LAK细胞对粒单系祖细胞集落产率的影响

近年来,有关LAK细胞的研究已成为免疫学较活跃的领域之一。研究的焦点主要集中在LAK细胞对肿瘤的杀伤作用及其临床应用的探索上。研究结果已证实,LAK细胞加白细胞介素-2(IL-2)疗法对肿瘤患者的造血     

雌激素对实验性自身免疫性脑脊髓炎的保护作用

目的 检测雌激素在小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)中的预防性治疗作用并初步探讨其体内作用机制.方法 用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG35-55)和完全弗氏佐剂(CFA)免疫C57BL/6J小鼠制备EAE模型;雌激素于建模始每日皮下注射50 μmol/L进行治疗,通过发病指数评分、脊髓病理分析、炎症因子水平检测,并应用流式细胞仪(FACS)及实时荧光定量PCR(qPCR)评价治疗效果;进一步通过分析小鼠脾细胞及脊髓相关功能分子CD4/PD-l、CD19/PD-L1、CD4/CD25/Foxp3、CD19/CD21/CD23及CD 19/CD5/CDl dhigh的表达变化,探讨雌激素可能的作用机制.结果 雌激素预防性治疗可有效延缓EAE小鼠的发病,减轻脱髓鞘病变.病理结果显示,雌激素治疗能减少小鼠脊髓组织炎性细胞的浸润,同时下调外周炎性因子TNF-a及IL-17A的分泌表达(P＜0.01);与模型组相比,雌激素治疗下调T淋巴细胞表面活化分子CD69的表达(P＞0.05)并可显著上调CD4+T细胞表面PD-1的表达(P＜0.05);同时,雌激素治疗后PD-1的配体CD19+B细胞表面PD-L1的表达明显上调(P＜0.01),脾细胞中CD19+CD21highCD23low(P＜0.01)及CD19+CD5+CD1dhigh(P＜0.01)的比例也有不同程度的升高,但对脾细胞中CD4+CD25Toxp3*的表达无明显作用.结论 雌激素预防性治疗可延缓EAE小鼠的发病进程,其作用机制可能与上调PD-1/PD-L1通路并上调调节性B细胞水平有关.     

Sonic hedgehog在小鼠胚胎下颌突Meckel＇s软骨发育过程中的表达

目的：研究Sonic hedgehog（Shh）基因在小鼠胚胎颌面部Meckel＇s软骨发育不同阶段的表达,探讨Shh基因在下颌骨体发育骨化中的功能。方法：利用原位杂交和免疫组化技术检测Shh基因mRNA在小鼠胚胎11～14.5 dpc（days post coitum）阶段下颌突Meckel＇s软骨中的表达情况。结果：在颌面形成的早期阶段（11～12.5 dpc）,Shh基因mRNA和蛋白在Meckel＇s软骨有表达且有增强趋势,但在颌面发育完成（14.5 dpc）后表达消失。结论：Shh基因可能参与下颌骨体早期发育。     

SARS-CoV S2蛋白基因的克隆及其在Vero E6细胞中的表达

目的克隆人SARS病毒S2蛋白分子的编码序列,并在VeroE6细胞上获得表达.方法从人SARS病毒cDNA文库中用PCR技术克隆编码SARS病毒S2蛋白的片段.将它插入质粒载体PVAXl中构建重组S2-pVAXl真核表达载体,并对插入片段序列进行测序.采用脂质体法转染VeroE6细胞,用Western blotting检测SARS-CoV S2蛋白的表达情况.结果用PCR方法扩增出一个1 845bp的基因片段,并插入pVAXl载体中,成功构建出重组S2表达载体,经测序证实克隆的S2片段阅读框正确完整.将其转染的Vero E6细胞经Western Blotting检测获得一条特异性目的蛋白条带.结论成功克隆基因并获得表达S2分子的Vero E6细胞系.     

RNA干扰能有效抑制SARS相关冠状病毒复制

基于RNA干扰可抑制HIV等病毒的事实[1],本课题组构建了针对SARS病毒的、能表达小发夹结构RNA的siRNA质粒,利用RNA干扰有效抑制了该病毒的复制.     

hOP-1全长基因克隆及真核表达载体的构建

目的证实人牙乳头细胞中OP-1的表达,获得hOP-1全长基因及其高效真核表达载体.方法提取人牙乳头细胞总RNA,反转录合成cDNA,以特异性引物扩增hOP-1全长基因并克隆入T载体,筛选阳性克隆进行序列测定后.构建高效真核表达载体pCI/OP-1并筛选鉴定.结果 PCR扩增得到一特异性的约1 300 bp的片段,序列测定结果表明与国外已发表的序列完全一致.构建的pCI/OP-1质粒,用于基因转染纯度较好.结论人牙乳头细胞中首次克隆到hOP-1全长基因,并构建获得该基因高效真核表达载体.     

异烟肼致肝脏毒性的蛋白质组学分析

目的:应用蛋白质组学技术研究异烟肼致大鼠肝脏损伤时肝脏蛋白质表达谱的变化,为从分子水平上寻找毒性损伤标志物以及阐明异烟肼毒性机制奠定基础。方法:将Wistar大鼠随机分为生理盐水正常对照组和异烟肼组(400 mg.kg-1),分别连续灌胃14 d后处死大鼠,提取肝脏总蛋白,双向凝胶电泳分离蛋白质组成分,采用考马斯亮蓝R-250染色,经ImageMaster2D Platinum5.0软件分析比较两组图谱,并对差异蛋白斑点进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALD-TOF-MS)分析鉴定。结果:发现11个差异有统计学意义的蛋白质点,鉴定出8个蛋白,其中,异烟肼处理组比对照组表达升高的蛋白质有鸟氨酸转氨酶、葡萄糖调节蛋白、乙醛脱氢酶和3α-羟甾类脱氢酶,比对照组表达降低的蛋白质有抗氧化酶B166、谷胱苷肽转硫酶、醛铜还原酶和碳酸酐酶。结论:异烟肼可能造成肝脏抗氧化系统和氧化应激异常,这对阐明异烟肼的肝损伤机制具有十分重要的作用。     

对曲古抑菌素A敏感的人肺腺癌细胞株的初步筛选

目的初步筛选不同p53表达型肺癌细胞株对曲古抑菌素A（TSA）敏感性不同的影响因素。方法分别以体外药物敏感试验（MTT法）、流式细胞术观察TSA处理3种肺癌细胞株（H1299为p53缺失型,H322为p53变异型,A549为p53野生型）后,其生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等指标的变化;用Western blot法检测3种细胞的人类表皮生长因子受体2（HER2）表达水平。结果TSA对3种细胞均有抑制作用,在96h时对A549的IC50抑制作用明显低于对H1299和H322的IC50（P〈0.05）,A549细胞凋亡也明显多于H1299和H322的细胞凋亡（P〈0.05）。3种细胞株HER2蛋白表达水平由高到低依次为H322、A549和H1299,与TSA的IC50值之间无相关性。结论TSA对p53不同表达型人肺腺癌细胞株均有生长抑制作用,肺腺癌细胞株p53的不同表达型可能对TSA的敏感性产生影响,而HER2的表达强度不影响TSA的敏感性。     

hIL-6及其拮抗肽在多发性骨髓瘤中的应用

人白细胞介素-6(hIL-6)在多发性骨髓瘤(MM)的发病机制中起着十分重要的作用.针对IL-6类拮抗剂(如抗IL-6单抗、IL-6及IL-6R突变体等)在临床应用上的局限性,基于IL-6·IL-6R相互作用设计的拮抗肽显示出良好抑制IL-6生物学功能的拮抗活性,从而为MM的发病机制与临床治疗研究提供了新的策略和途径.