微囊化大鼠胰岛异种移植于糖尿病小鼠的实验观察

观察海藻酸钠－聚赖氨酸－海藻酸钠微胶囊对异种胰岛组织移植的免疫隔离作用。方法采用ＳＵＮ氏ＡＰＡ微胶囊技术包裹大鼠胰岛细胞团,移植于链脲霉素诱发的糖尿病模型小鼠腹腔。     

微囊化牛肾上腺嗜铬细胞植入偏侧帕金森病样猴脑的长期效应：行为和组织学观察

目的 了解微囊化牛肾上腺嗜铬细胞(APA-BCC)脑内移植对纠正偏侧帕金森病(PD)样猴异常行为的长期效应和脑组织学变化。方法 观察6只右侧脑尾状核及壳核接受了APA微囊、BCC或APA-BCC植入的PD样猴的行为变化及移植后14个月，28个月的脑组织形态学改变。结果 (1)植入空微囊28个月猴的PD样症状始终无改善；植入APA-BCC或BCC的PD猴，3d后其PD症状开始得到明显改善；植入BCC的改善效应持续1个月或2个月；3只植入APA-BCC的PD猴的行为改善效应持续时间明显长于BCC组，分别超过14个月，28个月和48个月。(2)猴脑组织学观察显示植入APA-BCC后行为改善良好的PD样猴脑移植区内存在大量形态完整的微囊，囊内可见存活的BCC，移植区周边纹状体内TH阳性纤维密度明显高于对侧；行为改善持续时间短的猴脑内未见完整微囊及存活的BCC；植入BCC的猴脑内未见存活的BCC，见局灶瘢痕样组织反应；植入空微囊的猴脑组织内存在微囊。结论 植入PD样猴脑内的APA-BCC 28个月时仍完好存在并可纠正异常行为，周围组织反应轻微。     

磷脂酶A2抑制剂对内毒素诱导巨噬细胞释放肿瘤坏死因子的影响

磷脂酶Ａ２抑制剂对内毒素诱导巨噬细胞释放肿瘤坏死因子的影响崔忻１郝秀华２颜光涛２关键词磷脂酶Ａ类；巨噬细胞；内毒素；肿瘤坏死因子中国图书资料分类法分类号Ｒ３９２．１１材料和方法１．１材料巨噬细胞由小白鼠腹腔渗出液中分离获得。实验动物：小白鼠２６只，雌...     

分泌人肿瘤坏死因子α的基因工程细胞系的建立

目的：建立稳定的基因工程细胞系。方法：将含有人肿瘤坏死因子α（hTNFα）全长cDNA插入表达载体pSNAV2．0，产生重组质粒pSNAV2．0-TNFα，利用阳离子脂质体介导将其转染到人HEK-293细胞中，G418筛选阳性克隆hTNF／293，采用Western blot检测转染细胞上清中hTNF蛋白的表达。结果：通过Sal Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切、PCR及测序鉴定证明：在质粒pSNAV2．0中插入片段正确。采用RT—PCR和Western blot法检测表明HEK-293细胞培养上清中有hTNFα蛋白表达，分子量为17KDa。结论：成功构建重组质粒pSNAV2．0-TNFα，真核表达载体构建正确，转染HEK-293细胞后可有效分泌hTNFα蛋白，并能分泌到细胞外。     

培养微囊化牛肾上腺嗜铬细胞分泌镇痛物质能力的实验研究

目的：了解培养的海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊化牛肾上腺嗜铬细胞(BCCs)的儿茶酚胺(CA)和亮氨酸脑啡肽(L-EK)的分泌状态。方法：在非囊化BCCs与囊化BCCs(APA-BCCs)的孵育液中加或不加尼古丁，用高效液相色谱-电化学法检测孵育液中去甲肾上腺素和肾上腺素的含量、用放射免疫法检测孵育液中L-EK的含量。结果：培养1，3，5，7，9和11d时，在非刺激条件下，APA-BCCs与BCCs均能稳定地分泌CA和L-EK；尼古丁刺激时可显著增加BCCs和APA-BCCs分泌CA和L-EK的水平(P&;lt;0．05)；APA-BCCs与BCCs的基础及刺激分泌水平差异无显著性意义。结论：体外培养的BCCs及APA微囊化BCCs均具有儿茶酚胺类和脑啡肽类的基础及刺激分泌功能。     

转染SV40永生化基因对正常成人肝细胞生长特性的影响

背景:生物型人工肝采用猪肝细胞或肝癌细胞作为移植物来源存在动物源性疾病和致瘤性的担心,而正常成人肝细胞也具有一定的局限性.目的:通过检测转染前、后正常成人肝细胞的活率、生长曲线和细胞周期的变化,了解转染SV40永生化基因对正常成人肝细胞生长特性的影响.方法:培养不同时间的正常人肝细胞和永生化正常成人肝细胞,采用胎盘蓝染色和AO-PI染色,于培养后1～8 d采用MTT染色法计数细胞活率;用MTT比色法测定细胞的A值并绘制生长曲线;采用流式细胞术检测细胞的生长周期.结果与结论:3种染色法检测显示两种细胞的活率为95%～99%,存活率无明显差异.转染前、后的两种正常成人肝细胞的生长曲线无明显差异,均在培养3～5 d时呈指数型生长,但转染后正常成人肝细胞较转染前增殖略快.采用流式细胞术测得的两种肝细胞的细胞周期:转染后肝细胞S期细胞占65.64%,G_0～G_1期细胞占34.36%,G_2期细胞占0%;转染前肝细胞S期占21.27%,G_0～G_1期细胞占62.64%,G2期细胞占12.09%,提示转染后肝细胞的S期细胞明显增多,增殖能力增强.转染SV40永生化基因的正常成人肝细胞较转染前细胞的增殖活力增高,存活率无明显差异,提示转染后细胞增殖能力更强.     

Chiari畸形I型合并脊髓空洞患者的远红外热像特征分析

医用远红外热像是一门新兴的无辐射、非侵袭、低费用的功能影像学技术，它利用人体可向外界发射出红外热辐射信号的特征，经采集后，以伪色彩显示温度值，快速检测和定位皮肤温度增高或降低，进而分析相关疾病，对诊断和治疗提供客观的依据。本研究旨在探讨Chiari畸形I型（ChiarimalformationtypeI，CMI）合并脊髓空洞患者的远红外热像规律，分析其在该疾病的临床应用价值。     

携带SV40T/HSV-tk基因永生化正常成人肝细胞的构建

目的构建永生化正常成人肝细胞为生物型人工肝提供安全有效的人肝细胞源。方法转染包装细胞,获得逆转录病毒;将该病毒感染正常成人肝细胞HL-7702;更昔洛韦毒性实验检测转染后肝细胞内HSV-tk基因;RT-PCR法检测转染后细胞内SV40T的mRNA;Western Blot法和免疫荧光染色检测转染后细胞内SV40T基因的蛋白表达。结果更昔洛韦检测转染后的肝细胞存活良好,而转染前的肝细胞死亡。RT-PCR法显示转染后的肝细胞内存在SV40T mRNA;Western Blot法和免疫荧光染色法显示转染后肝细胞内存在SV40T蛋白。结论转染后的正常成人肝细胞中含有SV40T和HSV-tk基因,并表达相关蛋白。     

微囊化牛肾上腺嗜铬细胞异种移植治疗19例癌痛病人的初步观察

目的 :观察海藻酸钠 -聚赖氨酸 -海藻酸钠 (ＡＰＡ)微囊化牛肾上腺嗜铬细胞 (ＢＣＣ)异种移植对慢性癌痛病人的镇痛效应、作用持续时间及不良反应。方法 :用胶原酶加机械法消化分离ＢＣＣ ;用Ｓｕｎ氏微囊制作法将ＢＣＣ包裹于ＡＰＡ微囊内。用台盼蓝、单胺 (ＳＰＧ)组织荧光法及ＴＨ免疫组化染色法 ,观察ＢＣＣ的存活率及钝度。局麻下将 5ｍＬ微囊化ＢＣＣ悬液 (约 5～ 7× 1 0 6)缓慢注入 1 9例需长期使用止痛药物的中、晚期恶性肿瘤患者Ｌ3～ 5蛛网膜下。移植后观察病人疼痛的缓解程度 ,止痛作用持续时间及不良反应。结果 :( 1 )ＢＣＣ的…     

骨形态发生蛋白4对大鼠脑神经干细胞的胆碱能诱导分化效应

观察了骨形态发生蛋白4(BMP4)对原代分离培养的大鼠脑神经干细胞(NSC)的胆碱能诱导分化效应.将从2个月龄大鼠脑海马、纹状体等区域分离的细胞培养于含EGF和bFGF的DMEM/F12培养液中, 在光镜下观察细胞的形态特征, 并行神经巢蛋白(nestin)细胞化学染色.24h后, 改换成含有BMP4的培养液, 继续培养7或8天.在光镜下观察细胞的形态变化, 并行胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase, ChAT)和nestin双标免疫细胞化学染色.结果表明, 加BMP4继续培养7或8天后,光镜下见有34%的培养细胞具有神经元的形态特征.用免疫细胞化学染色可见ChAT阳性的细胞与nestin阳性的细胞共存,其中ChAT阳性细胞占28%, nestin阳性细胞占38%.总之, 在培养液中加入BMP4, 可以诱导NSC分化成具有胆碱能特性的细胞.