40例乙型肝炎患者HBV逆转录酶基因耐药突变分析与表达载体构建

目的 分析40例慢性乙型肝炎患者血清中HBV逆转录酶区基因耐药相关突变,构建突变基因重组表达载体用于表型耐药分析.方法 从服用抗HBV核苷(酸)类似物的患者血清中提取病毒DNA,PCR扩增HBV RT全长基因,克隆到pGEM-Teasy载体中,随机挑选3～5个克隆进行DNA序列测定,以DNASTAR软件分析RT基因内与核苷(酸)类似物耐药相关的常见突变位点.用Xho Ⅰ和Nco Ⅰ双酶切pGEM-Teasy-RT及pTriEx-HBV(C)构建1.1表达载体,测序正确后转染Huh7细胞,检测HBsAg和HBeAg表达水平.结果 40例患者均分别检出拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦耐药相关的单一或联合突变;成功克隆了96条HBV RT基因,分别带有上述核苷(酸)类似物耐药相关变异的序列;挑选主要突变组合形式的40条RT基因构建pTriEx-HBV(C)1.1表达载体,转染Huh7细胞48 h后在培养上清中检测到HBsAg和HBeAg,表明表达载体构建成功.结论 本研究成功进行了临床患者HBV耐药相关突变分析与突变体重组表达载体构建,为进行表型耐药分析打下了基础.     

女性排尿行为信念量表在女性护士中的验证性因素分析

目的验证女性排尿行为信念量表的结构并分析其组合信度。方法 2011年10-12月,采用方便抽样法选取济南市3所三级甲等医院女性护士401名,使用女性排尿行为信念量表进行问卷调查。结果女性排尿行为信念量表的模型拟合指数为:χ2=420.393,df=234,拟合优度指数(goodness of fit index,GFI)=0.919,规范拟合指数(normed fit index,NFI)=0.912,增值拟合指数(incremental fit index,IFI)=0.959,比较拟合指数(comparative fit index,CFI)=0.959,近似误差的均方根(root mean square error of approximation,RMSEA)=0.045;所有条目的因素负荷均在0.35以上;5个维度的组合信度分别为:0.744,0.915,0.846,0.805,0.633,所有指标均在可接受范围。结论女性排尿行为信念量表在女性护士群体中具有良好的结构效度和组合信度,可以用于进一步的相关研究。     

药物安全隐患分析及防范措施

护理质量是衡量医院服务水平的重要指标,要提高护理质量,必须找出护理工作中的不安全因素及其发生原因,制订防范措施.分析护理安全隐患的原因,减少差错发生,是护理人员面临的严峻课题[1].药物安全是护理安全的重要组成部分,护士每天都要接触多种药物,存在安全隐患.为了杜绝因药物引起的安全事件,因此对药物安全隐患进行分析并制订防范措施.     

乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒对FAP48信号转导的影响

0 引言作为一种分子量为48 kD蛋白,PAP48是细胞内与免疫调节有密切关系的蛋白类型.虽然 FAP48是在研究免疫抑制剂的作用机制中发现的,但是 FAP48蛋白在免疫调节及临床疾病的发生、发展过程中具有十分重要的作用.乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)感染容易形成慢性肝炎,病毒与免疫系统的相互作用     

基因芯片技术在肝炎病毒研究中的应用

0 引言基因芯片(gene chip)也称为DNA微距阵(DNA microarray)、DNA芯片(DNA chip)等,是近年发展起来的一项前沿生物技术。他是指将大量靶基因或寡核苷酸片段有序地高密度地排列固定于玻片、硅片等固相载体上,然后与待测的标记样品的基因按碱基互补配对原理进行杂交,通过激光共聚焦荧光检测系统等对芯片进行扫描,再经计算机软件处理,从而获取大量生命信息。该技术可以将极其大量的探针同时固定于支持物上,所以一次可以对大量的生物分子进行检测分析,从而解决了传统核酸     

新基因TAHCCP1编码蛋白对NS3TP6基因启动子转录活性的调节

目的探讨丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白反式激活基因TAHCCP1编码蛋白对NS3TP6启动子转录活性的调节。方法以我室前期克隆的TAHCCP1基因表达谱芯片结果为基础,利用生物信息学方法确定NS3TP6基因的启动子区域（NS3TP6-p）,聚合酶链反应（PCR）扩增并克隆至真核报告载体pCAT3-basic中,构建重组报告质粒pCAT3-NS3TP6-p;以该质粒单独或与pcDNA3．1（-）-TAHCCP1共转染肝癌细胞系HepG2细胞,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测氯霉素乙酰转移酶（CAT）的表达活性;观察细胞中表达的TAHCCP1蛋白对NS3TP6启动子转录活性的调节。结果构建的重组表达载体pCAT3-NS3TP6-P在HepG2细胞中能够启动报告基因CAT表达,表明克隆的NS3TP6启动子有指导下游基因转录表达的活性;共转染实验中pCAT3-NS3TP6-p与pcDNA3．1（-）-TAHCCP1组CAT的表达活性是对照组的3．1倍,说明TAHCCP1蛋白能够在转录水平反式激活NS3TP6基因启动子活性。结论本实验验证了基因芯片的实验结果准确性,进一步完善了新基因TAHCCP1的生物学功能,为深入理解HCV核心蛋白的反式激活调节机制提供了新的依据。