肝细胞生长因子对人脐带间充质干细胞增殖、黏附及迁移影响的体外研究

目的：探讨肝细胞生长因子( HGF)对人脐带间充质干细胞( hUCMSCs)增殖、黏附及迁移能力的影响。方法按照不同腺病毒感染 hUCMSCs 分为实验组( Ad-GFP-HGF )和对照组( Ad-GFP )。以最佳感染复数转染hUCMSCs,观察细胞形态变化以及GFP蛋白的表达。比较各组细胞增殖能力、黏附能力及迁移能力。 Western Bolt检测各组细胞HGF的表达水平。结果对照组和实验组均出现了GFP的表达,实验组hUCMSCs的增殖、黏附及迁移能力均较对照组增强(P<0．05)。实验组细胞HGF的表达水平显著高于对照组(P<0．05)。结论 HGF的高表达能明显促进hUCMSCs的增殖、黏附和迁移。     

携带LMO3基因逆转录病毒载体的构建及其在NIH/3T3细胞中的表达

目的构建单纯LIM蛋白3(LMO3)的逆转录表达载体,并观察其在NIH/3T3细胞中的表达情况。方法重组载体pLXSN-LMO3经酶切及测序鉴定后,脂质体法转染到pA317包装细胞,G418筛选稳定的病毒产生细胞株。重组逆转录病毒体外感染NIH/3T3,并对其进行病毒滴度检测,NIH/3T3细胞分为3组:以pLXSN-LMO3转染为实验组,以pLXSN转染为阴性对照组,正常细胞为空白对照组。采用免疫荧光组化染色和蛋白印迹(Western blot)法鉴定NIH/3T3细胞中LMO3的表达。结果重组逆转录病毒载体pLXSN-LMO3经酶切及测序鉴定构建正确,其病毒滴度平均可达4.04×106cfu/ml,各组NIH/3T3细胞免疫荧光组化染色及Western blot检测均有LMO3蛋白表达,其中实验组高表达LMO3,与阴性对照组、空白对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了携带LMO3基因逆转录病毒载体,并能在NIH/3T3细胞中高表达LMO3蛋白,为下一步开展基因治疗奠定了基础。     

先天性白内障小鼠模型与正常小鼠不同发育阶段几种晶状体蛋白质初步比较研究

目的了解先天性白内障小鼠模型与正常小鼠不同发育阶段晶状体蛋白质的差异。方法 ELISA定量检测晶状体蛋白,采用同重同位素相对与绝对定量检测(i TRAQ)。结果随日龄的增长念珠(串珠)状纤维结构蛋白(BFSP1)含量逐渐下降,且白内障小鼠晶状体内的含量低于正常小鼠;随日龄的增长βB2晶状体蛋白含量逐渐上升,且在白内障小鼠晶状体内含量高于正常小鼠。结论不同年龄先天性白内障小鼠与正常小鼠晶状体蛋白质含量差异明显。     

杭州市富阳区住院腹泻患者艰难梭菌感染及菌株分子特征分析

目的了解浙江省杭州市富阳地区住院腹泻患者艰难梭菌感染情况,研究感染患者临床危险因素及分离菌株的分子特征。方法收集2017年5月至2018年2月就诊于第一人民医院的228例腹泻患者的粪便标本,通过厌氧培养进行艰难梭菌菌株分离和鉴定,进行多位点序列基因分型,以琼脂稀释法测定菌株耐药性,对患者临床资料进行统计分析。结果228份标本共检测出产毒型艰难梭菌41株,其中31株为医院获得性腹泻;阳性患者平均年龄67.8岁,主要来自消化内科（34.1%）和肾内科（19.5%）。 ST2、ST3和ST54为主要基因型。 所有菌株对万古霉素、甲硝唑、四环素、哌拉西林敏感。 临床资料统计分析显示,＞60周岁、患基础性疾病和有抗生素用药史的阳性患者数量远高于阴性患者比例（χ2＝4.229、9.022、5.767,P＝0.023、0.001、0.009）。结论杭州市富阳区住院腹泻患者艰难梭菌感染患者主要来源于院内感染。 患有基础性疾病、8周内有抗生素用药史的老年患者为感染的危险因素;在院内感染防控中需进一步加强监测。     

多重荧光定量PCR甄别3种霍乱弧菌相关毒素基因

目的为了判定霍乱弧菌是否携带相关毒力因子,研发一种快速、准确、特异检测霍乱弧菌3种毒素基因的多重荧光定量PCR方法。方法针对霍乱弧菌ctxA、ace、zot基因设计引物和探针,建立PCR体系,对70株霍乱弧菌分离株进行鉴定,采用直接测序方法对鉴定结果进行验证。结果建立的多重实时荧光定量PCR方法可同时准确、特异地鉴定霍乱弧菌菌体携带的3种毒素基因,不携带毒素基因的菌株均未出现阳性检测结果。菌体检测的最低检出限度ctxA基因：102 CFU/mL,ace基因和zot基因：10CFU/mL。构建了3种毒素相关基因阳性质粒,ace基因和zot基因的最低检出限度为10copies/μL,ctxA基因的最低检出限度为102 copies/μL,定量检测批间和批内的变异系数均小于5%;对70株霍乱弧菌分离株进行评价,结果显示其中40株（57.2%）携带ctxA毒素基因、31株（44.3%）携带ace毒素基因、46株（65.7%）携带zot毒素基因,通过测序方法验证,符合率达到100%。结论本文建立的多重实时荧光定量PCR方法操作简便、特异性好、灵敏度高,为霍乱弧菌的现场流行病学调查和疫情监测提供了快速、可靠的鉴定工具。     

食管心房起搏中房室旁束及房室交接区不同比率的文克白周期

食管心房起搏中房室旁束及房室交接区不同比率的文克白周期代自力１罗芸１任洁２患者男，４６岁，临床诊断：心悸待查。常规心电图（见图１上、中行）示窦性心律，Ｐ－Ｒ间期８０ｍｓ，ＱＲＳ波时限１２０ｍｓ，有预激波，在Ｖ１向下，Ｖ５向上，心电图诊断：Ｂ型预激综合...     

阿托伐他汀钙对EA.hy926细胞全基因表达谱的影响及生物信息学分析

目的探讨阿托伐他汀钙对体外培养人脐静脉内皮细胞EA.hy926细胞基因表达谱的影响及作用的分子机制。方法取EA.hy926细胞分实验组和对照组,实验组采用10μmol/L阿托伐他汀钙体外干预人脐静脉内皮细胞EA.hy926 24h,用Affymetrix HG-U133plus 2.0全基因组表达芯片检测阿托伐他汀钙对EA.hy926细胞基因表达谱的影响。并运用基因富集分析(GSEA)软件、DAVID基因功能聚类分析软件及Cmap数据库对芯片数据进行分析,对相关靶基因进行实时定量PCR验证。结果与对照组比较,实验组基因芯片分析筛选出差异表达倍数>2倍的基因649个,其中上调基因295个,下调基因354个。经DAVID及GSEA基因富集分析显示,阿托伐他汀钙广泛下调了细胞周期调控相关基因,上调了Kruppel样转录因子等血管保护基因,Cmap数据库分析显示,阿托伐他汀钙与组蛋白去乙酰化酶抑制剂及白藜芦醇呈正相关的联强度高。结论阿托伐他汀钙从多角度发挥抗动脉粥样硬化作用,作用机制可能与组蛋白去乙酰化酶抑制剂及白藜芦醇相似。     

艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的表达及抗原性分析

目的：构建艰难梭菌（CD）谷氨酸脱氢酶（GDH）的原核表达载体,表达重组蛋白并鉴定其抗原活性。方法以 CD 的 ATCC43255菌株基因组 DNA 为模板,通过 PCR 法扩增 GDH 全长基因片段,构建原核表达载体并转化到大肠杆菌中,IPTG 诱导表达 GDH 蛋白,并用 Ni 柱进行纯化。利用 CD 抗原检测试剂盒对 GDH 抗原区段的抗原性进行鉴定。结果构建的原核表达载体 pET-28a／GDH 可在大肠杆菌中成功表达,获得的 GDH 抗原能与相应抗体产生特异性反应。结论原核表达的 CD 的 GDH 抗原具有很好的抗原活性,为进一步制备相应抗体并建立CD 的 GDH 抗原的免疫检测方法奠定了基础。