缺氧诱导肝癌细胞EMT转化及耐药的初步实验研究

[目的]观察缺氧对肝癌细胞侵袭转移能力的影响,并进一步探讨缺氧环境下肝癌细胞耐药机制.[方法]利用HepG2、SMMC-7721细胞建立肝癌细胞缺氧模型,利用倒置显微镜观察细胞形态学变化;Transwell迁移与侵袭实验检测肿瘤细胞体外侵袭转移能力;MTT法检测肿瘤细胞活性;Western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、Vinmentin、N-cadherin和肿瘤耐药基因ABCG2的表达;采用流式细胞术检测凋亡和细胞周期变化.[结果]缺氧培养48h后的肝癌细胞从上皮细胞样表型转化为间质细胞样表型;缺氧条件下肝癌细胞E-cadherin表达显著下降,Vim-entin和N-cadherin表达显著升高(P<0.05).同时,缺氧条件下肝癌细胞迁移和侵袭能力显著增强(P<0.05).缺氧可导致HepG2、SMMC-7721停滞于静止期(G0/G1)的细胞数显著增多,缺氧条件下肝癌细胞对cisplatin耐药性显著增加(P<0.05);缺氧条件下ABCG2蛋白表达增加(P<0.05).[结论]缺氧能诱导肝癌细胞EMT转化而致侵袭转移,同时可导致对cisplatin耐药.     

缺氧诱导肝癌细胞获得干细胞特性的初步实验研究

目的:观察缺氧对肝癌干细胞特性的影响.方法:用肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721建立细胞缺氧培养模型,利用倒置显微镜观察细胞形态学变化;克隆形成实验检测肿瘤细胞克隆形成能力;"肿瘤球"形成实验检测肿瘤细胞自我更新能力;实时定量RT-PCR和Western blot检测干细胞相关基因Oct-4、Sox-2、Nanog mRNA和蛋白表达;采用流式细胞术检测干细胞表面标志物CD133表达.结果:缺氧条件下HepG2、SMMC-7721细胞克隆形成率显著高于常氧组(P<0.05).缺氧条件下HepG2、SMMC-7721细胞肿瘤球形成率显著高于常氧组(P<0.05).常氧条件下HepG2、SMMC-7721细胞中干细胞相关基因Oct-4、Sox-2、Nanog mRNA及蛋白表达水平极低,缺氧处理48 h后,其mRNA及蛋白表达水平明显增高(P<0.05).缺氧条件下HepG2、SMMC-7721细胞CD133阳性表达率表达量显著增加(P<0.05).在缺氧36 h和48 h,CD133蛋白表达水平显著增强(P<0.05).结论:缺氧能诱导肝癌细胞干细胞特性的获得.     

分子靶向药物在肝细胞癌中的应用

手术切除和肝移植仍然是肝细胞癌(HCC)的治疗首选.对于不适宜手术切除的晚期HCC,传统的化疗并不能改善患者的预后.分子靶向药物的出现为晚期HCC的治疗提供了新的治疗手段.多靶点抑制剂、血管内皮生长抑制剂、单克隆抗体等分子靶向药物已经在HCC中广泛研究和应用.     

宫颈癌组织中上皮钙黏蛋白mRNA的表达及血清可溶性钙黏蛋白测定的意义

目的：探讨上皮钙黏蛋白在宫颈癌中的表达及其与肿瘤发生发展和侵袭转移的关系。方法：采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测15例正常宫颈、46例宫颈癌组织中上皮钙黏蛋白mRNA的表达。ELISA检测25例宫颈癌初发患者、25例治疗后患者、25例健康人血清可溶性钙黏蛋白的含量。结果：①上皮钙黏蛋白mRNA表达率宫颈癌明显低于正常宫颈组织（P〈0．05）；②上皮钙黏蛋白mRNA阳性表达率与患者年龄、生长方式、病理分期无关，与肿瘤的分化程度有关（P〈0．05）；③初发患者血清可溶性上皮钙黏蛋白显著高于健康人水平（P〈0．05），治疗后患者血清水平与初治患者、健康人水平无明显差异。结论：上皮钙黏蛋白低表达或缺失能促进宫颈癌的发生发展，血清可溶性上皮钙黏蛋白的检测可能为肿瘤的早期诊断提供新的手段。     

肝癌组织中PTEN的表达及其与p53、细胞增殖和凋亡的关系

目的:研究肝细胞肝癌(HCC)组织中PTEN的表达与细胞增殖及凋亡的关系及其与p53的相关性,明确PTEN是否参与HCC的发生、发展. 方法:利用免疫组织化学技术检测47例经术后病理学证实的HCC组织、42例癌旁肝组织及10例健康肝组织中PTEN,p53,增殖性核抗原(PCNA)的表达;用TUNEL法检测HCC中细胞凋亡水平. 结果:10例正常肝组织、42例癌旁肝组织中PTEN全部阳性表达(100%);53%(25/47)的HCC组织PTEN蛋白表达缺失. PTEN的表达与肝癌细胞的增殖指数和凋亡指数无相关性,与肝癌的浸润转移具有相关性,与p53的表达有相关性. 结论:肿瘤抑制基因PTEN和p53有相互作用. PTEN蛋白表达缺失可能在HCC的进展过程中发挥主要作用.     

GS-Rg3联合GEM对肝癌HepG2细胞株及其VEGF的影响

目的:探讨GS-Rg3、吉西他滨及GS-Rg3与吉西他滨联合对肝癌Hep G2细胞增殖和凋亡情况的影响,研究GS-Rg3作用Hep G2细胞后VEGF表达的变化。方法:采用MTT法及流式细胞技术检测Hep G2细胞对GS-Rg3、吉西他滨及GS-Rg3联合吉西他滨的药物敏感性差异。免疫细胞化学法检测Hep G2细胞中VEGF的表达。结果:GS-Rg3和吉西他滨单药或联合用药对Hep G2细胞的增殖呈抑制作用且呈现时间与浓度的依赖性,并能诱导Hep G2细胞凋亡,联合组凋亡诱导作用强于单药组(P<0.05)。GS-Rg3能下调Hep G2细胞中VEGF的表达。结论:GS-Rg3与吉西他滨联合对肝癌Hep G2细胞具有协同抑制作用,可能通过抑制VEGF的表达发挥抗癌作用。     

过表达 PTEN 增强肝癌 HepG2细胞对吉非替尼的敏感性

目的：探索过表达 PTEN 增强 HepG2细胞对吉非替尼敏感性的分子机制。方法：脂质体法转染获得稳定表达野生型 PTEN、磷酸酶缺失 PTEN 和空质粒 pcDNA3.1的肝癌 HepG2细胞株,MTT 法检测各组转染细胞对吉非替尼的药物敏感性,流式细胞仪检测吉非替尼诱导各组转染细胞的凋亡情况,Western blot 分析各组转染细胞 PTEN、Akt、pAkt 和 Caspase -3表达情况。结果：与转染 pcDNA3.1的对照组细胞相比,稳定转染PTEN 的 HepG2细胞对吉非替尼的敏感性显著增加（ P <0.05）。吉非替尼作用48h 后,稳定转染 PTEN 的HepG2细胞凋亡率明显高于对照组（P <0.05）。过表达 PTEN 可以抑制 Akt 磷酸化,促进 Caspase -3表达。而转染磷酸酶缺失 PTEN 的 HepG2细胞丧失上述生物学行为。结论：PTEN 可能通过抑制 Akt 信号通路、诱导细胞凋亡来增强细胞对吉非替尼的敏感性。     

siRNA介导的STAT3基因沉默对宫颈癌HeLa细胞凋亡和化疗敏感性的影响

目的:应用siRNA介导的STAT3基因沉默,研究其对HeLa细胞凋亡和化疗敏感性的影响.方法:体外合成靶向STAT3的siRNA-1和siRNA-2,并用脂质体转染HeLa细胞,RT-PCR检测干扰STAT3 mR-NA敲减的效率,蛋白质印迹法检测敲减后STAT3蛋白的表达;通过记录生长曲线观察干扰后细胞的增殖情况.用AnnexinV/PI双染,结合流式细胞仪检测细胞早期凋亡率.MTT法检测肿瘤细胞对几种化疗药物的敏感性.结果:siRNA使STAT3表达下调,mRNA水平抑制率为74.8%和60.4%;蛋白表达水平抑制达68.0%和59.0%.干扰后HeLa细胞增殖缓慢,早期凋亡率明显增加.对顺铂、长春瑞滨和吉西他滨有增敏作用.结论:siRNA介导的STAT3沉默可以抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖,诱导凋亡,增加对化疗药物的敏感性,可望成为一种新的治疗策略.     

MiR-126抑制肝癌细胞增殖的实验研究

目的:研究miR-126对肝癌细胞增殖能力及成瘤能力的影响,探索其影响肝癌细胞增殖的分子基因。方法:在肝癌细胞系中过表达和下调miR-126,通过细胞计数实验、MTT实验和异种移植瘤模型检测肝癌细胞的体外增殖能力和成瘤能力;利用miRNA靶基因预测数据库结合双荧光素酶报告技术获得miR-126的下游靶基因Sirt1,Western blot检测过表达和下调miR-126后,肝癌细胞中靶基因的表达。结果:过表达/干扰miR-126显著抑制/促进了肝癌细胞的增殖能力和成瘤能力（P＜0.05）。双荧光素酶报告系统实验证实:MiR-126过表达/干扰后,下游靶基因Sirt1的3' UTR区活性显著降低/增加（P＜0.05）。MiR-126过表达的肝癌细胞中,Sirt1的表达显著降低,反之,miR-126干扰的肝癌细胞中,Sirt1的表达显著增加。结论:MiR-126能够抑制肝癌细胞的增殖能力和成瘤能力,可能作为抑癌性microRNA分子在肝癌中发挥作用。     

一线EGFR-TKIs联合血管生成抑制剂治疗晚期EGFR突变非小细胞肺癌的疗效分析

目的:比较一线表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs）联合血管生成抑制剂对比EGFR-TKIs单药治疗晚期EGFR突变非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）的疗效和安全性。方法:对PubMed、Embase、Web of Science和Cochrane Library数据库以及欧洲医学肿瘤学会（ESMO）、美国临床肿瘤学会（ASCO）中会议摘要进行了全面的文献检索。检索时间截止至2020年11月13日。使用STATA V.14.0对相关数据进行统计分析。结果:本meta共纳入6个II/III期RCTs（11篇文章）,包括1 537例符合分析条件的NSCLC患者。结果表明,与EGFR-TKIs单药组相比,联合血管生成抑制剂组患者的无进展生存期（progression-free survival,PFS）显著延长（HR=0.62,95%CI 0.54~0.70,P<0.001）。然而,联合治疗并不能改善患者的总生存期（overall survival,OS）（P=0.536）、客观缓解率（objective response rate,ORR）（P=0.186）和疾病控制率（disease control rate,DCR）（P=0.918）。联合治疗组发生grade3+不良事件（RR=1.80,95%CI 1.46~2.22,P<0.001）和严重不良事件（RR=1.48,95%CI 1.22~1.81,P<0.001）的风险较EGFR-TKIs单药组增加。其中联合治疗组患者蛋白尿、高血压和腹泻的发生显著增加。此外,亚组分析结果表明,联合治疗组中Ex19del（HR=0.62,95%CI 0.51~0.75,P<0.001）和Leu858Arg（HR=0.62,95%CI 0.51~0.75,P<0.001）突变的NSCLC患者获益相当。结论:一线EGFR-TKIs联合血管生成抑制剂可以显著延长晚期EGFR突变NSCLC患者的PFS。尽管联合组不良反应发生率增加,但毒性尚可耐受和管理。联合治疗可作为晚期EGFR突变NSCLC患者一线选择。