稳定表达EGFP-LC3蛋白SH-SY5Y细胞系的构建

目的:建立稳定表达微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)与绿色荧光蛋白(EGFP)形成的融合蛋白(EGFP-LC3)的人神经母细胞瘤株SH-SY5 Y细胞系,验证EGFP-LC3点状聚集物能够实时直观地反映自噬小体和自噬流.方法:以人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)的cDNA为模板,克隆LC3,并连接EGFP绿色荧光蛋白.将EGFP-LC3连接入慢病毒载体GV348中,构建慢病毒表达载体EGFP-LC3-GV348.慢病毒转染人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5 Y细胞),使用3μg/mL嘌呤霉素筛选并处理细胞1月,筛选得到EGFP-LC3稳转系.诱导自噬后,用共聚焦显微镜观察LC3荧光斑点并定量分析.Western blot检测目的蛋白表达情况.结果:经酶切证实,EGFP-LC3-GV348慢病毒表达载体构建正确.在激光共聚焦显微镜下,可以观察到细胞内的绿色荧光EGFP代表的自噬小体,活体染料LysoTracker Red DND-99将溶酶体染成红色荧光,红色荧光与绿色荧光重叠代表自噬溶酶体.无血清诱导自噬后,自噬小体(绿色荧光斑点)明显增加,差异有统计学意义(P<0.001).Western Blot免疫印迹可见EGFP-LC3融合蛋白表达条带.结论:成功构建了稳定表达EGFP-LC3的SH-SY5 Y细胞系,EGFP-LC3荧光斑点可以直观实时反映自噬囊泡,为进一步探讨神经退行性疾病的自噬机制提供了实验基础.     

空肠Dieulafoy病致消化道出血一例报道并文献复习

Dieulafoy病是由于胃肠道供血动脉分支在进入黏膜后未形成毛细血管,而保持恒定管径,在高压力血流的冲击下血管受到损伤造成的疾病。Dieulafoy病是一种少见的血管畸形,主要发生在胃部,可引起消化道尤其是上消化道出血。小肠部位的Dieulafoy病非常罕见,鲜有报道。本研究报道1例经单气囊小肠镜（SBE）诊断为空肠Dieulafoy溃疡的诊治过程并进行文献复习,以期为临床医生诊治不明原因所致的消化道出血提供参考。     

喉癌组织中SEMA3F与NRP2的表达及临床价值

探讨喉癌组织中神经轴突导向因子(SEMA3F)、神经菌毛蛋白2（NRP2）的表达及临床意义。方法 选取2016年3月～2018年3月我院收治的82例喉癌患者为研究对象,用实时定量PCR法检测癌及癌旁组织中SEMA3F、NRP2 mRNA的表达。以癌组织中SEMA3F、NRP2 mRNA表达的平均数为界,将研究对象分别分为SEMA3F高、低表达组及NRP2高、低表达组。分析SEMA3F、NRP2的表达与临床病理特征关系。Pearson线性相关分析SEMA3F与NRP2表达的相关性。Kaplan-Meier生存分析（Log-Rank检验）癌组织不同SEMA3F、NRP2表达与喉癌患者的生存预后差异。多因素COX回归分析影响喉癌患者生存预后的危险因素。结果 与癌旁组织相比,癌组织SEMA3F mRNA表达明显降低,NRP2 mRNA表达明显升高（均P＜0.05）。喉癌组织中SEMA3F与NRP2的表达呈显著负相关（r=-0.561,P＜0.001）。SEMA3F、NRP2 mRNA的表达与肿瘤临床分期及淋巴结转移有关（均P＜0.05）。生存分析结果表明,喉癌组织中SEMA3F低表达、NRP2高表达喉癌患者3年总体生存率明显较差（均P＜0.05）。多因素COX回归分析结果喉癌组织中SEMA3F低表达、NRP2高表达、肿瘤Ⅲ～Ⅳ期及淋巴结转移是喉癌患者不良预后的危险因素。结论 喉癌中SEMA3F表达降低,NRP2表达增高,均与肿瘤分期及淋巴结转移有关,可能是喉癌预后新的标志物。     

基于人口流动的海南省新型冠状病毒肺炎输入风险和防控效果评估

目的对海南省各市县2020年1月10日—3月7日新型冠状病毒肺炎输入风险进行评估,并对2021年春运期间采取“常态化防控”措施效果进行评估。方法收集海南省每日报告输入病例数及30个省份每日报告病例数和百度迁徙指数,计算海南省各市县输入风险指数,对全省及各市县输入风险进行量化评估。分析输入风险指数与输入病例间关系,据此构建“疫情应急围堵”阶段输入病例拟合模型,预测2021年春运期间仍然采取“应急围堵”策略可能的输入病例数,与实际输入病例数相比较,以评估2021年春运期间采取“常态化”疫情防控策略的效果。结果海南省报告输入病例112例,平均输入风险指数为0.98。海口市、三亚市和儋州市输入风险最高,除海口外,各市县输入风险指数1月24日左右达到最大值,以滞后4 d和5 d输入风险指数构建的两阶段广义相加模型对输入病例数的拟合程度最好(R^(2)_(adjust1)=83.50%,R^(2)_(adjust2)=82.00%,MRE=17.61%)。如继续采取“应急围堵”策略,预计2021年春运期间海南省将有10例输入病例,“常态化”防控策略下,实际上海南省无输入病例发生。结论海口和三亚等旅游城市输入风险较高,湖北省和广东省是主要的疫情输入省份,广义相加模型可以较好地对“应急围堵”阶段海南省新冠肺炎输入病例进行拟合。与“应急围堵”策略相比较,2021年春运期间采取的“常态化”疫情防控策略使海南省减少了约10例输入病例。     

高校图书馆阅读推广服务品牌体系建设实践

图书馆阅读推广服务品牌化是高校图书馆优质阅读推广服务品质和形象的象征,是图书馆阅读推广服务价值理念的集中体现。山西医科大学图书馆结合读者的阅读需求、能力、行为特征和本馆阅读推广服务的目标,以“让不爱阅读的人爱上阅读-让不会阅读的人学会阅读-让深度阅读的人分享阅读”为品牌定位,设计了“尚书阅读”品牌3级服务体系,即阅读兴趣培养、阅读能力提升和阅读价值彰显。同时还建立了“资源+空间+人才+平台+管理”5级保障机制以维系品牌可持续发展。该研究结果可为国内高校图书馆创建阅读推广服务品牌提供参考借鉴。     

核酸试纸条快速检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因方法的建立

目的 基于核酸试纸条技术,建立一种快速检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因的方法。 方法 煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,以蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因作为靶基因,采用NCBI primer-BLAST 5.0软件设计特异性引物并通过克隆转化鉴定PCR产物,建立并组装核酸试纸条,评价核酸试纸条的特异性、灵敏度和稳定性。 结果 蜡样芽胞杆菌DNA浓度为300 mg?L^－1,纯度约为1.60。PCR产物阳性条带经切胶回收、克隆转化和测序比对,与GenBank数据库中已登记的entFM相似性为100%。在pH值7.0条件下,每100 μL 胶体金溶液加入3.3 μg链霉亲和素浓度标记,质控线浓度为1.8 g?L^－1,检测线浓度为1 g?L^－1时,硝酸纤维素膜上质控线与检测线均可与PCR产物反应出现清晰的红色条带。按照最适条件组装成核酸试纸条,PCR产物6 μL,样品展开液100 μL,检测10 min后可观察结果。核酸试纸条特异性与电泳结果一致,仅蜡样芽胞杆菌为阳性结果,与金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、大肠埃希菌和沙门氏菌皆无交叉反应,为阴性结果;灵敏度检测,核酸试纸条DNA质量浓度同时降至10^－3 mg?L^－1仍可准确检测,普通PCR电泳结果显示DNA质量浓度同时降至10^－1 mg?L^－1出现目的条带,核酸试纸条比普通PCR灵敏度提高100倍;稳定性检测,核酸试纸条在第6、9和12个月进行检测稳定性一致。 结论 建立的核酸试纸条检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因灵敏度高、特异性强且具有良好稳定性,适用于快速鉴别蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因。     

基于多重PCR技术检测蜡样芽胞杆菌3种毒素基因方法的建立及评价

目的 基于多重PCR技术,建立一种快速检测蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM 3种毒素基因的方法,并评价其效能。 方法 煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,以蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM特异性毒素基因作为靶基因,采用NCBI primer-BLAST 5.0软件设计特异性引物,优化反应体系。建立三重PCR检测体系,并检测其特异性、灵敏度和稳定性。 结果 煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,浓度为227 mg·L^－1,纯度为1.50~1.60。采用多重PCR体系同时检测蜡样芽胞杆菌3种毒素致病基因,于退火温度56 ℃时,蜡样芽胞杆菌基因引物nhe499的扩增片段为499 bp,基因引物cytK191的扩增片段为191 bp,基因引物entFM363的扩增片段为363 bp。PCR体系扩增蜡样芽胞杆菌3种毒素基因后条带清晰明亮,且无非特异性条带,与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌均无扩增,表明蜡样芽胞杆菌基因引物nhe499、cytK191和entFM363特异性强;3种引物在同一反应体系中互不干扰。灵敏度检测,多重PCR体系最低检测限可同时达到10^－1 mg·L^－1;稳定性检测,多重PCR体系自制备起每6个月检测稳定性一致。 结论 建立的多重PCR检测体系对于蜡样芽胞杆菌nhe499、cytK191和entFM363 3种毒素基因灵敏度高、特异性强,检测结果准确稳定,检测体系具有良好稳定性,适用于快速检出蜡样芽胞杆菌的3种不同致病毒素基因。