不同中医临床证型下行型鼻咽癌组织细胞核蛋白质差异表达的初步研究

目的： 研究下行型鼻咽癌不同中医临床证型患者原发病灶组织细胞核差异表达蛋白质,为中医证型分类的科学性提供依据。方法：采用双向凝胶电泳及基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法 (MALDI-TOF-MS)对下行型鼻咽癌火毒困结型、气阴两虚型和气血凝结型患者的鼻咽癌组织细胞核蛋白进行分离和表达谱研究,利用生物信息学方法鉴定差异蛋白质。结果：与下行型鼻咽癌气阴两虚型细胞核蛋白点相比,气血凝结型有28个蛋白点表达上调、12个蛋白点表达下调,火毒困结型有9个点表达上调,19个蛋白点表达下调;与下行型鼻咽癌气血凝结型细胞核蛋白点相比,火毒困结型有25个蛋白点表达上调、18个蛋白点表达下调。MALDI-TOF-MS成功鉴定出3个差异蛋白质,来源于气血凝结型鼻咽癌患者的瘤组织细胞不均一性核糖核蛋白H (heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H,hnRNP H)和微管蛋白β链1 (tubulin beta-1 chain,TUB1)表达上调,来源于火毒困结型鼻咽癌患者瘤细胞的核蛋白Ⅵ型胶原蛋白α2链 (type Ⅵ collagen alpha 2 chain,COLⅥA2)前体表达下调。结论：下行型气血凝结型鼻咽癌患者的瘤细胞核蛋白hnRNP H和TUB1表达上调,下行型火毒困结型鼻咽癌患者的瘤细胞核蛋白中COLⅥA2前体表达下调。     

降逆和气法治疗胃食管反流性咽喉炎24例总结

目的：探讨降逆和气法治疗胃食管反流性咽喉炎的临床疗效。方法：将48例胃食管反流性咽喉炎患者随机分为治疗组和对照组各24例。对照组给予雷贝拉唑钠肠溶片及吗丁啉口服,治疗组采用降逆和气法治疗,方选旋覆代赭汤合半夏泻心汤加减。两组均用药4周后观察疗效。结果：总有效率治疗组为87．5％,对照组为58．3％,两组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;两组治疗后临床症状积分较治疗前均明显降低,差异均有统计学意义（P〈0．01）,治疗后组间比较差异亦有统计学（P〈0．01）。结论：降逆和气法治疗胃食管反流性咽喉炎疗效显著。     

外源突变型p53和潜伏膜蛋白1基因在转基因鼠不同器官组织中的表达

目的:观察转基因小鼠鼻腔、鼻咽、肺、食道、胃、大肠、肝、肾、脾中外源突变型p53m t和潜伏膜蛋白1基因的表达情况。方法:实验于2005-03/04在湖南中医学院中西医结合系基础研究室完成。选取4月龄转p53m t和潜伏膜蛋白1基因F0代小鼠1只,以正常同龄未转基因C57BL/6J小鼠4只作为对照。采用免疫组化分别检测转基因鼠和对照鼠鼻腔、鼻咽、肺、食道、胃、大肠、肝、肾、脾中p53m t和潜伏膜蛋白1基因的表达强度,用图像分析系统测定阳性反应物的平均灰度值。系统设定白色最大灰度为256,黑色最小灰度为0。灰度值越小,代表阳性反映程度越高。结果:实验纳入转基因鼠1只,对照鼠4只,均进入结果分析。①蛋白质阳性表达信号的定位分布:转基因鼠p53m t和潜伏膜蛋白1基因的免疫组化阳性信号均为棕黄色的颗粒或斑块,表达量高,p53m t蛋白绝大部分分布于细胞膜和胞浆内,少数位于细胞核中。对照鼠p53mt蛋白在组织中呈弱表达,潜伏膜蛋白1的蛋白阳性信号主要位于上皮细胞的细胞膜和胞浆中。②转基因鼠和对照鼠不同组织部位中p53m t基因表达的平均灰度值:转基因鼠食道、肝、脾中平均灰度值较高(131.75±17.25,135.15±13.14,139.42±11.55),在鼻腔黏膜、鼻咽组织、大肠中平均灰度值较低(96.61±12.43,109.26±9.90,109.45±6.72)。除了胃、脾外,各组织部位与对照鼠比较均有显著差异(P<0.05)。③转基因鼠和对照鼠不同组织部位中潜伏膜蛋白1基因表达的平均灰度值:转基因鼠鼻咽部平均灰度值最低(106.75±19.57),其次为鼻腔、食道、肺、胃,而在大肠、肝、脾中表达水平较高(152.29±12.17,134.98±17.79,158.35±10.75)。除鼻腔、大肠、肝、脾外,各组织部位中潜伏膜蛋白1基因的表达水平与对照鼠比较均有显著差异(P<0.05)。④转基因鼠不同组织部位中p53mt基因与潜伏膜蛋白1基因表达水平的相关性分析:转基因鼠鼻腔黏膜、鼻咽组织、食道、肺、胃、大肠、肝、肾、脾中潜伏膜蛋白1基因表达水平和p53m t基因表达水平无相关性(相关系数｜r｜分别为0.744,0.459,0.589,0.722,0.258,0.252,0.337,0.111,0.209)。结论:外源突变型p53m t基因在转基因鼠鼻腔、鼻咽和大肠中表达水平较高,潜伏膜蛋白1基因在鼻咽组织中表达呈最高。两种基因在不同器官组织部位的表达均存在显著性差异,尤以潜伏膜蛋白1基因表达的组织特异性较强,但两种基因的表达不存在相关性。     

转基因雄性小鼠不育原因分析

目的研究转基因雄性小鼠不育的主要原因。方法以野生型C57BL／6J作为对照，比较检测健康性成熟雄性转基因小鼠的睾丸、附睾、前列腺、提肛肌的脏器系数和精子数、精子活动度、活精率、精子畸形率；观察睾丸组织病理学变化及睾丸组织葡萄-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）、乳酸脱氢酶（LDH）、乳酸脱氢酶同工酶（LDH-X）及琥珀酸脱氢酶（SDH）的活性。结果与正常非转基因对照鼠相比，转基因鼠睾丸的脏器系数与正常对照鼠相接近，附睾、提肛肌的脏器系数显著降低。精子数、直线运动精子数显著降低（P〈0．01）；转基因鼠睾丸组织曲细精管变薄，生精细胞排列不整齐，层次减少（2层），上皮部分有变性，精原细胞、初级精母细胞分裂异常，精子形成减少；G-6-PD、LDH、LDH-X及SDH的活性均显著低于对照鼠。结论外源基因整合后，引起睾丸组织酶活性下降，影响各细胞的生理、生化功能，进而引起睾丸发育严重障碍，精子减少和活动能力降低而导致不育。     

益气养阴活血解毒方药联合化疗减少非小细胞肺癌颅内转移的效果观察

目的观察益气养阴活血解毒方联合化疗减少非小细胞肺癌颅内转移的效果。方法以益气养阴活血解毒方联合化疗治疗32例中、晚期非小细胞肺癌患者,并与化疗组进行对照,观察2组病人颅内转移情况。结果益气养阴活血解毒方联合化疗组颅内转移率为18.7%明显低于化疗组的34.4%(P<0.05)。结论益气养阴活血解毒方具有抑制肺癌颅内转移的作用,其抑制转移的机理有待进一步探讨。     

鼻咽癌患者初诊证型的肿瘤转移相关基因活性表达特性

目的探讨鼻咽癌患者初诊证型与其鼻咽病灶癌组织中肿瘤转移相关基因活性表达的相关性。方法对41例经病理确诊的初诊鼻咽癌患者进行辨证分型,同时检测其鼻咽病灶活检标本中肿瘤转移相关基因nm23-H1和VEGF165活性水平,分析nm23-H1、VEGF165基因表达活性与初诊证型的相关性。结果气阴两虚型组鼻咽原发病灶活检标本nm23-H1表达明显低于另2组,而VEGF165表达则明显高于另2组。鼻咽癌颅内侵犯型的原发灶瘤组织中肿瘤转移抑制相关基因nm23-H1呈低表达。结论气阴两虚型鼻咽癌初诊患者的鼻咽原发灶瘤组织中nm23-H1表达下调,VEGF165表达上调,与该证型增大的颅内侵犯趋势和预后不良发病机制密切相关。     

重组质粒pLMP1-p53mt在人鼻咽癌HNE1和人宫颈癌HeLa细胞中的表达分析

目的:研究重组质粒pLMP1-p53mt中EB病毒LMP1基因和突变型p53(p53mt)基因在HNE1和HeLa细胞中的体外表达。方法:体外培养人鼻咽癌细胞株HNE1和人宫颈癌细胞株HeLa,采用脂质体lipofectAMINETM2000介导将重组质粒pLMP1-p53mtDNA转染细胞,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Sourthernblot法分析p53mt基因和LMP1基因的表达情况。结果:经重组质粒pLMP1-p53mt转染的HNE1和HeLa细胞中检测到了p53mt基因和LMP1基因的表达。结论:重组质粒pLMP1-p53mt的LMP1基因和p53mt基因能分别在EDL-2启动子和CMV启动子控制下表达。该质粒可进一步用于转基因动物的制备和基因功能研究。     

鼻咽癌患者初诊中医证型与病灶颅内侵犯潜力的相关性

目的 探讨初诊鼻咽癌患者中医证型与其鼻咽原发病灶颅内侵犯潜力的相关性。方法 对50例初诊鼻咽癌患者进行辨证分型,按常规进行治疗,然后随访1年以上,分析初诊中医证型与鼻咽原发病灶颅内侵犯潜力的相关性。结果 气阴两虚型鼻咽癌初诊患者于确诊后1年余时间内,其颅内侵犯的发生率明显高于其他证型患者,组间差异比较,差异有显著性（P〈0．01）。结论 气阴两虚型鼻咽癌初诊患者较气血凝结型、火毒困结型有更高的颅内侵犯机率。     

外源突变型p53和潜伏膜蛋白1基因在转基因鼠不同器官组织中的表达

目的：观察转基因小鼠鼻腔、鼻咽、肺、食道、胃、大肠、肝、肾、脾中外源突变型p53mt和潜伏膜蛋白1基因的表达情况.方法：实验于2005-03/04在湖南中医学院中西医结合系基础研究室完成.选取4月龄转p53mt和潜伏膜蛋白1基因F0代小鼠1只,以正常同龄未转基因C57BL/6J小鼠4只作为对照.采用免疫组化分别检测转基因鼠和对照鼠鼻腔、鼻咽、肺、食道、胃、大肠、肝、肾、脾中p53mt和潜伏膜蛋白1基因的表达强度,用图像分析系统测定阳性反应物的平均灰度值.系统设定白色最大灰度为256,黑色最小灰度为0.灰度值越小,代表阳性反映程度越高.结果：实验纳入转基因鼠1只,对照鼠4只,均进入结果分析.①蛋白质阳性表达信号的定位分布：转基因鼠p53mt和潜伏膜蛋白1基因的免疫组化阳性信号均为棕黄色的颗粒或斑块,表达量高,p53mt蛋白绝大部分分布于细胞膜和胞浆内,少数位于细胞核中.对照鼠p53mt蛋白在组织中呈弱表达,潜伏膜蛋白1的蛋白阳性信号主要位于上皮细胞的细胞膜和胞浆中.②转基因鼠和对照鼠不同组织部位中p53mt基因表达的平均灰度值：转基因鼠食道、肝、脾中平均灰度值较高（131.75&;#177;17.25,135.15&;#177;13.14,139.42&;#177;11.55）,在鼻腔黏膜、鼻咽组织、大肠中平均灰度值较低（96.61&;#177;12.43,109.26&;#177;9.90,109.45&;#177;6.72）.除了胃、脾外,各组织部位与对照鼠比较均有显著差异（P＜0.05）.③转基因鼠和对照鼠不同组织部位中潜伏膜蛋白1基因表达的平均灰度值：转基因鼠鼻咽部平均灰度值最低（106.75&;#177;19.57）,其次为鼻腔、食道、肺、胃,而在大肠、肝、脾中表达水平较高（152.29&;#177;12.17,134.98&;#177;17.79,158.35&;#177;10.75）.除鼻腔、大肠、肝、脾外,各组织部位中潜伏膜蛋白1基因的表达水平与对照鼠比较均有显著差异（P＜0.05）.④转基因鼠不同组织部位中p53mt基因与潜伏膜蛋白1基因表达水平的相关性分析：转基因鼠鼻腔黏膜、鼻咽组织、食道、肺、胃、大肠、肝、肾、脾中潜伏膜蛋白1基因表达水平和p53mt基因表达水平无相关性（相关系数｜r｜分别为0.744,0.459,0.589,0.722,0.258,0.252,0.337,0.111,0.209）.结论：外源突变型p53mt基因在转基因鼠鼻腔、鼻咽和大肠中表达水平较高,潜伏膜蛋白1基因在鼻咽组织中表达呈最高.两种基因在不同器官组织部位的表达均存在显著性差异,尤以潜伏膜蛋白1基因表达的组织特异性较强,但两种基因的表达不存在相关性.     

鼻咽癌原发病灶肿瘤细胞核蛋白提取方法的建立和优化

目的鼻咽癌细胞蛋白组分复杂,分离并分析其细胞核蛋白有助于进行肿瘤细胞蛋白质组学研究。文中建立并优化从原发鼻咽癌活检组织标本中提取肿瘤细胞核蛋白的方法。方法采用差速离心结合蔗糖密度梯度离心方法分离和富集鼻咽癌患者活检组织中肿瘤细胞的细胞核,用甲醇/三氯甲烷法和丙酮沉淀法提取核蛋白,用Western blot方法鉴定细胞核蛋白。结果分离细胞核和提取核蛋白至少需要200mg鼻咽癌组织。用差速离心和蔗糖密度梯度离心方法进行细胞核抽提,用甲醇/三氯甲烷和丙酮沉淀法提取的细胞核蛋白具有较高纯度,基本无其他细胞器污染,可用于鼻咽癌原发病灶中细胞核蛋白的提取分离。结论建立了从鼻咽癌原发病灶中提取细胞核蛋白的方法,用于鼻咽癌细胞核蛋白质组学研究。