siRNA沉默PPARα减弱羟喜树碱诱导的人结肠癌细胞凋亡

背景:多药耐药一直是遏制提高结肠癌化疗有效性的瓶颈问题。目的:探讨沉默PPARα能否减弱羟喜树碱诱导的人结肠癌细胞凋亡,从而阐明PPARα在羟喜树碱耐药中的潜在作用。方法:构建针对PPARα基因的siRNA干扰载体,并转染人结肠癌SW1116细胞,经G418筛选出稳定转染的细胞,以RT-PCR和蛋白质印迹法验证干扰效果。经羟喜树碱干预后,以MTT法检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡。以定量RT-PCR检测不同浓度miR-506前体转染SW1116细胞后对PPARα下游调控靶基因mRNA表达的影响。结果:siRNA干扰载体Ⅲ的沉默效果最佳,PPARα mRNA和蛋白表达分别下调了约94.1%±3.4%和70.8%±8.6%。稳定转染siRNA的SW1116细胞的半数抑制浓度(IC_(50))为(332±19)μg/L,亲本SW1116细胞为(152±12)μg/L。在相同浓度羟喜树碱的作用下,亲本SW1116细胞的凋亡率显著高于稳定转染siRNA的SW1116细胞(150μg/L:7.0%±2.5%对2.8%±1.6%;300μg/L:32.4%±7.1%对18.5%±2.7%)。miR-506前体下调HMGCS-2表达,上调FABP-2、CCND1和TGF-β1表达,其中上调CCND1的作用最为明显。结论:成功构建了针对PPARα的siRNA干扰载体;沉默PPARα能增强SW1116细胞对羟喜树碱的抵抗性,可能与下调HMGCS-2表达并上调FABP-2、CCND1和TGF-β1表达有关。     

miR-506在人结肠癌羟基喜树碱多药耐药中的功能研究

目的探讨miR-506在人结肠癌羟基喜树碱多药耐药中的潜在作用。方法首先通过PCR从基因组DNA中克隆出包含miR-506前体的片段,将其连接至miRNA表达载体pMIF-cGFP-Zeo中,测序进行验证。将构建成功的pMIF-miR-506转染至低表达miR-506的亲本细胞SW1116中,加入含G418的选择性培养基进行选择性培养。运用RT-PCR验证稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株中的miR-506的表达情况,MTT法检测稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株和亲本细胞SW1116对羟基喜树碱的敏感性差异,Annexin V/PI检测各自对羟基喜树碱的凋亡情况。结果测序结果表明hsa-miR-506的前体序列被成功地构建至miRNA表达载体pMIF-cGFP-Zeo中。TaqMan荧光定量PCR技术检测发现,相比亲本细胞SW1116,稳定表达绿色荧光的SW1116细胞克隆中miR-506的含量显著升高,约为33.7±8.3倍。细胞增殖试验表明稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株的IC50为(280±13)μg/L,而对照组SW1116的IC50为(152±12)μg/L。同时还发现在相同浓度的羟基喜树碱作用下,亲本细胞SW1116较稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株的凋亡细胞比率增高(150μg/L:7.8%±1.7%vs5.4%±1.2%;300μg/L:33.6%±3.9%vs18.2%±4.7%)。结论成功地构建了过表达miR-506的载体pMIF-miR-506;过表达miR-506能够增加SW1116对羟基喜树碱的抵抗性。     

羟基喜树碱对HSC-T6细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨羟基喜树碱(HCPT)对体外培养大鼠肝星状细胞(HSC)的增殖与凋亡的影响.方法 大鼠肝星状细胞(HSC-T6)和大鼠正常肝细胞(BRL-3A)分别在实验组(分别以含HCPT浓度为0.008、0.016、0.031、0.063、0.125,0.25、0.5、1、2、4、8、16、32mg/L的培养液培养)和对照组(单纯培养)体外培养24 h.用四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖情况,找出HCPT对HSC-T6细胞增殖抑制的最佳作用浓度;流式细胞仪检测细胞凋亡率;透射电子显微镜下观察细胞凋亡的形态学变化情况;琼脂糖凝胶电泳法检测DNA片段化.多个样本均数的比较采用单因素方差分析,两样本均数的比较采用t检验.结果 HCPT对HSC-T6细胞和BRL-3A细胞的增殖抑制率随着药物浓度的升高而逐渐升高;当HCPT浓度＞0.5mg/L时,对BRL-3A细胞的毒性作用显著增高(P值均<0.05);0.5 mg/L对HSC-T6细胞增殖抑制作用最大,为HCPT对HSC-T6细胞增殖的最佳抑制浓度.0.125、0.25、0.5 mg/L的HCPT作用HSC-T6细胞24h,流式细胞仪检测显示细胞凋亡率分别为13.46%±2.42%、26.25%±5.65%、47.05%±8.76%,与对照组(4.89%±1.80%)相比,差异有统计学意义(F=34.24,P<0.01).0.5mg/L的HCPT作用HSC-T6细胞24 h,透射电子显微镜下可见细胞体积缩小,核仁消失,染色质浓缩聚集成团块状,沿核膜排列等凋亡形态学改变;琼脂糖凝胶电泳可见明显的DNA梯度带形成.结论 HCPT在体外可以明显地抑制HSC-T6细胞的增殖、诱导HSC-T6细胞凋亡,作用强度呈剂量依赖性.     

沙培林联合羟基喜树碱膀胱灌注与单独灌注预防膀胱癌术后复发疗效对比观察

目的：评价联合应用沙培林（OK-432）和羟基喜树碱（HCPT）膀胱腔内灌注及单独应用预防膀胱癌复发的疗效。方法：128例膀胱乳头状移行细胞癌患者行经尿道电切术和膀胱部分切除术后,随机分为3组：联合治疗组36例,OK-432组42例,HCPT、组50例。膀胱癌切除术后开始灌注,每周1次,共8周;以后每月1次,随访18个月。每2个月复查1次膀胱镜和尿细胞学检查。结果：联合应用组无复发,OK-432组3例复发,复发率7．14％（3／42）,HCPT组5例复发、复发率10．00％（5／50）。OK-432组与HCPT组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;但二者与联合组比较,组间差异有统计学意义（P〈0．05）。三组均无严重不良反应和并发症。结论：联合应用OK-432、HCPT疗效优于单独应用,预防复发疗效好,不良反应不明显,有较高临床应用价值。     

甘草、喜树碱配伍应用的抗肿瘤作用研究

目的：研究甘草、喜树碱配伍应用的抗肿瘤作用。应用SRB法对甘草、喜树碱配伍后进行体外抗肿瘤作用研究,对S180荷瘤小鼠的瘤重和H22小鼠的生存时间进行了的观察。甘草、喜树碱配伍后体外对肿瘤细胞生长的抑制作用明显,并对人成纤维细胞无影响;体内实验表明,甘草、喜树碱能抑制S180小鼠的瘤重,能显著延长H22小鼠的生存时间。提示甘草与喜树碱配伍应用后能增强喜树碱的抗肿瘤作用并能降低其毒性。     

草酸铂联合羟基喜树碱、氟尿嘧啶、甲酰四氢叶酸钙治疗晚期胃癌的临床观察

目的评价含草酸铂和羟基喜树碱、甲酰四氢叶酸钙、5-氟尿嘧啶（5-FU）的联合方案（OHLF）治疗晚期胃癌的近期疗效和不良反应。方法草酸铂130mg／m^2,静滴,第一日;羟基喜树碱6mg·m-2静滴,第一～五日;CF200mg／m^2。静滴2h,第一～五日;5-FU400mg／m^2,第一～五日;每21日为1个疗程,完成3周期后评价疗效。结果全组58例患者,CR3例,PR28例,NC18例,PD9例,总有效率53．5％;主要不良反应为轻度的血液学毒性、恶心呕吐和外周感觉神经异常。结论含草酸铂和羟基喜树碱的OHLF方案是治疗晚期胃癌有效且毒性较,1、的联合化疗方案,适宜临床应用。     

羟基喜树碱经导管腹腔灌注治疗卵巢癌腹水30例临床观察

目的:临床观察羟基喜树碱(HCPT)经导管腹腔灌注治疗卵巢癌腹水的疗效.方法:30例卵巢癌腹腔积液患者,采用B超定位套管插管法负压引流,引流到无积液时,腹腔内灌注HCPT 20～40mg.结果:治疗一次有效者21例;2次以上有效者4例,总有效率达83.33%;缓解期为1～11个月,平均4.2个月;生存期＞6个月73.3%(22/30),生存期＞12个月26.7%(8/30);Karnofsky评分升高.结论:该治疗方法具有疗效好、疗程短、毒性小、方便、安全等优点,可有效控制恶性腹腔积液的复发,提高患者的生活质量.     

10-HCPT对人肝癌细胞QGY和HepG2生长增殖的抑制作用

目的:探讨10-HCPT对人肝癌细胞QGY和HepG2生长增殖的影响.方法:分别用不同浓度10-HCPT作用QGY和HepG2细胞48h和相同浓度作用不同时间,以MTT法检测细胞生长指数(GI),软琼脂克隆形成试验检测细胞克隆形成率.结果:10～360μg/ml和30～360μg/ml 10-HCPT分别作用QGY和HepG2细胞48h后,均有显著性生长抑制作用(P＜0.05),且呈量效依赖关系.100μg/ml 10-HCPT作用24h、36、48和72h对两种细胞均具有显著性抑制作用(P＜0.05).实验组两种细胞克隆形成率较对照组均显著降低(P＜0.05).结论:10-HCPT对人肝癌细胞QGY和HepG2体外生长增殖均具有抑制作用.     

羟基喜树碱聚氰基丙烯酸正丁酯纳米囊制备工艺研究

目的制备羟基喜树碱聚氰基丙烯酸正丁酯纳米囊(HCPT-PBCA-NPs),研究制备工艺并优化处方。方法采用微乳化聚合法制备HCPT-PBCA-NPs,以粒径、多分散系数和包封率为指标,通过单因素考察处方和工艺参数,采用Box-Behnken实验设计优化HCPT-PBCA-NPs制备工艺并考察其理化性质。结果按照优化处方和工艺条件,制得纳米囊平均粒径为(92.7±0.6)nm,多分散系数为0.118±0.014,包封率为(94.24±1.05)%,形态圆整,具有缓释作用。结论经过优化筛选的处方和制备工艺制备的纳米囊具有较好的理化性质,缓释效果显著。     

10-羟基喜树碱对肝癌细胞HepG2 DNA甲基化水平的调节作用研究

目的:研究10-羟基喜树碱对肝癌细胞Hep G2的DNA甲基化水平的调节作用。方法:体外培养Hep G2细胞,分为给药组(10-羟基喜树碱25μg/ml)和空白对照组,每组6个小组,每小组5个平行孔,分别于给药后24、48、72 h各组取2个小组,一组用MTT法检测Hep G2细胞的生长抑制率;另一组提取Hep G2细胞的DNA,酸水解后高效液相色谱法检测其甲基化率。结果:10-羟基喜树碱作用24、48、72 h后,Hep G2细胞的生长抑制率分别为(61.6±4.9)%、(85.7±0.7)%、(97.9±0.7)%;给药组Hep G2细胞DNA甲基化率分别为(2.81±0.34)%、(6.67±0.24)%、(6.83±0.24)%,明显高于相应的空白对照组[(1.88±0.13)%、(1.91±0.11)%、(1.98±0.18)%](P<0.05),且与作用时间呈正相关。结论:10-羟基喜树碱在抑制Hep G2细胞的生长的同时提高了细胞DNA的甲基化水平。