不同中医临床证型下行型鼻咽癌组织细胞核蛋白质差异表达的初步研究

目的： 研究下行型鼻咽癌不同中医临床证型患者原发病灶组织细胞核差异表达蛋白质,为中医证型分类的科学性提供依据。方法：采用双向凝胶电泳及基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法 (MALDI-TOF-MS)对下行型鼻咽癌火毒困结型、气阴两虚型和气血凝结型患者的鼻咽癌组织细胞核蛋白进行分离和表达谱研究,利用生物信息学方法鉴定差异蛋白质。结果：与下行型鼻咽癌气阴两虚型细胞核蛋白点相比,气血凝结型有28个蛋白点表达上调、12个蛋白点表达下调,火毒困结型有9个点表达上调,19个蛋白点表达下调;与下行型鼻咽癌气血凝结型细胞核蛋白点相比,火毒困结型有25个蛋白点表达上调、18个蛋白点表达下调。MALDI-TOF-MS成功鉴定出3个差异蛋白质,来源于气血凝结型鼻咽癌患者的瘤组织细胞不均一性核糖核蛋白H (heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H,hnRNP H)和微管蛋白β链1 (tubulin beta-1 chain,TUB1)表达上调,来源于火毒困结型鼻咽癌患者瘤细胞的核蛋白Ⅵ型胶原蛋白α2链 (type Ⅵ collagen alpha 2 chain,COLⅥA2)前体表达下调。结论：下行型气血凝结型鼻咽癌患者的瘤细胞核蛋白hnRNP H和TUB1表达上调,下行型火毒困结型鼻咽癌患者的瘤细胞核蛋白中COLⅥA2前体表达下调。     

健脾解毒方含药血清通过mTOR信号通路#br# 抑制人大肠癌SW48细胞增殖

目的：研究健脾解毒方含药血清对人大肠癌SW48细胞增殖的影响及作用机制。方法：采用水提法制作健脾解毒方粗提取物,超高效液相-高分辨飞行时间质谱法分析健脾解毒方粗提取物的主要活性成分,利用血清药理学方法制备低、中、高浓度健脾解毒方含药血清,MTT法检测人结肠癌SW48细胞增殖活性,运用流式细胞术检测细胞周期,RT-PCR技术检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR) mRNA表达,Western 印迹技术检测磷酸化(phospho,P)-mTOR,P-P53和P21的蛋白表达。结果：通过高分辨质谱结合对照品数据相关分析,对健脾解毒方粗提取物中7个主要成分(毛蕊异黄酮苷、黄芪甲苷、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、甘草酸、芹菜素、白术内酯II)进行了鉴定及分析;健脾解毒方中、高剂量含药血清对SW48细胞有明显抑制增殖作用;健脾解毒方中、高剂量含药血清使SW48细胞周期阻滞在G1期;健脾解毒方含药血清能够下调的mTOR mRNA及P-mTOR蛋白表达,上调P-P53和P21蛋白的表达。结论：健脾解毒方可能通过mTOR-P53-P21途径抑制人结肠癌SW48细胞的增殖,这可能是健脾解毒方治疗结肠癌的作用机制之一。     

野茉莉叶水提物抑菌、抗炎及止咳作用的实验研究

目的：探讨野茉莉叶水提物抑菌、抗炎及止咳作用,验证其相关功效,为该药的临床应用提供参考依据。方法：通过体外抑菌实验观察其抑菌作用,通过大鼠棉球植入实验、足趾肿胀实验和小鼠耳廓肿胀实验等评价其抗炎作用,通过小鼠氨水引咳实验评价其镇咳作用。结果：野茉莉叶水提物可抑制大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌、沙门氏菌及金黄色葡萄球菌的生长,但对白色念珠菌的生长无抑制作用;野茉莉叶水提物高剂量明显降低大鼠棉球植入肉芽肿净重;低、高剂量均明显甚至显著抑制角叉菜胶引起的大鼠足趾肿胀,并能明显甚至显著改善二甲苯涂布引起的耳廓肿胀;中、高剂量均显著延长氨水引发的咳嗽潜伏期,低、中、高剂量组均显著减少氨水引发的咳嗽次数。结论：本实验条件下,野茉莉叶水提物具有抑菌、抗炎及止咳的功能,与其相关的中医临床功效及主治相符,为其临床应用提供了一定的实验依据。     

六味地黄汤含药血清对HK-2细胞PHD2/HIF-1α信号途径的影响

目的以缺氧诱导的HK-2细胞为研究对象,探讨脯氨酸羟化酶2/缺氧诱导因子1α(PHD2/HIF-1α)信号途径对肾间质纤维化的影响,以及六味地黄汤含药血清干预作用。方法 40只SPF级雄性SD大鼠分为空白组和给药组,每组20只,空白组以10 m L/(kg·d)生理盐水,给药组以67.5 g/(kg·d)六味地黄汤灌胃连续1周,腹主动脉取血,离心后分离血清。体外培养HK-2细胞,将实验分为空白对照组(10%胎牛血清)、正常血清组(10%正常大鼠血清)、氯化钴(Co Cl2)处理组(150μmol/LCo Cl2+10%正常大鼠血清)和含药血清组(150μmol/LCo Cl2+10%六味地黄汤含药血清)。体外培养HK-2,分组处理24 h后,用Western Blot法和RT-PCR法分别检测六味地黄汤含药血清对缺氧诱导的HK-2细胞中PHD2、HIF-1α、结缔组织生长因子(CTGF)的蛋白水平和mRNA表达的影响。结果与正常血清组比较,Co Cl2处理组HK-2细胞中PHD2的蛋白水平和mRNA表达均降低(P0.05),而HIF-1α、CTGF的蛋白水平和mRNA表达均升高(P0.05);与Co Cl2处理组比较,含药血清组HK-2细胞中PHD2的蛋白水平和mRNA表达均升高(P0.05),而HIF-1α、CTGF的蛋白水平和mRNA表达均降低(P0.05)。结论 PHD2/HIF-1α信号途径参与肾间质纤维化,六味地黄汤可能通过上调PHD2的表达,促进HIF-1α的降解,后者下调CTGF的表达,从而抑制肾间质纤维化。     

出入院护理综合性实验对护生人文关怀能力的影响研究

人文关怀能力是护理人员秉承人性、德行,融体力、智力、知识、观念、情感、态度、意志为一体的内在修养外化为自觉地创造性地服务于患者的实际工作本领与才能,是护理人员必须具备的职业能力,是综合护理能力的核心能力之一[1].调查研究显示,无论是临床护士还是护生其人文关怀能力均不高[2-3].有研究指出,要使护理的核心价值得以凸显,人文关怀得以实现,必须从护理教育人手[4].由此可见,培养提高护生的人文关怀能力是当前护理教育面临的巨大挑战,更是一个亟待解决的问题.     

补阳还五汤有效组分对肺癌细胞增殖及转移的影响

目的：探究补阳还五汤有效组分对肺癌细胞增殖、转移的影响及可能的通路机制。方法：将人肺癌H460细胞分为对照组、苷类组分组,对照组细胞加入10ml/kg蒸馏水,苷类组分组细胞分别加入0.04g/ml、0.08g/ml、0.16g/ml的补阳还五汤药液10ml/kg分别作为实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组。采用MTT法检测各组细胞处理前与处理后1、2、3d受抑制率,细胞划痕实验检测细胞转移能力,RT-PCR法、Western Blot法检测细胞中上皮-间充质转化（EMT）下游基因mRNA和蛋白表达水平。结果：补阳还五汤各含药血浆浓度为10%时,与对照组比较,可显著抑制H460细胞增殖;且随着浓度增加,抑制作用也增强;3个有效成分合用血浆的IC₅₀低于苷组分、黄芪甲苷、苦杏仁苷、芍药苷组（P<0.05）。实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组细胞增殖率、迁移率随处理时间及药物浓度的增加而降低。与对照组比较,实验Ⅰ组、实验Ⅱ组、实验Ⅲ组H460细胞G0/G1期细胞增多（P<0.05）,S期和G2/M期细胞减少（P<0.05）;实验Ⅲ组H460细胞G0/G1期细胞多于实验Ⅰ组、实验Ⅱ组（P&l...     

前列泌尿栓治疗慢性前列腺炎的多中心、阳性药及安慰剂对照临床试验研究

目的评价前列泌尿栓治疗慢性前列腺炎的有效性和安全性。方法多中心、随机、双盲、阳性药及安慰剂对照临床设计。240例湿热瘀血蕴阻证慢性前列腺炎患者按2∶1∶1的比例随机分为治疗组、安慰剂对照组和阳性对照组。治疗组120例,应用前列泌尿栓,肛内给药,1次1粒,1日1次;阳性对照组60例,应用前列安栓,肛内给药,1次1粒,1日1次;安慰剂对照组60例,应用安慰剂,肛内给药,1次1粒,1日1次,疗程为4周。以美国国立卫生院前列腺炎症状评分（NIH-CPSI）、慢性前列腺炎中医证候评分作为主要疗效评价指标。结果①4周时前列泌尿栓组、前列安栓组、安慰剂组NIH-CPSI评分分别为：16.41±5.33、14.81±4.65、12.21±5.34,较治疗前分别减少11.01±5.37、6.90±4.66、5.51±4.98。三组NIH-CPSI评分下降幅度不等（P〈0.05）,前列泌尿栓组下降幅度最大,前列安栓次之,安慰剂组最小。前列泌尿栓组对降低NIH-CPSI评分疗效优于前列安栓组,优于安慰剂组。②4周时,三组患者中医证候总评分的下降值分别为：安慰剂组5.75±4.76、前列安栓组9.53±4.29、前列泌尿栓组12.13±7.13。三组间中医证候总评分减少的幅度不同（P〈0.05）。前列泌尿栓对改善中医证候疗效优于前列安栓及安慰剂。③4周时,前列泌尿栓、前列安栓、安慰剂三组的临床总有效率分别为90.83%、85.00%、33.33%;两两比较结果显示：前列泌尿栓组临床总有效率优于安慰剂组（P〈0.05）,与前列安栓相似（P〉0.05）。④三组间不良事件发生率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论前列泌尿栓治疗慢性前列腺炎安全、有效,值得进一步研究、推广。     

巨噬细胞条件性GP73基因敲除小鼠的构建及鉴定

目的构建并鉴定巨噬细胞条件性高尔基体蛋白73(golgi protein 73,GP73)基因敲除小鼠,为进一步研究GP73调控巨噬细胞功能影响肿瘤性疾病的发生发展提供动物模型。方法基于Cre/LoxP重组系统构建GP73^flox/+小鼠,通过GP73 ^flox/+小鼠雌雄自交得到GP73^flox/flox小鼠。将GP73^flox/flox小鼠与Lyz2-Cre⁺小鼠杂交,得到GP73^flox/+Lyz2-Cre⁺小鼠,再将其与GP73^flox/flox小鼠杂交,最终得到基因型为GP73^flox/flox Lyz2-Cre⁺的巨噬细胞条件性GP73基因敲除小鼠(MKO小鼠);以GP73^flox/flox Lyz2-Cre^-小鼠作为对照组小鼠(GP73^fl/fl小鼠)。采用PCR和琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠fl...     

肺心汤通过调控AMPK/mTOR信号通路抑制自噬对低氧性肺动脉高压大鼠的保护作用

目的 探究肺心汤通过调控腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）信号通路对低氧性肺动脉高压（hypoxic pulmonary hypertension,HPH）大鼠的治疗作用及机制。方法 36只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、西地那非组以及肺心汤低、中、高剂量组。除正常组外,将其余5组置于氧气浓度为10.0%±0.5%的低氧舱内造模28 d,每天8 h,造模同时灌胃给药。4周后检测大鼠心肺血流动力学指标[右心室收缩压（right ventricular systolic pressure,RVSP）,右心室肥厚指数（right ventricular hypertrophy index,RVHI）,肺动脉加速时间/肺动脉射血时间（pulmonary acceleration time/pulmonary ejection time,PAT/PET）、三尖瓣环收缩期位移（tricuspid annul...     

基于lncRNA/mRNA 表达谱探讨百事乐胶囊调控慢性应激抑郁症模型大鼠海马损伤的机制

目的 基于长链非编码RNA(lncRNA)/信使RNA(mRNA)表达谱探讨百事乐胶囊(贯叶金丝桃、人参、姜黄)调控慢性应激抑郁症模型大鼠海马损伤的可能机制。方法 将SD大鼠随机分为空白组、模型组及百事乐胶囊高、低剂量组(2.88、0.72 g·kg^-1),每组8只;采用28 d慢性温和不可预测性应激联合孤养的方式构建抑郁症大鼠模型,造模同时灌胃给药,每日1次。采用开野试验和新奇摄食试验评价大鼠模型的抑郁样行为;采用ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的水平;采用高通量芯片测序筛选出组间差异的海马组织lncRNA/mRNA表达谱,预测差异表达的lncRNA靶基因,并取lncRNA、mRNA的差异共集基因;对差异共集基因进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析;采用Western Blot法验证差异性蛋白胰岛素生长因子2(Igf2)、核糖体蛋白L36(Rpl36)的表达情况。结果 (1)与空白组比较,模型组大鼠4 min内的水平、垂直活动量均显著降低(P<0.01),摄食潜伏期显著延长(P<0.01),血清TNF...