新型冠状病毒Alpha变异株实验室检测研究

目的 对一例新冠肺炎境外输入病例进行实验室检测,并对新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS - CoV - 2）变异株进行鉴定,了解不同样本类型中新冠病毒的检出情况。方法 采集咽拭子、痰液、粪便、尿液和血液多种类型样本共13份,分别提取核酸,用荧光RT - PCR法检测SARS - CoV - 2。使用纳米孔MinION Mk1C测序仪,对阳性咽拭子样本进行实时SARS - CoV - 2靶向扩增全基因组测序,运用artic - ncov2019、DNAstar和Mega等软件对测定序列进行处理和分析。结果 咽拭子、痰液、粪便、血浆和尿沉渣样本中均检出SARS - CoV - 2核酸,咽拭子和血浆样本在发病的前四天均能检出,尿沉渣样本在发病当天能检出。基于纳米孔测序技术,7 h即获得SARS - CoV - 2全基因组数据,经分析显示为新冠病毒Alpha变异株。结论 本例境外输入新冠肺炎确诊病例的病原为SARS - CoV - 2 Alpha变异株,咽拭子、血浆样本和尿沉渣样本在发病早期均能检出SARS - CoV - 2核酸。     

1例男男HIV抗体不确定者的跟踪随访

<正>HIV抗体检测是目前诊断艾滋病最常用的方法,我国HIV抗体常规检测包括筛查试验和确证试验,确证试验常用方法为免疫印迹(WB)。WB的实验结果常常出现"HIV抗体不确定",而不确定的结果不但给受检者带来沉重的心理负担,还会延误患者早期干预和治疗,这需要引起重视。2013年笔者发现1例HIV抗体不确定进展阳性后快速发病,现报道如下。1资料与方法1.1一般资料患者,男、27岁、未婚、大学本科文化程度,     

Bcl-x微基因及其突变微基因的构建与鉴定

背景:Bcl-xL/Bcl-xS比值的增高与肿瘤的发生密切相关,其机制尚未阐明.Bcl-x微基因是研究其选择性剪接机制的重要工具.目的:构建人类凋亡相关基因Bcl-x的微基因及其突变微基因,为进行Bcl-x基因选择性剪接方面的研究打下基础.方法:首先采用PCR法从人白血病细胞K562基因组DNA中扩增出Bcl-x基因外显子2及内含子2的5'部分序列片段,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(-)中,然后扩增出Bcl-x基因内含子2的3'端及外显子3部分序列,定向插入上一片段下游,构建成pcDNA3.1(-)-bcl-x微基因,测序鉴定无误后,用pcDNA3.1(-)-bcl-x微基因瞬时转染HL-60,通过RT-PCR方法对其在细胞内表达作进一步鉴定.另外,以pcDNA3.1(-)-bcl-x微基因为模板,利用反向PCR法构建突变微基因pcDNA3.1(-)-bcl-x-CRCE1(M).结果与结论:以人白血病细胞K562基因组DNA为模板,P1和P2为引物,经PCR扩增得约686 bp的目的片段;以P3和P4为引物扩增出约178 bp的目的片段.微基因pcDNA3.1(-)-bcl-x分别经Xba Ⅰ和Eco R Ⅰ双切、Xba Ⅰ和Xho Ⅰ双切鉴定均得到预期的片段,突变微基因pcDNA3.1(-)-bcl-x-CRCE1(M)经EcoR Ⅰ单酶切后,均得到预期片段,测序结果正确,表明成功构建人类凋亡相关基因Bcl-x的微基因及其突变微基因.     

Sysmex XE-2100血液分析仪测定平均血小板体积参考区间的调查

目的对SysmexXE-2100血液分析仪测定正常成年人静脉血平均血小板体积（MPV）的参考区间进行调查,以建立适合本实验室的参考区间。方法参照美国临床和实验室标准协会（CLSI）C-28A2指南,筛选参考个体、采集运送标本、检测标本和分析数据,并对新建立的参考区间进行验证与比较。结果 MPV在正常人群中不服从正态分布,且不同性别组间差异无统计学意义（P〉0.05）,可合并参考区间。合并后的参考区间为8.4～12.9fL。用200名健康体检者的MPV检测结果对新建立参考区间进行验证,在区间外的数据占3%。结论不同性别人群可合并参考区间,合并后建立的参考区间本实验室可接受。     

Bcl-x微基因及其突变微基因的构建与鉴定

背景：Bcl-xL/Bcl-xS比值的增高与肿瘤的发生密切相关,其机制尚未阐明。Bcl-x微基因是研究其选择性剪接机制的重要工具。 目的：构建人类凋亡相关基因Bcl-x的微基因及其突变微基因,为进行Bcl-x基因选择性剪接方面的研究打下基础。 方法：首先采用PCR法从人白血病细胞K562基因组DNA中扩增出Bcl-x基因外显子2及内含子2的5’部分序列片段,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(-)中,然后扩增出Bcl-x基因内含子2的3’端及外显子3部分序列,定向插入上一片段下游,构建成 pcDNA3.1(-)-bcl-x微基因,测序鉴定无误后,用pcDNA3.1(-)-bcl-x微基因瞬时转染HL-60,通过RT-PCR方法对其在细胞内表达作进一步鉴定。另外,以pcDNA3.1(-)-bcl-x微基因为模板,利用反向PCR法构建突变微基因pcDNA3.1(-)-bcl-x-CRCE1(M)。 结果与结论：以人白血病细胞K562基因组DNA为模板,P1和P2为引物,经PCR扩增得约686 bp的目的片段;以P3和P4为引物扩增出约178 bp的目的片段。微基因pcDNA3.1(-)-bcl-x 分别经Xba Ⅰ和Eco RⅠ双切、Xba Ⅰ和Xho Ⅰ双切鉴定均得到预期的片段,突变微基因 pcDNA3.1(-)-bcl-x-CRCE1(M)经EcoR Ⅰ单酶切后,均得到预期片段,测序结果正确,表明成功构建人类凋亡相关基因Bcl-x的微基因及其突变微基因。     

全血细胞计数对两种血液疾病的鉴别诊断价值

目的探讨全血细胞计数(CBC)对骨髓增生异常综合征(MDS)和再生障碍性贫血(AA)两种血液疾病鉴别诊断的价值。方法收集2009年1月至2010年12月首诊住院的52例MDS、61例AA共113例患者的初诊CBC资料进行统计学分析。结果 MDS和AA患者的贫血程度大部分达到中度及以上(极重度、重度)。CBC参数中平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、网织红细胞绝对值(RET#)、网织红细胞百分比(RET%)、平均血小板体积(MPV)等5项检测结果在MDS与AA患者中的差异有统计学意义(P<0.05),其中AA患者的MCH和MCHC均较MDS患者高,RET#、RET%和MPV均较MDS患者低。结论在临床实践工作中,对于初诊怀疑MDS或AA的中度及以上贫血患者,结合临床症状,CBC中MCH、MCHC和MPV等3项参数对上述两种疾病的早期鉴别诊断具有重要参考价值。     

bcl-x选择性剪接微基因报告方法的建立

目的利用bcl-x微基因(minigene)构建重要顺式作用元件B2G、CRCE2的突变微基因,建立bcl-x微基因报告法并应用于bcl-x选择性剪接机制的研究。方法以构建成功的pcDNA3.1(-)-bcl-x微基因为模板,利用反向PCR的方法,按碱基互补配对原则设计能让顺式元件B2G,CRCE2定点突变的引物,进行PCR反应。PCR反应结束后,用DpnⅠ对模板质粒DNA进行消化,然后使PCR产物发生自身环化反应。将环化产物转化入感受态DH5α,通过筛选并最后利用测序来鉴定所构建突变微基因成功与否。结果测序结果鉴定,所克隆的突变微基因序列碱基无一错误突变。并且在HL-60细胞中,RT-PCR实验表明bcl-x顺式作用元件B2G,CRCE2对bcl-xL/bcl-xS有一定影响,pcDNA3.1(-)-bcl-x-B2G(M)转染后RT-PCR电泳显示bcl-xS几乎消失,pcDNA3.1(-)-bcl-x-CRCE2(M)转染后RT-PCR电泳显示bcl-xL/bcl-xS为1.6。结论成功构建及应用人类凋亡相关基因bcl-x的突变微基因,顺式作用元件B2G缺失使bcl-xS几乎消失,CRCE2突变使bcl...     

慢性粒细胞白血病患者骨髓间充质干细胞的分离培养及成脂分化

目的建立慢性粒细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）患者骨髓间充质干细胞分离纯化培养方法,为慢性粒细胞白血病的后续研究提供实验基础。方法采用密度梯度离心联合贴壁筛选法分离纯化骨髓间充质干细胞（Bone marrowmesenchymal stem cells,BMSCs）,并用地塞米松、牛胰岛素、吲哚美辛、1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤诱导BMSCs向脂肪细胞分化。油红O染色,倒置显微镜下观察结果。结果成功分离得到BMSCs,倒置显微镜下观察到BMSCs呈细而长的梭形生长,或多角形生长。诱导48h后出现脂滴,3周后油红O染色显示80%的BMSCs分化为脂肪细胞。结论可以从CML患者的骨髓中分离纯化出间充质干细胞,在体外诱导的条件下,间充质干细胞能向脂肪细胞分化。     

九江市首例人感染猪链球菌病的病原学特征分析

摘要：目的 通过对九江市 １ 例人感染猪链球菌患者脑脊液标本分离的菌株进行鉴定分型，了解菌株的分子特征。 方法 提 取病例脑脊液标本中 ＤＮＡ，ＰＣＲ 检测 １６Ｓ ｒＲＮＡ、血清 ２ 型猪链球菌特异性荚膜多糖编码基因片段 ｃｐｓ２Ｊ、猪链球菌毒力基因溶 菌酶释放相关蛋白编码基因（ｍｒｐ）、溶血素基因（ｓｌｙ）及细胞外蛋白因子编码基因（ｅｆ），Ｅ?ｔｅｓｔ 条测定 １３ 种药物的敏感性，并进 行多位点序列分型（ＭＬＳＴ）。 结果 病例标本中猪链球菌 １６Ｓ ｒＲＮＡ、ｃｐｓ２Ｊ 和 ３ 种毒力基因（ｍｒｐ、ｓｌｙ、ｅｆ）均为阳性，药敏检测显 示对链霉素、壮观霉素、头孢克肟、庆大霉素、氯霉素、青霉素、利福平、万古霉素、复方磺胺甲噁唑和克林霉素敏感，红霉素、四 环素和阿奇霉素耐药， ＭＬＳＴ 分析结果为 ＳＴ１ 型。 结论 该病例的病原菌是携带 ３ 种毒力基因的 ＳＴ１ 型猪链球菌血清 ２ 型菌 株，具有较强毒力。     

2011-2015年九江市职业暴露人群血清学和环境禽流感病原学监测结果分析

目的 了解九江市2011年至2015年职业暴露人群H5N1禽流感病毒抗体水平和环境中禽流感病毒的感染状况,以期为九江市人感染高致病性禽流感的防控提供技术支持.方法 马红细胞血凝抑制试验(HI)检测禽类养殖人群H5N1血凝素抗体;real-time PCR对环境标本进行A型检测,对A阳性进一步检测H5、H7和H9亚型;结果 1340份职业人群血清H5N1血凝素抗体均为阴性;5个年度中1461份环境标本禽流感病毒核酸检测A型阳性率为30.94%,其中H5、H7、H9阳性率分别为10.47%(153/1461)、0.55%(8/1461)、21.77%(318/1461),A未分型阳性率为3.90%(57/1461).结论 九江市禽类中存在H5、H7、H9亚型感染,存在人感染高致病性禽流感的风险,应加强禽流感病毒感染监测.