改进的亚硫酸氢钠测序法检测HepG2 RASSF1A基因CpG岛甲基化状态

目的 改进亚硫酸氢钠测序法，并检验改进后方法在甲基化检测中的可行性。方法 提取人肝癌细胞株HepG2基因组DNA，亚硫酸氢钠化学修饰，针对修饰后Ras相关家族1A基因（RASSF1A）启动子序列设计特异引物并结合沉降PCR扩增，T-A载体克隆、测序。结果 HepG2细胞RASSF1A基因启动子CpG岛的16个CpG位点均被甲基化。结论 改进后亚硫酸氢钠测序法能明显减少非特异性扩增，提高PCR效率，更适于基因甲基化状态的检测。     

肝癌细胞耐药诱导过程中过氧化物酶增殖物激活受体α的表达

目的研究阿霉素（adriamycin，ADM）诱导肝癌细胞（HepG2）耐药过程中过氧化物酶增殖物激活受体（PPARa）表达的变化及意义。方法通过梯度增加培养液中阿霉素的浓度，长期筛选培养，建立肝癌HepG2／ADM耐药细胞株。Western blot检测耐药细胞中多药耐药基因（MDRl）、PPARa蛋白的表达变化，RT-PCR检测耐药细胞中PPARa和CYP3A mRNA的表达变化。结果HepG2／ADM细胞是一个明确的多药耐药细胞模型，在耐药诱导过程中，MDR1表达上调，PPARa mRNA和蛋白的表达下降，CYP3AmRNA的表达也呈下降趋势。结论在耐药诱导过程中，PPARa表达的下降可能与HepG2细胞耐药的发生有关，其机制可能在于PPARa能影响MDR1和CYP3A的表达。     

全反式维甲酸通过内质网应激诱导N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶V受阻的人肝癌SMMC-7721细胞凋亡

目的初步探讨全反式维甲酸（all-trans-retinoic acid，ATRA）诱导N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶V（N—acetylglucosaminyltransferase V，GnT—V）表达受阻的人肝癌SMMC-7721细胞（AsGnT—V／SMMC-7721）发生凋亡与细胞中内质网应激的关系。方法利用RT-PCR检测ATRA处理前后AsGnT-V／SMMC-7721细胞中内质网应激关键分子GRP78（glucose regulated protein 78）、XBP1（X box binding protein 1）等的变化。并用Western blot检测ATRA处理前后AsGnT—V／SMMC-7721细胞中内质网应激相关凋亡途径中的重要分子CHOP（C／EBP homologus protein）、caspase-9、caspase-12以及caspase-3的变化。结果GRP78和XBP1的变化表明经ATRA处理后AsGnT-V／SMMC-7721细胞的内质网应激加剧了，而与内质网应激相关的凋亡分子CHOP、caspase-9、caspase-12以及caspase-3都发生了激活。结论ATRA诱导AsGnT—V／SMMC-7721细胞发生的凋亡与内质网应激有关。     

多克隆CNTF抗体对肉毒毒素引起肌麻痹超微结构的影响

目的研究多克隆睫状神经营养因子(c iliary neurotroph ic factor,CNTF)抗体对肉毒毒素(botu linum toxin,BTX)引起的肌麻痹的作用。方法10只新西兰兔,分别在双侧眼外肌肌腹和面部皮下注射A型肉毒毒素(botu linum toxin A,BTXA),注射后第4天在右侧眼外肌和面部皮下注射多克隆CNTF抗体,左侧相同部位注射等量生理盐水作为对照,在注射后14 d,行电镜观察双侧眼外肌和面肌的肌细胞、运动终板及神经纤维的改变。结果注射BTXA后14 d眼外肌和面肌的肌纤维均明显萎缩,线粒体肿胀,肌纤维结构无明显破坏;神经髓鞘板层松散,可见髓样小体,运动终板处可见清亮的兴奋性神经递质小泡增多密集。右侧注射CNTF组可见肌细胞核内移,胞质内线粒体肿胀聚集,肌细胞呈空泡样改变,局部肌丝断裂溶解,变性的肌细胞坏死崩解成细胞碎片;运动终板处也可见大量清亮小泡聚集,神经髓鞘增多。结论注射多克隆CNTF抗体后,与单纯注射BTXA者比较,局部肌细胞结构出现不可逆性破坏,延长了肌肉麻痹恢复时间,提示多克隆CNTF抗体可能延长BTX的肌麻痹作用。     

5-HT1A自身受体与抑郁症

5-羟色胺（5-HT）系统与抑郁症有关。5-HT神经元功能可被胞体5-HT1A自身受体负反馈所调节。5-HT1A自身受体的脱敏时间可能同抗抑郁药物2-3周的治疗起效潜伏期有关。研究开发5-HT1A自身受体选择性拮抗剂，将能起到加速和增强目前抗抑郁药物疗效的作用。本文就抑郁症5-HT1A自身受体脱敏的研究进展作一综述。     

不同产地不同品种丹参药材内在质量评价

目的考察不同产地不同品种丹参药材的质量。方法采用重量法测定醚浸出物和水浸出物,采用薄层扫描的方法测定丹参酮ⅡA的含量,采用紫外分光光度法测定了总酚酸类成分的含量。结果不同产地不同品种丹参药材的质量有差异,水溶性成分与脂溶性成分含量的相关性不大。结论应根据不同的应用目的在适宜的种植区选用不同的丹参品种从而达到对丹参药材的最佳利用。     

口服维安酯胶囊外涂维A酸乳膏治疗青春期痤疮40例体会

痤疮俗称“粉刺”，常见于青春发育期。由于雄激素分秘旺盛，皮脂腺过多堵塞毛囊皮脂腺口再加上细菌侵入引起炎症所致，是临床上常见的皮肤病。2003年1月～2004年1月，我们采用口服维胺酯胶囊，外涂维A酸乳膏，治疗观察40例病人，疗效满意，现报告如下。     

多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2的原核表达、纯化及酶活检测

目的：以人类多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶2（ppGalNAc-12）为研究对象，利用载体pGEX-5X-3在大肠杆菌（E．Coli）BL21中原核表达其编码序列，并对表达产物进行纯化、复性及酶活检测。方法：首先利用PCR技术从克隆载体pDONR201-T2得到ppGalNAc-T2全长编码序列，将其亚克隆至原核表达载体pGEX-5X-3，形成重组表达质粒pGEX-5X-3／T2。重组质粒转化大肠杆菌DH5α，测序鉴定后转化BL21，异丙基硫代半乳糖（IPTG）诱导后，表达产物为主要以包涵体形式存在的融合蛋白。对其复性后用谷胱甘肽-琼脂糖（Glutathione-Sepharose）4B亲和层析柱进行纯化。然后根据ppGalNAc-T2的催化功能，设计底物，建立酶促反应体系，利用高效液相色谱（HPLC）进行酶活分析。结果：成功构建了原核表达重组载体pGEX-5X-3／T2，通过蛋白质电泳检测到分子量约为90 kD的融合蛋白的表达，利用亲和层析得到纯化的酶蛋白，并经Western印迹得以验证。反应后体系上柱洗脱后出现酶促反应的产物洗脱峰。结论：成功构建了重组表达载体pGEX-5X-3／T2，ppGalNAc-T2伞长编码序列被成功表达、纯化及复性，检测到具有酶活性。     

蛋白激酶A催化微管相关蛋白tau磷酸化的研究

目的：研究蛋白激酶A（PKA）对微管相关蛋白tau的磷酸化作用。方法：采用免疫印迹技术，利用位点特异性、磷酸化依赖的tau蛋白抗体，检测PKA对tau蛋白磷酸化作用的位点特异性及磷酸化作用动力学。用双倒数作图，计算PKA催化tau磷酸化以及各个位点磷酸化的Km值，并结合培养细胞的实验，研究PKA对tau蛋白磷酸化作用的位点特异性。结果：PKA催化tau蛋白在Ser214，Ser262，Ser409三个位点磷酸化，而且各位点磷酸化作用的Km值不同，PKA对Ser214的Km值最低，即对Ser214位点的亲和性最高，催化其磷酸化的能力最强。在细胞实验中，也显示了PKA引起Ser214位点的磷酸化最明显。结论：PKA催化tau蛋白在Ser214，Ser262，Ser409三个位点磷酸化，其中Ser214是PKA催化tau磷酸化反应的最好位点。     

A型肉毒毒素用于口角歪斜和鼻唇沟不对称的研究

目的在面瘫患者健侧部分面肌中注射A型肉毒毒素用以矫正口角歪斜和不对称的鼻唇沟,以满足美容的需要。方法将2001年1月￣2005年12月来在门诊和住院的部分面瘫患者作为观察对象,除对照组外治疗组分别在健侧面肌中注射A型肉毒毒素,依据注射剂量随机分为5个治疗组:A组(各肌注射1.25U)、B组(各肌注射2.50U)、C组(各肌注射5.00U)、D组(降、提口角肌和颧大、小肌各注射2.50U,笑肌注射5.00U)和E组(降、提口角肌和颧大、小肌各注射5.00U,笑肌注射2.50U),3d后定期观测每例患者双侧口角到门齿中缝的距离差。结果除A组外,各治疗组的口角歪斜和鼻唇沟不对称均得到不同程度的纠正,注射剂量越大起效越快,持续时间越长,但表情动作受到的影响也略大。结论根据口角歪斜和鼻唇沟不对称的程度,在健侧面肌注射相应剂量的A型肉毒毒素,既可以较好地纠正面瘫患者的口角歪斜和鼻唇沟的不对称,又可以避免并发症的发生。