5种乳腺癌相关指标血清检测的临床价值分析

目的了解hMAM、NF-κB、CA153、OPN和MMP-13 5种血清指标诊断乳腺癌的临床价值。方法 ELISA法检测hMAM、NF-κB、OPN和MMP-13,雅培i2000全自动发光仪检测CA153,比较乳腺癌组(59例)和正常对照组(35例)外周血中5种指标的表达特点,验证其临床价值。结果与正常对照组比较,hMAM、NF-κB、CA153和OPN在乳腺癌中高表达,且差异有统计学意义;对乳腺癌的诊断价值,从高到低分别为:hMAM、NF-κB、CA153和OPN。不同病理分期中,CA153和OPN在乳腺癌晚期显著升高。结论 hMAM、NF-κB、CA153和OPN对乳腺癌诊断具有一定的价值,其中hMAM更好;当CA153和OPN明显升高,可能提示乳腺已进入中晚期。     

ICR小鼠骨髓间充质干细胞分离及生物学特性的探讨

目的 探讨分离、培养的ICR(Institute of Cancer Research,ICR)小鼠骨髓间充质干细胞(mouse bone marrow mesenchymal stem cells,mBM-MSCs)的细胞生物学特性。方法 取6~8周龄ICR小鼠,利用全骨髓反复贴壁和有限稀释培养法分离纯化mBM-MSCs,观察形态特点,测定生长曲线和活力,利用流式细胞仪分析细胞的周期和鉴定表面抗原,诱导其向成骨、软骨及脂肪细胞分化,采用染色法鉴定。结果 新分离的mBM-MSCs多呈小圆形,形态规整。培养传代后,细胞多变为梭形,大小较均匀,形态较一致。随着传代的次数增加,细胞的生长曲线、活力及周期呈现快速发育期、平台期和缓慢期;流式结果细胞CD44、CD73、SCA-1呈阳性反应,部分细胞CD90、CD105、STRO-1呈阳性反应,CD11b和CD45呈阴性反应;诱导分化为成骨细胞后其碱性磷酸酶、茜素红和Von Kossa银染色均呈阳性反应,分化成脂肪细胞后油红O染色呈阳性反应,分化成软骨细胞后阿尔新蓝染色呈阳性反应。结论 ICR小鼠骨髓中分离培养出的MSCs,生物学特点鲜明,适于做进一步研究。     

人乳房珠蛋白外周血表达RT-PCR检测及乳腺癌诊治应用

目的建立灵敏外周血人乳房珠蛋白(hMAM)表达 RT-PCR 检测方法,探索 hMAM 在乳腺癌诊治中的应用价值。方法分离受检者外周血单个核细胞,TRIZOL 液提取总 RNA,作 RT-PCR,并查β-actin 监控;确认的 cDNA 先作普通PCR 扩增,再作荧光定量 PCR 扩增。结果 64例标本有63例确认转录为 cDNA,其中乳腺癌43例、良性乳腺肿瘤和正常对照各10例。经普通 PCR 后再作荧光定量 PCR,乳腺癌 hMAM 表达阳性率为53.3%,与良性乳腺肿瘤和正常对照间阳性率有显著差异(P<0.05);而不作普通 PCR 的 cDNA 直接行荧光定量 PCR,结果无阳性。淋巴结转移较未转移,hMAM 表达阳性率有极显著差异(P<0.01)。结论外周血 hMAM 表达是乳腺癌细胞微转移的特异指标;单次 PCR 法的灵敏度不够,二次 PCR 可明显提高灵敏度,并一次普通 PCR 加一次荧光定量 PCR 的组合效果更理想。外周血 hMAM 表达可能是监测淋巴结转移较好指标。     

人乳头瘤病毒16、18型分子流行病学及新株筛查

目的建立浙江省绍兴地区性传播入乳头瘤病毒(HPV)16、18型的分子流行病学资料,并寻找本地区HPV流行变异株.方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增HPV公共型、HPV16型和HPV18型的特异性片段并对这些片段进行克隆和测序分析.结果本地区HPV16和HPV18型感染率占总HPV中的10.5%;HPV16型的感染率高于HPV18型,差异有显著性(P＜0.05);女性中有26例(9.4%)为无症状感染,其中15.4%是与HPV16、18型相关;20～30岁年龄段组感染率最高;女性感染率高于男性.利用公共型HPV引物(L1区)筛选,获得1株HPV变异株,其序列经国际联网BLAST检索,证实其氨基酸序列与已知HPV间有25%的差异.结论1.本地区HPV16、18型感染率较高;2.在本地区筛查到我们尚未见报道且变异大的HPV株,表明本地区存在尚未被认识的HPV株.     

间歇性和持续性哮喘患者呼出气冷凝液中的白三烯C4、8-异前列腺素与硝酸盐检测的临床意义

目的探讨支气管哮喘（简称哮喘）患者治疗前后呼出气冷凝液（EBC）中白三烯c4（LTC4）、8-异前列腺素（8-ISO）、硝酸盐（NO。）水平及临床意义。方法酶法和比色法对30例哮喘患者EBC中LTC4、8-ISO、NO。进行检测,30例健康者作为对照。结果哮喘患者的LTC4比对照组显著升高（55．17ng／L比17．95ng／L,P〈0．01）,持续期比间歇期组显著升高（67．38ng／L比41．21ng／L,P〈0．01）,持续期比对照组显著升高（67．38ng／L比17．95ng／L,P〈0．01）,间歇期比对照组显著升高（41．21ng／L比17．95ng／L,P〈0．01）,患者组比治疗后组显著升高（55．17ng／L比38．36ng／L,P〈0．01）。哮喘患者的8-ISO比对照组显著升高（13．41ng／L比6．93ng／L,P〈0．01）,持续期组比对照组显著升高（14．29ng／L比6．93ng／L,P〈0．01）,间歇期比对照组显著升高（12．40ng／L比6．93ng／L,P〈0．05）。哮喘患者的NOx比对照组显著升高（4．17ng／L比3．20ng／L,P〈0．01）,持续期组比对照组显著升高（4．50ng／L比3．20ng／L,P〈0．01）。结论LTC4、8-ISO、NOx水平能够很好的体现出哮喘患者的气道炎症水平,而孟鲁斯特药物能够很好的控制气道炎症水平,缓解气道炎症。     

Klinefelter综合征伴癫痫及强直性脊柱炎一例

患者 男,19岁,未婚.以“腰背晨僵,反复四肢关节肿痛20天”入院.患者多关节肿胀疼痛,以大关节为主.半年前足跟疼痛,有腰背晨僵现象,活动后好转.自述既往“癫痫”病史2年余,发作时意识丧失,口吐涎沫,四肢抽搐并厉声尖叫,持续约10 min.在外院脑电图检查示“典型尖棘波”,平时服用“德巴金”治疗,发作次数由2010年的4次减少到2011年的1次.     

肺癌患者血清DKK1、CYFRA21-1、SCC、NSE水平及临床意义

目的 探讨肺癌患者血清DKK1、CYFRA21-1、SCC、NSE水平及其临床应用价值.方法 病理确诊的肺部肿瘤患者80例(肺癌70例,肺部良性肿块病例10例),健康体检人员10例.用ELISA试剂盒检测血清标本中DKK1浓度,免疫化学发光法测血清CYFRA21-1、SCC、NSE浓度.计数资料采用χ2检验,组间均数比较采用t检验,ROC曲线评价各指标联合应用的效果.结果 与正常对照组比较,非小细胞肺癌、小细胞癌中DKK1浓度升高,具有统计学意义(P<0.05),而肺部良性肿块组与正常对照组间无意义(P>0.05).肺癌转移组血清DKK1浓度明显高于未转移组,二者有显著意义(P<0.05).肺癌患者术后血清DKK1浓度比术前下降明显(P<0.05).血清DKK1与CYFRA21-1、SCC、NSE联合诊断,可明显提高非小细胞肺癌诊断的敏感性与特异性. 结论 DKK1、CYFRA21-1、SCC、NSE联合诊断对肺癌诊断的价值更高;血清DKK1是肺癌诊断、转移及治疗效果评价的有效指标.     

改良人骨髓间充质干细胞分离方法提高细胞定向分化能力

目的 改良人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)分离方法,提高细胞定向分化能力.方法 用密度梯度离心法从少量人骨髓中分离得到单个核细胞,贴壁培养3天后换液,实验组换液后72h内每隔12h更换新鲜培养液,传代时胰蛋白酶37℃作用2min后终止消化;对照组未经频繁换液,胰蛋白酶消化3min.镜下观察分离细胞的形态变化.用成骨、脂肪和软骨细胞诱导液诱导两组第3代(P3)细胞分化,碱性磷酸酶钙钴染色法、茜素红染色法和Von Kossa银染色法检测成骨细胞分化;油红O染色法检测脂肪细胞分化;阿尔新蓝染色法检测软骨细胞分化.结果 首次换液72h后,实验组与对照组相比,贴壁细胞数量较少但形态均一性高.不同染色结果显示:诱导分化成骨细胞14天时,实验组95%以上细胞分化,对照组为60%～70%;诱导分化脂肪细胞21天时,实验组50%～60%细胞分化,对照组为40%;诱导分化软骨细胞21天时,实验组90%以上细胞分化,对照组为60%～70%.结论 首次换液72h内频繁更换新鲜培养液和传代时缩短胰蛋白酶消化时间的方法能够提高hBM-MSCs的定向分化能力.     

hsa_circ_0006411慢病毒载体的构建及验证

目的 构建环状RNA hsa_circ_0006411慢病毒载体,作为研究其在肺癌细胞的功能学实验的基础。方法 以人细胞混合样本cDNA为模板扩增环状RNA circ_0006411,EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切连接到pLC5-ciR载体中,转化感受态细胞,并测序阳性菌落产物;将得到的pLC5- circ_0006411-GFP载体转染293T细胞,40h后观测GFP的表达,并收集细胞PCR扩增circ_0006411基因,以pLC5-ciR空载体和空白组做对照。结果 测序结果与hsa_circ_0006411序列一致,且环化接头位点也与circbase中的位点一致;pLC5- circ_0006411-GFP载体转染293T细胞组circ_0006411相对表达量明显增高于另外两组,且绿色荧光蛋白表达。结论 成功构建了环状hsa_circ_0006411载体,能稳定转染293T细胞,可用于后续细胞实验。