Bcl-x微基因及其突变微基因的构建与鉴定

背景:Bcl-xL/Bcl-xS比值的增高与肿瘤的发生密切相关,其机制尚未阐明.Bcl-x微基因是研究其选择性剪接机制的重要工具.目的:构建人类凋亡相关基因Bcl-x的微基因及其突变微基因,为进行Bcl-x基因选择性剪接方面的研究打下基础.方法:首先采用PCR法从人白血病细胞K562基因组DNA中扩增出Bcl-x基因外显子2及内含子2的5'部分序列片段,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(-)中,然后扩增出Bcl-x基因内含子2的3'端及外显子3部分序列,定向插入上一片段下游,构建成pcDNA3.1(-)-bcl-x微基因,测序鉴定无误后,用pcDNA3.1(-)-bcl-x微基因瞬时转染HL-60,通过RT-PCR方法对其在细胞内表达作进一步鉴定.另外,以pcDNA3.1(-)-bcl-x微基因为模板,利用反向PCR法构建突变微基因pcDNA3.1(-)-bcl-x-CRCE1(M).结果与结论:以人白血病细胞K562基因组DNA为模板,P1和P2为引物,经PCR扩增得约686 bp的目的片段;以P3和P4为引物扩增出约178 bp的目的片段.微基因pcDNA3.1(-)-bcl-x分别经Xba Ⅰ和Eco R Ⅰ双切、Xba Ⅰ和Xho Ⅰ双切鉴定均得到预期的片段,突变微基因pcDNA3.1(-)-bcl-x-CRCE1(M)经EcoR Ⅰ单酶切后,均得到预期片段,测序结果正确,表明成功构建人类凋亡相关基因Bcl-x的微基因及其突变微基因.     

Sysmex XE-2100血液分析仪测定平均血小板体积参考区间的调查

目的对SysmexXE-2100血液分析仪测定正常成年人静脉血平均血小板体积（MPV）的参考区间进行调查,以建立适合本实验室的参考区间。方法参照美国临床和实验室标准协会（CLSI）C-28A2指南,筛选参考个体、采集运送标本、检测标本和分析数据,并对新建立的参考区间进行验证与比较。结果 MPV在正常人群中不服从正态分布,且不同性别组间差异无统计学意义（P〉0.05）,可合并参考区间。合并后的参考区间为8.4～12.9fL。用200名健康体检者的MPV检测结果对新建立参考区间进行验证,在区间外的数据占3%。结论不同性别人群可合并参考区间,合并后建立的参考区间本实验室可接受。     

慢性粒细胞白血病PKR基因的表达及临床意义

目的检测双链RNA依赖性蛋白激酶(double-stranded RNA-dependent protein kinase,PKR)基因在慢性粒细胞白血病(CML)病人及CML细胞株K562细胞中的表达情况。方法分离CML患者慢性期(CP)15例,加速期(AP)11例,急变期(BC)9例及11例正常供者骨髓或外周血单个核细胞,应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测其PKR基因表达情况,并同时检测PKR基因在K562细胞中的表达。结果正常对照组PKR表达阳性率为90.9%,高于加速期的81.8%(P0.05)及急变期的77.8%(P0.05);正常对照组PKR/GAPDH比值为(0.92±0.40)%,高于慢性期的(0.85±0.32)%(P0.05)及加速期的(0.72±0.54)%(P0.05),明显高于急变期的(0.46±0.31)%(P0.01)。K562细胞PKR/GAPDH比值为(0.55±0.13)%。结论 CML细胞及K562细胞株都有一定丰度的蛋白激酶PKR基因表达,为通过激活PKR而靶向诱导CML细胞凋亡奠定理论基础。     

谷氨酸脱羧酶抗体及胰岛细胞抗体对诊断糖尿病的临床意义

目的 探讨谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)和胰岛细胞抗体(ICA)检测在诊断I型糖尿病(IDDM)和2型糖尿病(T2DM)中的临床意义.方法 检测对象为152例IDDM、214例T2DM患者及对照组为50例健康体检者,采用ELISA法检测GADA和ICA,并对其结果进行回顾性分析.结果 ①GADA和ICA检测结果显示IDDM阳性率61.2%(93/152)和42.1%(64/152);T2DM阳性率7.0%(14/214)和4.2%(9/214).1DDM与T2DM及对照组比较,经χ2检验,P＜0.01结果有非常显著性意义.②IDDM组GADA、ICA特异性94.3%和96.6%,敏感性61.2%和42.1%.结论 GADA和ICA作为胰岛β细胞免疫损伤的特异性指标,是区分IDDM和T2DM的重要标志.     

应用ERIC-PCR对多重耐药大肠埃希菌进行基因分型

目的研究ERIC-PCR用于大肠埃希菌基因分型的可靠性.方法102株多重耐药大肠埃希菌采用双纸片扩散法检测ESBLs,用ERIC-PCR进行基因分型.结果102株多重耐药大肠埃希菌可分为六个基因型,主要为I和Ⅱ型,分别为40株和24株.结论ERIC-PCR可用于大肠埃希菌的基因分型.     

全国血流感染细菌耐药监测(BRICS)2021年度报告

目的通过血流感染病原菌谱及其耐药性的监测, 为临床血流感染治疗和合理用药提供参考。方法收集全国血流感染细菌耐药监测联盟(BRICS)成员单位2021年1至12月所有分离自血培养的病原菌, 按美国临床和实验室标准化研究所(CLSI)推荐的稀释法进行抗菌药物敏感性测定。采用WHONET 5.6进行分析统计。结果共收集51家成员单位11 013株病原菌, 其中革兰阳性菌为2 782株(25.3%), 革兰阴性菌8 231株(74.7%)。前10位病原菌为大肠埃希菌4 141株(37.6%)、肺炎克雷伯菌2 076株(18.9%)、金黄色葡萄球菌1 078株(9.8%)、凝固酶阴性葡萄球菌697株(6.3%)、铜绿假单胞菌401株(3.6%)、屎肠球菌397株(3.6%)、鲍曼不动杆菌308株(2.8%)、粪肠球菌296株(2.7%)、阴沟肠杆菌276株(2.5%)和其他克雷伯菌属233株(2.1%)。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌流行率分别为25.3%和76.8%, 未检测到对糖肽类和达托霉素耐药葡萄球菌属;金黄色葡萄球菌对头孢比罗的敏感率>95.0...     

中国成人晕厥患者临床特征分析：一项多中心 研究

目的分析中国成人晕厥患者的临床特征。方法该研究为横断面调查。连续纳入2018年6月25日至2021年3月1日中国19个省市自治区、香港特别行政区37家三甲医院急诊、老年科、心内科门诊或晕厥单元就诊且初步诊断为晕厥的患者, 收集相关临床资料, 并对其临床特征进行分析。结果研究共纳入患者4 950例, 年龄(56.3±16.8)岁, 男性2 604例(52.6%)。最常见的晕厥类型为神经介导性晕厥[2 345(47.4%)], 其次为心原性晕厥[1 085(21.9%)], 而直立性低血压性晕厥则相对少见[311(6.3%)], 此外不明原因晕厥患者有1 155例(23.3%)。与≥65岁的患者比较, <65岁的患者中有诱因者更为多见[2 066(72.4%)比786(27.6%), χ2=136.5, P<0.001]。与其他类型晕厥患者比较, 神经介导性晕厥患者中有晕厥先兆者占比较高[1 972(79.0%)比1 908(73.9%), χ2=17.523, P<0.001]。女性患者中有先兆者占比高于男性[1 837(80.0%)比1 863(73.0%), χ2=...     

新德里金属β-内酰胺酶亚型在碳青霉烯类耐药肠杆菌中分布及分子流行病学研究

目的研究临床分离碳青霉烯类抗菌药物耐药肠杆菌科细菌中新德里金属β-内酰胺酶(NDM)及其亚型的分布及流行特点。方法收集医院2014年1月-2015年1月各种临床标本中分离碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌563株,结合改良Hodge试验、EDTA协同及增效试验与PCR扩增检测blaNDM基因;通过肠杆菌基因间重复一致序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)及多位点序列分型(MLST)分析菌株之间的同源性,采用药物敏感性试验、接合试验、质粒图谱分析、特异性聚合酶链反应(PCR)扩增和序列分析等技术研究细菌新德里金属β-内酰胺酶耐药的分子机制。结果共筛选出45株产NDM菌株,其中肺炎克雷伯菌38株,包括NDM-1型37株、NDM-5型1株,大肠埃希菌7株,均为NDM-7型;所有菌株呈现多药耐药现象,且每株菌均携带多种耐药基因,其中blaCTX-M、blaTEM、blaSHV、qnrB、qnrS、acc(6′)-Ib、rmtB、armA等为最常见共同携带耐药基因;MLST分型显示,产NDM-1肺炎克雷伯菌主要分布于ST11、ST76、ST495、ST37、ST700及ST395型中,产NDM-5肺炎克雷伯菌仅为ST14型;21株产NDM菌株接合试验阳性,其中包括13株NDM-1型、1株NDM-5型及7株NDM-7型,部分质粒之间有着相似图谱,blaNDM均定位于约46kb大小IncX3质粒上。结论医院已出现多种NDM亚型,主要通过IncX3型质粒在肠杆菌科细菌中传播,存在克隆传播现象;此外,NDM亚型的出现也表明NDM或正处于快速进化过程中而导致其广泛传播。     

2021年南昌大学第一附属医院细菌耐药性监测

目的 了解2021年南昌大学第一附属医院临床分离菌的分布及对常用抗菌药物的敏感性。方法 收集该院2021年1月1日—12月31日非重复临床分离株，采用自动化仪器或纸片扩散法按照CHINET统一监测方案进行抗菌药物敏感性试验。按2021年CLSI文件标准判断结果，WHONET 5.6软件进行耐药性分析。结果 共收集非重复临床分离菌9 024株，其中革兰阳性菌2 149株，占23.8%，革兰阴性菌6 875株，占76.2%。甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）和甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）检出率分别为30.8%和68.2%，未发现万古霉素和替加环素耐药株。92.3%MRSA对甲氧苄啶-磺胺甲唑敏感，89.4%MRCNS对利福平敏感。肠球菌属中粪肠球菌对多数抗菌药物的耐药率显著低于屎肠球菌，但对利奈唑胺的耐药率（2.4%）高于屎肠球菌（0.3%），两者中均有少量万古霉素耐药株。肺炎链球菌青霉素耐药株检出率为14.3%。肠杆菌目细菌中，除克雷伯菌属对碳青霉烯类抗生素耐药率高于40%外，其余菌属对碳青霉烯类药物仍较敏感。碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌（CRE）的检出率为28.3%，...