蛋白激酶A催化亚基差异性地调节tau外显子10的可变剪接

tau外显子10的可变剪接使得tau变异体含有3个或4个微管结合片段,分别称为3R-tau和4R-tau。正常人脑表达等量的3R-tau和4R-tau,它们的表达失衡可引起神经纤维退行性疾病。本文利用迷你tau基因,通过过表达和RNA沉默技术,研究了PKA的催化亚基（PKA-Cα）和（PKA-Cβ）对tau外显子10可变剪接的调节,发现PKA-Cα促进tau外显子10的编码,PKA-Cβ抑制外显子10的编码。这2种催化亚基在细胞内的定位也不尽相同,在HeLa细胞中PKA-Cα的定位以细胞核为主,而PKA-Cβ则以细胞浆为主。在阿尔茨海默病（AD）患者脑中PKA的活性和表达均下降,通过引起tau外显子10的可变剪接的失调,使得3R-tau和4R-tau的表达失衡,加速神经纤维退行性病变。     

O-GlcNAc糖基转移酶在原核和真核细胞中的表达和提纯

目的 :本文为进一步研究蛋白 O- Glc NAc糖基化修饰提供重要资源。方法 :为了探索制备纯化具有生物学活性的重组 OGT的有效方法 ,本文用大肠杆菌和 Hi5昆虫细胞表达并纯化具有活性的重组 OGT。携带人 OGTc DNA的 PET32 a质粒在大肠杆菌中表达出带有 1个 S- Tag的重组人 OGT融合蛋白 ,然后用与 S-蛋白质偶联的琼脂糖凝胶颗粒从细菌裂解液中亲和纯化 OGT融合蛋白。结果 :其纯化的 OGT在电泳中显现单一条带并具有生物活性 ,但其活性在洗脱后丧失。在 Hi5昆虫细胞中表达的鼠肝 OGT带有一 His6 tag,经镍离子螯合柱纯化后 ,其比活性达到 0 .88nmol· min- 1 · mg- 1 OGT。结论 :在这两个表达系统中制备重组 OGT各有利弊。     

重组O-GLcNAc糖基转移酶在昆虫细胞中的表达和纯化

蛋白质的 O- Glc NAc糖基化修饰是一种细胞核蛋白与细胞浆蛋白的蛋白质翻译后修饰。不同于膜蛋白和分泌蛋白的糖基化修饰 ,与蛋白质磷酸化修饰相似。催化蛋白质 O- Glc NAc糖基转移酶 ( OGT)已被克隆。用Hi5昆虫细胞系统表达并纯化了具有活性的重组 OGT。在 Hi5昆虫细胞中表达的鼠肝 OGT带有一 His 6标记片段。经镍离子螯合柱纯化后 ,其比活性达到 0 .88nmol· min- 1·m g- 1 OGT。因此本研究为进一步研究蛋白 O- Glc NAc糖基化修饰提供重要资源     

SPM阻留DNA片段解链状态的分析

用ＳＰＭ法分离基因ＣｐＧ岛的实验所获大量阻留片段中，含有很多非ＣｐＧ岛的序列，包括Ａｌｕ重复序列，为了进一步改进ＳＰＭ方法，最大限度驱除非ＣｐＧ岛的影响，对所有的ＳＰＭ阻留的ＤＮＡ片段进行热力学及其电泳行为分析，结果显示，所有ＤＮＡ片段均呈现不同形式的部分解链状态，有的ＤＮＡ片段有２个以上的解链区域，根据各解链区域解链温度差异的大小，有的在ＤＮＡ片段的两侧部分解链，的有在片段中央部分解链，有的既有     

蛋白激酶A催化微管相关蛋白tau磷酸化的研究

目的：研究蛋白激酶A（PKA）对微管相关蛋白tau的磷酸化作用。方法：采用免疫印迹技术，利用位点特异性、磷酸化依赖的tau蛋白抗体，检测PKA对tau蛋白磷酸化作用的位点特异性及磷酸化作用动力学。用双倒数作图，计算PKA催化tau磷酸化以及各个位点磷酸化的Km值，并结合培养细胞的实验，研究PKA对tau蛋白磷酸化作用的位点特异性。结果：PKA催化tau蛋白在Ser214，Ser262，Ser409三个位点磷酸化，而且各位点磷酸化作用的Km值不同，PKA对Ser214的Km值最低，即对Ser214位点的亲和性最高，催化其磷酸化的能力最强。在细胞实验中，也显示了PKA引起Ser214位点的磷酸化最明显。结论：PKA催化tau蛋白在Ser214，Ser262，Ser409三个位点磷酸化，其中Ser214是PKA催化tau磷酸化反应的最好位点。     

开设医学本科生PCR实验的教学体会

结合分子生物学中PCR实验的开设,从实验前的各项准备工作到学生实验的教学过程及实验课后的思考等方面进行分析和总结,得到一些实践体会,以期为今后的实验教学改革提供参考.     

PBL教学模式在生物化学教学中的应用效果

生物化学是医学基础教育的主干课程,由于其内容多、知识抽象、涉及面广,再加上传统教学方法一直只重视理论知识的讲解,而轻视甚至忽略了与临床的联系,致使该课程的教学效果一直不理想。基于问题式学习（PBL）是近年来受到广泛重视的一种教学方式,在理解PBL教育理念的基础上,结合生物化学本身的特点,将PBL教学法合理、有效地应用在生物化学教学上,有利于提高生物化学的教学效果。     

粒细胞集落刺激因子基因克隆,表达及免疫检测

目的：获得纯净的抗Ｇ－ＣＳＦ蛋白的抗体，用以鉴定、检测和纯化人Ｇ－ＣＳＦ。方法：将经过改造的粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）基因重组到ＰＷＲ－４５０－１载体上得到重组质粒，转化大肠杆菌，抽提纯化ＰＷＲ－４５０－ＧＣＳＦ融合蛋白，作为抗原用以免疫兔子，获得抗血清，并对抗血清进行初步纯化，检测其效价和特异性程度。结果：用ＥＬＩＳＡ方法和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ方法检测抗血清发现本实验所获得的抗血清和融合蛋白及ＰＷＲ－４５０－１均有专一性反应，有一定的特异性。     

生物化学教学过程中的一些思考

在生化教学实践中，发现较多学生缺乏主动思考和参与讨论的意识，习惯于老师的灌输，满足于听懂后的记忆，能应付考试即可。由此促使我们要深入思考教学过程中的一些问题。