下肢缺血预处理对未成熟心肌的保护作用及其机制

目的　探讨下肢缺血预处理对未成熟心肌保护作用的机制。方法　采用双下肢缺血预处理 (DLIP)大白兔Langendorff离体心脏灌注模型。分为 4组 ,每组大白兔 6只 :E1组 ,动物麻醉后反复 3次阻断双下肢血流 5min ,松开 5min ,建立模型 ,灌注 15min转为工作心 15min ,全心停灌 45min ,恢复灌注 15min改为工作心 3 0min ;E2组 ,双下肢缺血预处理前静脉注射超氧化物歧化酶至双下肢缺血预处理完毕 ,重复E1组方法 ;E3组 ,静脉注射蛋白激酶C(PKC)阻滞剂多粘菌素B(PMB) ,时间 10min ,重复E1组方法 ;E4组 ,静脉注射ATP敏感性钾通道 (mitoKATP)阻滞剂(5 HD) ,时间 10min ,重复E1组方法。以左室功能恢复、心肌含水量、血清肌酸激酶 (CK )和乳酸脱氢酶 (LDH)漏出率、心肌组织ATP和丙二醛 (MDA)含量、超氧化物歧化酶 (SOD)活性、心肌细胞内Ca2 含量、心肌线粒体钙依赖性ATP酶 (Ca2 ATPase)活性及其Ca2 含量、心肌线粒体合成ATP能力 [ATP] m、超氧阴离子自由基 (O2 -)作为观察指标。结果　E1组左心室功能恢复优于其他各组 (P <0 .0 5 ) ,心肌ATP含量、SOD活性、Ca2 ATPase活性、[ATP] m 均优于其他各组 (P <0 .0 1) ,心肌含水量低于其他各组 (P <0 .0 5 ) ,MDA含量、CK、LDH漏出率、心肌细胞内Ca2 含量、心肌     

高钙预处理对未成熟心肌的保护作用机制

目的 探讨高钙预处理对未成熟心肌保护作用及其可能的机制。方法 采用Langendorff离体心脏灌注模型，24只新生日本长耳大白兔分为对照组（I／R），高钙预处理（HCP）组，多黏菌素B（PMB）组和5-hydroxydecanoate（5-HD）组4组，分别行不同的处理方法。以血流动力学指标、生化指标和心肌超微结构作为观察指标。结果 HCP组心功能恢复优于I／R、PMB和5-HD组（P〈0．05），心肌生化指标优于I／R、PMB和5-HD组（P〈0．01），心肌超微结构损伤较I／R、PMB和5-HD组明显减轻，各指标I／R、PMB和5-HD组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 高Ca^2＋预处理对未成熟心肌具有明显的保护作用，其机制是可能是通过蛋白激酶C激活和线粒体ATP敏感性钾通道开放起作用。     

热休克蛋白70对离体大鼠供心心肌细胞的保护作用

目的探讨热休克蛋白70（HSP70）对离体大鼠供心的保护作用,观察其对供心心肌细胞功能及超微结构的影响。方法Wistar大鼠18只,随机分为2组：对照组腹腔注射生理盐水0.5mL,24h后取心脏灌注HTK心脏保护液,4℃保存3h后建立Langendorff离体心脏灌注模型,灌注KH液2h;实验组腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素（溶于生理盐水中）3.1μmol/kg（0.53mg/kg）,24h后取心脏,处理方法同对照组。测定两组心肌肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）漏出率以及心肌水含量（MWC）、HSP70、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的水平。观察心肌细胞光镜结构和电镜下的超微结构。结果实验组HSP70、SOD的含量较对照组明显增高（t=17.96,P〈0.01）;实验组MWC、MDA含量、CK、LDH漏出率较对照组明显降低（t=4.13~15.81,P〈0.01）。实验组心肌细胞光镜下以及电镜下超微结构的损伤程度较对照组明显减轻。结论心肌HSP70高表达对离体大鼠供心心肌细胞具有明显的保护效应。     

大鼠外周血内皮祖细胞体外向内皮细胞诱导分化时的表型变化特征

目的 研究大鼠外周血内皮祖细胞(EPC)体外分化为内皮细胞的过程中,干细胞标志物以及内皮细胞表型的变化.方法 取SD大鼠外周血,应用Ficoll密度梯度离心的方法获得单个核细胞,体外培养于纤连蛋白处理的培养皿中,同时应用VEGF和bFGF诱导,使之向内皮细胞转化,用免疫组织化学方法检测细胞CD31、CD34、Flk-1、vWF在第1～7天的表达.结果 贴壁细胞的CD31、CD34、Flk-1、vWF在不同时段呈不同程度的表达.干细胞的标志物CD31、CD34的表达逐步减弱,第6天时消失.内皮标志物Flk-1和 vWF表达逐步增强,第7天时达100%.结论 大鼠外周血干细胞向内皮祖细胞分化的过程中,干细胞标志物逐渐消失,内皮细胞的表型逐步显现.     

改良Mini-root手术在马方综合征中的应用

Mini—root手术在国外同种异体血管主动脉瓣移植治疗感染性主动脉炎或脓肿应用较多。Mini—root手术治疗马方综合征尚未见报道。自2006年5月至2008年1月在3例马方综合征治疗中应用改良Mini-root手术取得良好的结果,本文根据我们的临床实践对手术适应证、基本方法和手术技术等进行总结。     

液氮保存时间对脱细胞血管基质支架材料组织形态及力学特性的影响

背景:血管脱细胞组织基质作为天然生物支架材料的制备与临床应用具有一定的时差,保存条件对其影响逐渐收到人们重视.目的:拟观察不同液氮保存时间对脱细胞血管基质支架材料组织形态及力学特性的影响.设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2007-08/2008-05在青岛市市立医院心脏外科实验室完成.材料:健康新西兰兔10只,体质量550～600 g,用于制备脱细胞血管基质.方法:采用胰蛋白酶、低渗溶液、化学除垢剂法处理兔胸主动脉制备脱细胞血管基质.根据液氮保存时间的不同将制取的血管随机分为液氮1月组,液氮2月组和液氮3月组;另设新鲜组:未用液氮保存而作为对照.主要观察指标:苏木精-伊红染色、扫描电镜观察各组脱细胞血管基质形态变化,并作力学测试,包括Lagrange应变、Lagrange应力、伸长比和极限应力.结果:苏木精-伊红染色可见新鲜组血管脱细胞组织基质中胶原纤维和弹性纤维保持原来的形态和结构,呈网状排列,细胞已基本去除.液氮保存组光镜下见与新鲜组无明显差异.扫描电镜见新鲜组血管脱细胞组织基质的纤维结构完整,胶原纤维无断裂,为网状和多孔状,孔径为(100～150)×(10～20)μ m.液氮保存组胶原纤维结构完整,呈网状捧列,胶原纤维无断裂现象,孔径与新鲜组无明显差异.各组力学指标相比,差异无显著性意义(P>0.05).结论:不同液氮保存时间对脱细胞血管基质的形态学、组织学以及力学特性方面没有明显影响.     

双下肢缺血预处理对未成熟心肌保护作用的研究

目的 研究双下肢缺血预处理对未成熟心肌保护作用,探讨未成熟心肌保护方法。方法 采用经典心脏缺血预处理和双下肢缺血预处理动物Langendorff灌注模型分为3组：缺血／再灌（I／R,n=6）,建立模型,灌注15min转为工作心15min,心脏缺血预处理组（IPC,n=60,建立模型,灌注15min转为工作心15min,反复2次缺血5min,再灌5min;双下肢缺血预处理组（DL－IPC,n=6）,反复2次阻断双下肢血流5min,松开5min,建立模型,灌注15min转为工作心15min;然后各组全心停灌45min,恢复灌注15min改为工作心30min。以左室功能恢复、心肌含水量、血清肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）漏出率、心肌组织ATP和丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性作为观察指标,结果 IPC和DL－IPC组在左室功能恢复优于I／R组（P＜0.050,在ATP含量、SOD活性均优于I／R组（P＜0.010,在心肌含水量低于I／R组（P＜0.05）,在MDA含量、CK、LDH漏出率方面均低于I／R组（P＜0.01）。结论 双下肢缺血预处理与心脏缺血预处理对未成熟心肌具有同等的心肌保护作用。     

兔主动脉脱细胞血管基质的制备

目的 研究脱细胞血管基质的制备方法.方法 采用胰蛋白酶、低渗溶液、化学除垢剂联合法处理兔胸主动脉制备脱细胞血管基质, 标本经苏木精-伊红染色光镜观察,20 g/L戊二醛固定做扫描电镜、透射电镜观察.结果 光镜下血管脱细胞组织基质中胶原纤维和弹性纤维呈网状排列,细胞已全部除去;扫描电镜观察血管脱细胞组织基质纤维结构完整,胶原纤维无断裂,呈网状和多孔状,孔径(100～150)μm ×(10～20)μm;透射电镜观察示胶原和弹性纤维无断裂,基底膜面光滑完整,无破裂.结论 胰蛋白酶、低渗溶液、化学除垢剂联合法处理兔主动脉,可使血管细胞全部脱除,胶原纤维、弹性纤维无断裂,细胞外基质保持完好.     

肾缺血预处理对兔未成熟心肌Bcl-2, Bax,Fas蛋白表达的影响

目的:探讨肾缺血预处理(RIP)对兔未成熟心肌细胞凋亡和Bcl-2, Bax, Fas蛋白表达的影响. 方法:24只幼兔采用Langendorff离体心脏灌注模型,随机分为正常对照组(C)、心脏缺血/再灌注组(I/R)和肾缺血预处理组(RIP),每组8只,测定各组未成熟心肌细胞凋亡和Bcl-2, Bax, Fas蛋白表达. 结果:RIP组与I/R组比较,心肌细胞凋亡率明显减少[(4.19±1.13)% vs (12.30±2.10)%, P<0.01],DNA片段梯光密度明显减少(57 350±1765 vs 135 200±3370, P<0.01), Bcl-2表达增多(33 525±1026 vs 12 385±860, P<0.01), Bax(8640±768 vs 32 472±1128, P<0.01)和Fas(8936±912 vs 32 100±1260, P<0.01)表达明显减少. 结论:RIP可减少缺血再灌注后兔未成熟心肌细胞凋亡和影响Bcl-2, Bax, Fas蛋白的表达.     

热休克蛋白70对大鼠离体心脏细胞凋亡的影响

目的 观察热休克蛋白70(HSP70)对离体大鼠供心心肌细胞凋亡相关蛋白bcl-2、bax表达的影响.方法 Wistar大鼠18只,分为2组:对照组(C,n=9),腹腔注射生理盐水0.5 ml,24 h后取离体心脏灌注HTK心脏保护液,4 ℃保存3 h后建立Langendorff离体心脏灌注模型,灌注KH液2 h;实验组(E,n=9)腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素(溶于生理盐水中)3.1 μmol/kg(0.53 mg/kg),腹腔注射24 h后取离体心脏,处理方法旧C组.运用免疫组织化学SP法测定心肌HSP70含量、bcl-2、bax蛋白的含量并做统计学处理比较.结果 HSPT0含量E组(17.78±1.82)较C组(5.22±1.05)明显增高(P＜0.01),bel-2的表达E组(41.88±5.09)较C组(31.36±3.27)明显增多(P＜0.01),bax的表达E组(22.61±3.49)较C组(40.52±4.17)明显减少(P＜0.01),bel-2/bax比值E组(1.86±0.11)较C组(0.77±0.01)明显增高(P＜0.05).结论 心肌HSP70高表达能促进心肌抗凋亡蛋白bcl-2的表达,减少促凋亡蛋白bax表达,增加bel-2/bax比率,抑制心肌细胞凋亡.