Western blot法检测HMGB1 mRNA和蛋白表达;分别采用MTS和Transwell方法检测食管鳞癌细胞ECA109、KYSE30细胞增殖活性和迁移能力;克隆形成实验检测各组细胞的存活能力;流式细胞术检测照射后各组的细胞周期分布。结果 照射组ECA109、KYSE30细胞中HMGB1 mRNA和蛋白表达水平较未照射组明显增加(P<0.05),且存在剂量-效应和时间-效应关系;MTS结果显示食管鳞癌细胞的增殖水平在照射后不同时间点均明显降低(P<0.01);HMGB1沉默组细胞中HMGB1 mRNA和蛋白的表达均明显低于对照组和NC组(P<0.01);克隆形成实验结果显示HMGB1表达降低后,肿瘤细胞的放射敏感性明显增加(P<0.01);Tanswell侵袭小室模型检测显示照射后4 h沉默组穿膜细胞数明显降低(P<0.01),且沉默组G0/G1期比例明显高于对照组和NC组,S期比例显著低于其他组,照射后这种趋势更明显(P<0.01)。结论 RNAi干扰技术降低食管鳞癌细胞中HMGB1的表达,降低了细胞增殖和迁移能力,通过诱导照射后G0/G1期阻滞增加了放射敏感性。     

干扰HMGB1基因表达对食管鳞癌细胞侵袭迁移及放射敏感性的影响

目的：探讨干扰HMGB1基因对X线照射后食管鳞癌细胞增殖活性、存活能力及侵袭、迁移能力的影响及其机制。方法：构建含有HMGB1 shRNA的慢病毒载体并转染人食管鳞癌EC9706细胞（HMGB1 shRNA组）,并以转染阴性序列的细胞为对照组,两组均设置X射线照射和未照射2个亚组。采用Western blot法评估HMGB1基因的干扰效果;MTS法和集落形成实验分别检测食管鳞癌EC9706细胞的增殖活性和存活能力;划痕实验和Transwell小室实验分别检测干扰HMGB1基因对EC9706细胞迁移和侵袭能力的影响;流式细胞术和Western blot分别检测照射后各组的细胞凋亡率及上皮间质转化（EMT）相关蛋白的表达。结果：与阴性对照组比较,Western blot结果显示干扰HMGB1基因明显降低了HMGB1蛋白的表达（P < 0.01）,MTS法检测结果显示X射线照射后干扰HMGB1显著抑制了食管鳞癌细胞的增殖水平（P < 0.05）,集落形成实验结果显示HMGB1 shRNA组细胞的放射敏感性明显增加（P < 0.01）。划痕实验结果显示,X射线照射后HMGB1 shRNA组细胞24 h的划痕愈合率为（20.78±4.38）%,低于阴性对照组的（39.02±3.25）%（P < 0.01）。Transwell实验结果显示X射线照射后HMGB1 shRNA组细胞在3.5 h的迁移细胞数为（67.00±16.56）个,低于阴性对照组的（194.00±19.74）个（P < 0.01）。流式细胞术结果显示,X射线照射后阴性对照组细胞凋亡率为（13.64±1.24）%,HMGB1shRNA组细胞凋亡率为（20.67±1.38）%;与阴性对照组比较,X射线照射后HMGB1 shRNA组细胞E-cadherin表达显著增加,而Ncadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9的表达明显降低（均为P < 0.01）。结论：干扰食管鳞癌细胞中HMGB1基因的表达后经X射线照射,降低了肿瘤细胞的增殖、侵袭、迁移水平和存活能力,诱导了细胞凋亡,增加了放射敏感性,并调控EMT相关蛋白的表达。