StarburstTM Polyamidoamine Dendrimers介导的绿色荧光蛋白基因在小鼠体内的表达分布及对恶性疟DNA 疫苗ES312免疫原性的影响

目的研究StarburstTM Polyamidoamine(PAMAM)dendrimers介导绿色荧光蛋白基因在小鼠体内的表达分布及对恶性疟DNA疫苗ES312免疫原性的影响.方法经股四头肌给小鼠注射StarburstTM PAMAM dendrimers与绿色荧光蛋白基因或恶性疟DNA疫苗ES312的复合物.通过流式细胞术、Western blot和间接免疫荧光方法检测绿色荧光蛋白的表达分布和表达量.用ELISA方法检测恶性疟DNA疫苗ES312的免疫原性.结果在注射StarburstTMPAMAM dendrimers/DNA复合物后2 h～7 d内,StarburstTM PAMAM dendrimers携带的绿色荧光蛋白基因的表达在小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉中均能被检测到,在肾总蛋白中所占百分比最高,且各器官管腔内皮细胞中的绿色荧光蛋白表达量较高.小鼠的脑和肾中,在StarburstTM PAMAM dendrimers的存在下,绿色荧光蛋白基因的表达量明显高于裸DNA的表达量.经StarburstTM PAMAM dendrimers携带的恶性疟DNA疫苗ES312诱导的抗体反应水平明显高于单纯裸DNA疫苗所诱导的抗体水平.结论StarburstTM PAMAM dendrimers作为一种低抗原性、非病毒的新型DNA载体,能够明显提高裸DNA在体内的表达水平,诱导产生很强的体液免疫反应.但是,StarburstTM PAMAMdendrimers/DNA复合物在各组织器官中的广泛分布,尤其是透过血脑屏障的能力,已超出疫苗载体的适用范围.作为DNA疫苗载体,要对现有StarburstTM PAMAM dendrimers分子的结构做进一步的修饰.     

健脾益肾方对小鼠移植性前胃癌术后复发转移及生存期的影响

目的:观察健脾益肾方对615小鼠移植性前胃癌术后肿瘤局部复发和肺转移的治疗作用及对生存期的影响。方法:以615小鼠前胃癌术后肺转移模型为对象,应用健脾益肾方治疗,并与5-FU化疗组和模型组进行对比,观察术后肺转移和局部复发及生存期。结果:模型组肺转移率为94.4%,复发率为94.44%,健脾益肾方治疗组肺转移率为68.4%,转移抑制率为27.5%,复发率为78.95%,复发瘤抑制率为65.35%;健脾益肾方治疗组荷瘤小鼠术后平均生存期及中位生存期明显延长,生命延长率为100%。结论:健脾益肾方对小鼠移植性前胃癌术后局部肿瘤复发及远处肺转移有一定的抑制作用,并延长生存期。     

腺相关病毒介导Smac和DR5单链抗体表达对抑制肿瘤细胞生长的作用

肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体（tumor necrosis factor—related apoptosis—inducing ligand，TRAIL）是肿瘤坏死因子（TNF）家族成员，可有效地抑制多种肿瘤的形成和生长，诱导肿瘤细胞凋亡，但对绝大多数正常细胞无毒副作用。除了TRAIL配体以外，死亡受体的抗体也和TRAIL一样，能特异性地杀伤肿瘤细胞，其对肿瘤细胞的靶向性比TRAIL更有优越性，具有良好的临床应用前景。     

皮下移植心钠素基因表达细胞胶囊对高血压大鼠的降血压效应

目的　研究微孔胶囊介导的心钠素基因表达细胞的皮下移植对幼龄自发性高血压大鼠(SHR)血压的影响。方法　借助于逆转录病毒载体及其包装细胞系的作用 ,将人心钠素基因的逆转录病毒表达重组体和未携带目的基因的逆转录病毒空载体pLNCX分别导入SHR新生鼠的皮肤成纤维细胞中 ,制备可从孔中排出心钠素多肽的微孔胶囊 ,并将表达和不表达人心钠素的新生鼠皮肤成纤维细胞分别装入不同的胶囊中 ,封闭后分别植于实验组和对照组幼龄SHR(各 1 0只 )的皮下。移植后每周测定大鼠血浆心钠素水平、血压、尿量、尿液钾、钠浓度和体重 ,连续 7周。结果　在逆转录病毒载体的介导下 ,人心钠素基因既可在逆转录病毒载体的包装细胞系中表达 [(5 84± 0 0 7)ng·1 0 - 6 细胞·2 4h 1 ] ,也可在SHR新生鼠的皮肤成纤维细胞中表达 [(1 3 37± 2 36)ng·1 0 - 6 细胞·2 4h 1 ]。皮下移植胶囊后第 1周 ,实验组大鼠血浆中的心钠素浓度 (1 31pg/ml± 8pg/ml)明显高于对照组 (1 0 4pg/ml± 7pg/ml,t=8 62 ,P <0 0 1 )。 7周观察期间 ,两组大鼠的血压均随个体发育而逐渐升高 ,但实验组血压[(1 2 9± 9)～ (1 69± 9)mmHg]却始终明显低于对照组 [(1 4 5± 1 0 )～ (1 81± 9)mmHg ,P <0 0 5～0 0 1 ) ] ,其中第 2周时的血压差异达     

蛋白激酶Cξ亚型基因为SNP功能分析

目的：对中国北方汉族人群2型糖尿病易感基因蛋白激酶Cξ亚型（PRKCZ）基因的5个单核苷酸多态性（single nucletide polymorhism,SNP)标记在疾病发生中的作用进行分析。方法：通过生物信息化比对及报告基因活测定等方法分析PRKCZ基因内5个SNP位点对基因表达的影响。结果：PRKCZ基因中rs427811和rs809912位点两种等基因重组质粒报告基因活性存在明显差异,提示这两个位点可能影响PRKCZ基因表达,结论：PRKCZ基因中两个SNP位点可能通过影响基因的表达水平而在中国人2型糖尿病发生中发挥作用。     

p53反式结合hsp90β基因

目的 探讨hsp90β基因中p53结合位点（＋31／＋60）是否参与p53与hsp90β基因的反式结合,以进一步揭示该位点在p53调节hsp90β基因转录中的作用。方法 将含有p53结合位点的hsp90β基因片段插入质粒pBS-SK,然后将综与突变引物和选择引物一起依次退火和延伸,经过两 轮细菌转化,酶切筛选出突变阳性粒后进行序列分析。采用电泳迁移率变更测定（EMSA）检测突变后基因片段与转染p53表达质粒的Jurkat细胞核抽提物的结合。结果 序列分析证实p53结合。结论 hsp90β基因中p53结合位点的核心序列在p53与hsp90β基因的反式结合中关键作用。     

中国人CAPN10基因单核苷酸多态性的分布及其在北方汉族2型糖尿病人群中的关联分析

目的 检测始发现于墨西哥裔美国人群中的2型糖尿病易感基因CAPN10的苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP)在中国人群中的分布,并探讨其与中国北方汉族人群2型糖尿病的关联关系。方法 对27份取自中国不同民族人群DNA标本进行测序,以确定CAPN10基因中的SNP位点分布;选择其中5个位点,用单碱基延伸（single-extension,SBE)法对156例北方汉族正常人和173例2型糖尿病患者DNA标本进行SNP分型及病例－对照关联分析;对文献报道的易感基因CAPN10中的3个阳性位点进行单体型分析,并对其中1个位点在68个2型糖尿病家系（377例）中进行传递不平衡检验（transmission-disequilibrium test,TDT)和同胞传递不平衡检验（sib transmission-disequilibrium test,STDT）。结果 在所检测的8936bp长度范围内共检出40个SNP,平均约223bp1出现一个SNP,各多态性在基因中呈不均匀分布;中国人CAPN10的SNP与文献报道的墨西哥裔美国人群中该基因多态性存在较大的差异;所选择的5个SNP位点等位基因频率分布在正常人群和2型糖尿病患者间的差异无统计学意义（P＞0.05);上述3个阳性位点单体型频率在两组人群间差异无统计学意义（P＞0.05);TDT和STDT均无统计学意义（P＞0.05)。结论 CAPN10基因SNP具有民族差异;所检测的几个位点可能不是中国北方汉族2型糖尿病的主要易感基因位点。     

检测4种热休克基因表达水平的RT-PCR体系的建立及其应用

目的建立能同时检测人Jurkat细胞中4种热休克基因mRNA表达水平的RT-PCR体系。方法采用基因克隆、基因重组、体外转录、RT-PCR技术,建立能同时检测细胞中4种热休克基因的RT-PCR体系,并将此体系用于检测SW13细胞中热休克基因的表达。结果构建了用于4种热休克基因mRNA检测的内参照质粒,并经体外转录成内参照RNA(i-RNA);用于SW13细胞中结果显示:hsp70、hsp90α呈典型的热诱导表达,hsp60和hsp90β具有较高水平的组成性表达,并且呈不同程度的热诱导表达。结论新构建的RT-PCR体系可以用于检测人Jurkat细胞中4种热休克基因mRNA的表达水平。     

国产乙型肝炎血源疫苗免疫保护持久性及加强免疫△

目的确定国产乙肝血源疫苗低剂量免疫保护持久性及何时需要加强免疫。方法采用放射免疫（ＲＩＡ）法测定新生儿计划免疫７年后的血清学效果和加免实验的抗体反应。结果１０１８名乙肝免疫儿童的保护性抗体阳性率从免后１～２年的７５．０％下降为第７年的４８．２％,而ＨＢｓＡｇ和抗－ＨＢｃ阳性率却均始终处于低水平。１４４名免后６～７年且ＨＢｓＡｇ和抗－ＨＢｃ均阴性儿童,加免前抗－ＨＢｓＧＭＴ为１０．４ｍＩＵ／ｍｌ,抗－ＨＢｓ阳性率５４．９％;加免后１个月和１年,抗－ＨＢｓＧＭＴ分别为１９０．６和２５．３ｍＩＵ／ｍｌ,而抗－ＨＢｓ阳性率则分别为８９．６％和７５．５％。加免后１个月抗－ＨＢｓＧＭＴ和阳性率均显著高于加免前的水平（Ｐ＜０．０１）。但加免后１年时抗－ＨＢｓＧＭＴ又接近加免前水平,而阳性率仍显著高于加免前。６５名加免前抗－ＨＢｓ阴性儿童,加免后１个月有４０名儿童抗－ＨＢｓ≥１００ｍＩＵ／ｍｌ,提示乙肝疫苗免后抗体阴转者可能仍保持免疫记忆。结论国产乙肝血源疫苗低剂量免疫有很好的免疫保护持久性,初免后７年不必加强免疫。     

中国汉族群体17号染色体上5个STR位点多态性分析

高血压的基因定位是当前"复杂性状"疾病研究的重点之一.在众多已知的高血压候选基因中,血管紧张素原基因颇受注目.已有资料提示该基因区域附近可能存在高血压的易感基因.基于此,同时为了配合原发性高血压的全基因组扫描连锁定位分析,笔者对中国群体17号染色体上5个短串联重复序列(STR)位点的多态性进行研究.已知这5个STR位点在17号染色体上的相互关系为pter-30cM-GATA64B04-35cM-GGAA7D11-7cM-GATA25A04-19cM-GATA49C09-26cM-GATA28D11-qter,平均24cM.在连锁分析基因定位中,若被测基因位于17号染色体上,则至少有2个位点显示连锁,从而为更精确的基因定位打下了基础. 1997-11-15收稿