干扰素对肺腺癌A549细胞B7-H4分子表达的影响

目的:探讨IFN-α和IFN-γ对人肺腺癌细胞株A549 B7-H4 mRNA和蛋白表达的影响。方法:用不同浓度(100、500、1 000、2 000 U.ml-1)IFN-α和IFN-γ分别处理A549细胞,未经药物处理细胞作对照(对照组)。用MTT法观察细胞增殖活性的差异,RT-PCR观察B7-H4 mRNA表达水平的变化,蛋白质印迹法观察B7-H4蛋白表达水平的变化。结果:IFN-α和IFN-γ对人肺腺癌细胞株A549增殖有抑制作用,其抑制效应具有时间和剂量依赖性(P<0.05)。随着IFN-α浓度的增加,B7-H4分子mRNA和蛋白表达增强(P<0.05),而IFN-γ对B7-H4分子mRNA和蛋白表达影响不明显(P>0.05)。结论:IFN-α和IFN-γ均可抑制人肺腺癌A549细胞株的增殖;IFN-α可增强B7-H4mRNA和蛋白水平的表达,而IFN-γ对B7-H4分子mRNA和蛋白表达影响不明显。     

TNFα对小鼠肾上腺皮质细胞系Y1增殖、凋亡的影响

目的：探讨肿瘤坏死因子α（TNFα）对小鼠肾上腺皮质细胞系Y1增殖、凋亡的影响。方法：不同浓度、不同作用时间的TNFα处理小鼠肾上腺皮质细胞系Y1;MTT法检测细胞的增殖;台盼蓝拒染法检测细胞增殖抑制;流式细胞仪检测细胞的凋亡水平;分光光度法检测细胞caspase8/3的变化。结果：不同浓度的TNFα处理Y1细胞不同时间后,细胞的增殖能力明显下降（P〈0.05）;细胞凋亡水平明显提高（P〈0.05）;细胞caspase8/3水平明显升高（P〈0.05）。结论：TNFα可抑制Y1细胞增殖,并通过提高caspase8/3的活性而诱导及促进细胞凋亡。     

锌-α2-糖蛋白对结直肠癌细胞株LoVo生物学行为的影响

目的:初步探讨锌-α2-糖蛋白(ZAG)对结直肠癌细胞LoVo的生物学行为的影响。方法:构建和应用ZAG过表达质粒pGCMV/EGFP/Neo/ZAG转染结直肠癌细胞LoVo,免疫组化检测ZAG的表达变化,MTT法检测转染前后细胞增殖能力的变化以及细胞的克隆形成能力和侵袭力的改变。结果:过表达质粒pGCMV/EGFP/Neo/ZAG可成功诱导结直肠癌细胞LoVo表达ZAG,同时其细胞增殖力受到抑制、克隆形成率降低以及细胞的侵袭能力明显降低。结论:结直肠癌细胞LoVo的生物学行为的改变可能与ZAG的过表达相关,其在结直肠癌的发生发展过程发挥抑癌的生物学效应。     

△Np63 mRNA在食管鳞癌患者外周血中的表达及意乙

近年研究表明,非血液系统恶性肿瘤在发展过程中,可能早期即有部分肿瘤细胞脱离原发灶并播散形成微小肿瘤细胞灶,常无临床表现,称为肿瘤微转移.     

pcDNA3.1/DLC-1 重组质粒的构建及其在HT-29细胞中的表达

 目的 构建和表达DLC-1(deleted in liver cancer)基因重组质粒。 方法 用PCR法得到DLC-1基因片段,此基因片段带有Xba Ⅰ和BamH Ⅰ两个酶切位点,然后将此片段 和真核表达载体pcDNA3.1连接,转化大肠杆菌DH5a,利用脂质体介导将pcDNA3.1/DLC-1重组质 粒转染到结肠癌HT-29细胞中,再用RT-PCR法检测重组质粒的表达。 结果 重组质粒经Xba Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切和测序与DLC-1基因序列一致;利用脂质体介导将 pcDNA3.1/DLC-1重组质粒导入HT-29细胞,获得了DLC-1基因的表达。 结论 成功构建pcDNA3.1/DLC-1重组质粒并在HT-29细胞内表达。     

32P-磷酸铬-聚 L-乳酸缓释粒子的制备及其放射性释出和生物分布

Objective The aim of this study was to prepare the 32P-chromic phosphate-poly(L-lac-tide) (32P-CP-PLLA) particles with different ratio of the materials and further examine their performance in-dex in vivo and in vitro and their intracorporeal distribution. Methods The erosion, degrading rates, de-layed release velocity and radioactivity self-absorption coefficient (RSAC) of 32P-CP-PLLA particles made from different materials were investigated and compared. After the implantation of 32P-CP-PLLA particles and the injection of 32P-CP colloids in the muscular tissues, the weight loss rate and the radioactivity release rate (RRR) of the particles were calculated. The intracorporeal distribution, radioactive half-life and bio-logical effect of 32P in the targeting sites were further studied. Statistical analysis was performed with SPSS 12.0, and one-way analysis of variance and t-test were used. Results 32P-CP-PLLA particles were of green cylinder, with regular shape and radionuclide distribution. The RSAC of the particles was of little re-lation with molecular weight of PLLA and proportional to the ratio of PLLA to CP. The extracorporeal release rate increased with the reduction of molecular weight of PLLA and with the increase of the ratio of PLLA to CP. The RRR reached peak when PLLA was 3 times of CP. The 32P-CP, released with the degradation and corrosion of the particle distributed mainly in the surrounding muscles of the particle. And the peak of per-centage activity of injection dose per gram of tissue (% ID/g) in liver, spleen and bone were 1. 7887, 1. 6401 and 1. 9470 respectively, much lower than that in the 32P-CP group (4.7523, 3.9712 and 4.3174 ; all t > 2.7, all P < 0.05). The % ID/g in other organs was much less. The radioactivity effective half-life in the targeting sites increased to about 13 d. There was widespread necrosis around the particles with no ex-istence of normal tissues among them. And no abnormality in spleen and liver was found. Conclusion As a better dosage form of pure β-particle emitter, 32P-CP-PLLA, which can increase the targeting radioactive dosage and effective half-life in the implanting sites, can be served as an potential implanting agent for onco-therapy with a better perspective.     

~(32)P-磷酸铬-聚L-乳酸粒子植入实验鼠体内降解特性及代谢

目的 观察~(32)P-磷酸铬-聚L-乳酸(~(32)P-CP-PLLA)粒子植入实验鼠体内的降解特性及代谢.方法 KM小鼠72只,采用开腹或经皮穿刺法将~(32)P-CP-PLLA粒子分别植入小鼠肝、腹腔及腿部肌肉,粒子植入前活度为20.44～25.14 kBq,30 d内不同时间处死,取出粒子,取血及主要脏器测~(32)P放射性计数率,计算每克组织的百分剂量率(%ID/g),用扫描电镜动态观察粒子形态变化.SD大鼠5只,肝内植入粒子后代谢笼饲养,每24小时测量粪便及尿液放射性,计算~(32)P30 d排泄率.计量数据以-x±s表示,采用SPSS 13.0软件进行统计分析.结果 KM小鼠体内生物分布显示~(32)P-CP-PLLA 粒子植入后无一发生粒子移位,释出的~(32)PP在重要脏器和组织中放射性分布略高于本底水平.30 d内组织脏器计数率之和呈现阶段性变化:肝组1～5 d各脏器摄取总值极少,6～10 d略增多,11～20 d又趋减少,21～25 d摄取再次增多,达到峰值(622±11)计数/min,26-30 d略有下降;肌肉组变化与肝组相似,唯峰时提前(15 d),且峰值相对较低,为(403±14)计数/min;腹腔组重要脏器摄取呈持续低水平,无明显阶段性变化.粪便和尿液放射性峰值分别出现在第16天和第19天,排泄率分别为(0.82±0.20)%和(0.50±0.23)%,30 d总排泄率分别为4.08%和1.33%.结论 ~(32)P-CP-PLLA粒子作为一种新型治疗恶性肿瘤植入剂,在体内无脏器迁移,粒子呈现阶段性缓慢降解,降解物不具胶体特性,较少通过粪便和尿液排出体外,显示出良好的体内稳定性、靶向定位性和安全性.     

32P-磷酸铬-聚 L 乳酸降解粒子植入体内分布及其对免疫功能的影响

目的:探讨32P-磷酸铬-聚L乳酸(32P-CP-PLLA)粒子植入H22淋巴转移模型的靶向浓聚及对淋巴转移治疗的潜能和间质植入SD大鼠对其免疫功能的影响.方法:KM小鼠模型50只,随机分为2组,瘤体内分剐植入1枚32P-CP-PLLA和注入胶体32P-磷酸铬(32P-CP).给药后不同时间点处死,观察荷瘤鼠体内生物分布及影像学检查,病理学检查.SD大鼠20只,74 MBq/只,γ相机韧致辐射显像,流式细胞仪动态检测血清CD3、CD4、CD8表达水平.结果:体内生物分布示植入32P-CP-PLLA粒子在瘤体内未发生移位.MR扫描示粒子椭圆形低信号区.γ相机韧致辐射显像示植入粒子组放射性分布持续局限浓聚于植入点.SD大鼠肝脏粒子组免疫力3 d开始降低,7 d最低,14 d恢复正常.肌肉粒子组大鼠免疫力14 d略降低,其余时间正常.肝脏32P-CP组免疫力3 d时降低,7 d降到最低,持续30 d恢复正常.结论:32P-CP-PLLA粒子组织靶向定位明显优于32P-CP,对淋巴转移治疗具有一定的潜能.32P-CP-PLLA植入肌肉组织对机体免疫功能无明显影响,植入肝脏免疫功能一过性轻度降低;同等活度的32P-CP肝脏间质注射可引起机体免疫功能明显损伤,持续约4周左右.     

胶体32P-磷酸铬间质给药对犬累积损伤效应的研究

目的 探讨胶体³²P-磷酸铬(³²P-CP)在正常Beagle犬的肝叶或臀大肌行间质注射的安全性。方法 10只Beagle犬,随机分成间质给药不同剂量(185和370MBq)、不同部位(臀大肌和肝脏)及冷胶体对照5组(n＝2)。术后不同时间点称量体重,行血液生化学检查,ECT轫致辐射显像,组织形态学动态观察及连续测量体表、血液、尿液和粪便放射性计数率值。计量数据以均数±标准差(±s)表示,采用SPSS13.0软件进行统计分析。结果 给药后ECT示肝脏组全肝显影,放射性分布呈团块状不均匀,肌肉组局部放射性持续浓聚,肝脏未见显影。术后第4组犬体重进行性减少,45d时较术前减少2.7kg,余组体重增值均数依序为3.0、1.6、0.8和3.1kg。第4组血小板、红细胞术后有明显减少。分别于给药后23和45d死亡,死亡前谷草转氨酶和谷丙转氨酶均有急剧升高;其余组间血液和血生化学差异无统计学意义。术后体表分区测定以注射部位放射性计数率值为最高,其次为膀胱、脾。肝脏组血液峰时为5min,峰值分别为0.5×10⁷/min和1.0×10⁷/min;肌肉组持续在3×10⁵/min左右。组织学表现肌肉组和肝脏185MBq组4周内有充血水肿改变,8周后组织结构恢复正常;肝脏370MBq组4周内部分肝细胞坏死,6周时见大量肝细胞气球样变,充血水肿明显,肝小叶结构不清。尿液、粪便中放射性计数率肌肉组峰时均数分别为13和12d,峰值为(42.0±3.3)×10⁴/min和(29.6±4.5)×10⁴/min;肝脏组峰时为5和9d,峰值为(49.0±10.2)×10⁴/min和(28.5±7.1)×10⁴/min。至30d肌肉组从尿液和粪便中累积排泄率为36.58%和10.62%,肝脏组为23.48%和8.76%。吸收剂量肝脏组肝脏为(30.6±2.3)、(55.6±4.4)Gy;肌肉组肌肉注射部位为(53.4±3.1)、(98.1±3.3)Gy,肝脏为(2.3±1.3)、(6.5±1.2)Gy。结论 Beagle犬肝脏间质注射794.39MBq/m²,肝脏吸收剂量为56Gy时有较强肝毒性及全身毒副作用,是其致死剂量。肌肉给药463.98～772.93MBq/m²是安全剂量范围。³²P-CP间质给药是适用于治疗凡穿刺所能到达的乏血供及中等血供实体瘤的安全手段。     

^32P-磷酸铬-聚L-乳酸缓释粒子的制备及其放射性释出和生物分布

目的研制^32P-磷酸铬-聚L-乳酸（CP—PLLA）缓释粒子,探讨不同配比对其理化性能的影响及植入正常小鼠肌肉后的放射性生物分布及作用特点等。方法应用压制法制备^32P-CP—PLLA缓释粒子,比较不同相对分子质量PLLA、不同原料配比制备粒子的体外溶蚀失重率、放射性释出率（RRR）及放射性自吸收系数（RSAC）;采用经皮穿刺法将相同表面活度的^32P-CP—PLLA缓释粒子和^32P-CP胶体植入和注射至正常小鼠小腿肌肉组织,观察小鼠体内放射性生物分布、有效半衰期、作用特点和粒子体内失重率、RRR。用SPSS12．0软件,多个样本均数比较行单因素方差分析,组间两两比较行t检验。结果^32P-CP—PLLA粒子为淡绿色圆柱体,形态圆整,质量及粒子内放射性分布均匀;RSAC受PLLA相对密度影响较小,随PLLA相对分子质量增大而增加;体外RRR随PLLA的相对分子质量逐渐增加而降低,随PLLA和CP胶体质量比增加而增加,比值为3：1时达峰值,然后逐渐降低,同时粒子脆性逐步增加。^32P-CP—PLLA粒子肌肉植入后,体内失重率及RRR缓慢增加,以RRR增加尤为迅速,且释出^32P-CP主要分布于粒子邻近肌肉组织,肝、脾和粒子侧骨骼每克组织百分注射剂量率（％ID／g）值为1．7887,1．6401和1．9470,明显低于胶体组（4．7523,3．9712和4．3174,t均〉2．7,P均〈0．05）,其他脏器％ID／g值极低,峰值与胶体组差异无统计学意义（t均〈0．65,P均〉0．05）,植入靶位有效半衰期达13d。放射性粒子周围弥漫性变性坏死区内未见正常肌肉纤维存在,肝、脾等重要脏器未见明显异常。结论^32P-CP—PLLA通过自身溶蚀降解缓慢释出放射性,有效提高了植入靶位放射性滞留量和有效半衰期,有效射程内具有集中的生物学效应,可增加应用剂量、提高局部生物学效应并减轻对重要脏器的毒性和不良反?