Shh信号通路与神经管畸形

神经管畸形(Neural Tube Defects,NTDs)是由于胚胎发育过程中神经管闭合失败而引起的一种严重的出生缺陷。人和其他哺乳动物神经管闭合的过程是由不同闭合位点相继闭合完成的。Shh(Sonic hedgehog)信号通路在神经管形成中起重要作用,其通过与特定的受体Ptch(Ptched)/Smo(Smoothened)蛋白复合物相互作用来激活整个信号通路,信号的增强与露脑畸形和脊柱裂相关。本文就Shh信号通路组成及其在NTDs发生过程中的作用和关系作一综述,以期为NTDs发病机制的深入研究及防治提供参考。     

噬菌体展示技术构建人源性抗乙型肝炎表面抗原单链抗体库

[目的]应用噬菌体展示技术构建人源性抗乙型肝炎(乙肝)表面抗原(HBsAg)单链抗体(ScFv)库。[方法]提取经免疫具有乙肝表面抗体的正常人淋巴细胞总RNA,采用反转录、触减PCR扩增人免疫球蛋白G(IgG)重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),用Linker连接肽经重叠PCR将VH和VL基因连接成VH-Linker-VL形式的ScFv基因。将ScFv与pCANTAB-5E载体通过相同的酶切位点连接后,转化大肠杆菌TG1,经M13K07辅助噬菌体拯救,构建成全套人源性抗HBsAg ScFv库。[结果]成功构建了人源性抗HBsAg噬菌体ScFv库。[结论]人源性HBsAg噬菌体ScFv库的构建,为进一步筛选特异性高,具有治疗作用的乙肝抗体奠定基础。     

2型糖尿病一级亲属正常糖耐量者脂联素与瘦素的比值和胰岛素抵抗的相关性研究

目的研究脂联素与瘦素的比值和2型糖尿病一级亲属正常糖耐量者胰岛素抵抗的相关性。方法收集300例2型糖尿病一级亲属正常糖耐量者(男性143名、女性157名),分别在男性、女性中研究空腹胰岛素(FIRI)、空腹血糖(FPG)、脂联素、瘦素和胰岛素抵抗参数[体质量指数(BMI)、腰围(WC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)]的相关性,脂联素与瘦素的比值或胰岛素抵抗指数(HOMA-R)分别和BMI、WC、TG、HDL-C的相关性。同时用多元线性回归分析脂联素与瘦素的比值或HOMA-R与BMI、WC、TG、HDL-C的关系。结果研究对象FIRI、FPG、脂联素、瘦素和BMI、WC、TG、HDL-C的相关性分析观察到脂联素、瘦素较FIRI、FPG与胰岛素抵抗参数(BMI、WC、TG、HDL-C)有更好的相关性。不同性别中HOMA-R或脂联素与瘦素的比值和BMI、WC、TG、HDL-C的相关性分析可以看到在男性HOMA-R和WC、HDL-C有明显的相关性,而脂联素与瘦素的比值与研究中所有胰岛素抵抗参数BMI、WC、TG、HDL-C都存在相关性;在女性,HOMA-R仅与BMI、WC有明显的相关性,而脂联素与瘦素的比值与BMI、WC、TG、HDL-C都有明显的相关性。多元线性回归分析观察到在男性脂联素与瘦素的比值与BMI、WC、TG有明显的相关性,而HOMA-R仅与BMI有相关性,脂联素与瘦素的比值为因变量的模型解释了65%的拟和效果,HOMA-R为因变量的模型解释了37%的拟和效果;女性脂联素和瘦素的比值与WC、TG有明显的相关性,而HOMA-R与BMI、WC、TG、HDL-C都无相关性,脂联素与瘦素的比值为因变量的模型解释了61%的拟和效果,HOMA-R为因变量的模型解释了34%的拟和效果。结论在2型糖尿病一级亲属正常糖耐量者,脂联素与瘦素的比值是较HOMA-R-C预测胰岛素抵抗的一个较好的指标。     

磁标记骨髓间充质干细胞的实验研究

目的探讨不同时间及浓度超顺磁性氧化铁(SPIO)标记大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)标记效率、标记后细胞活力等情况,寻找最佳标记浓度和时间。方法配制含不同浓度SPIO培养基,加入MSCs孵育,于标记后不同时间行铁染色、细胞活力、铁含量测定。结果细胞活力检测显示标记1d和3d时,0μg/ml组与25μg/ml组,0μg/ml组与50μg/ml组,25μg/ml组与50μg/ml组的细胞拒染率差异无统计学意义(P>0.05)。铁含量测定显示标记浓度在50μg/ml,标记时间3d时铁含量最高。结论50μg/ml浓度,标记3d不仅标记效率高对细胞活力无影响,而且细胞内铁含量最多,为最佳标记浓度和时间。     

基因重组Kringle 5蛋白急性经口毒性试验研究

目的检测基因重组Kringle 5蛋白的急性经口毒性,为其临床应用提供医学毒理学依据。方法采用小鼠急性经口毒性试验并采用霍恩法测定半数致死量(LD50)。结果 1周内试验动物未见明显中毒症状及死亡发生,采用霍恩法测定LD50>10g/kg。结论基因重组Kringle 5蛋白属实际无毒级。     

一种超滤管电洗脱装置及应用研究

目的介绍一种自制超滤管电洗脱装置的制作方法,并与其他洗脱方法进行比较。方法以超滤管离心管、滤网和海绵制作成超滤电洗脱装置。待分离的蛋白样品用非变性聚丙酰胺凝胶电泳分离后染色、切胶、碎胶后,分别用上述自制超滤电洗脱装置、被动洗脱法和半透膜电洗脱法回收凝胶中的蛋白样品,再通过超滤离心进行脱盐浓缩。最后用Bradford法测定样品浓度,并比较三种洗脱方法的洗脱效率。结果超滤管电洗脱、被动洗脱和半透膜电洗脱分成0.5μg和5μg两组,以三种电洗脱法的蛋白回收率依次为:0.5μg组82%、44%、46%;5μg组77%、58.6%、63.6%。结论用超滤管自制的电洗脱装置制作简单方便,其回收效率比被动扩散法和半透膜电洗脱法高,特别适用于小量蛋白样品的回收。     

从人血凝块中提取基因组DNA

目的从人血凝块中提取基因组DNA。方法室温自然解冻,机械磨碎,高盐、高EDTA提取液处理,消化液消化,酚氯仿抽提。结果用改良酚氯仿法从人血凝块中成功提取基因组DNA,提取的DNA浓度为:(32±10)mg/L,且光吸收比值A260/A280>1.8。结论用改良法提取的基因组DNA的总量较高,提取效率高,PCR扩增效果好,可很好的用于血凝块基因组DNA的提取。     

不同浓度NK4对多种肿瘤细胞侵袭能力的影响

目的研究不同浓度NK4因子对多种肿瘤细胞侵袭能力的影响。方法采用基底膜侵袭实验观察不同浓度NK4因子对人结肠癌、乳腺癌等多种肿瘤细胞侵袭能力的影响。结果在浓度为10μg/ml时,NK4因子对人结肠癌细胞、乳腺癌细胞、小鼠黑色素瘤细胞和人卵巢癌细胞侵袭重组基底膜的抑制率为56.4%,56.3%,56.1%和45.0%。结论NK4因子具有抑制人结肠癌、乳腺癌等多种肿瘤细胞侵袭的能力。     

β-淀粉样蛋白对体外培养的神经干细胞作用研究

目的：观察β-淀粉样蛋白(Aβ)对体外培养的大鼠神经干细胞的作用。方法：取E13 d的Wistar胚胎大鼠脑组织，体外进行培养、传代、鉴定后，加入β-淀粉样蛋白，利用台盼兰拒染法细胞计数及MTT法观察细胞增殖及细胞活力，利用流式细胞术观察凋亡程度，同时观察加入β-淀粉样蛋白后，分化状态神经干细胞（加入10％胎牛血清）的变化。结果：当Aβ浓度大于25μmol/L时，能明显抑制神经干细胞的增殖及活力，同时引起神经干细胞的明显凋亡。而在12.5 μmol/L时就能抑制分化状态神经干细胞突起的延伸。结论：Aβ抑制神经干细胞的增殖分化并可致神经干细胞凋亡，可能是Alzheimer’s病的发病原因之一。     

蚯蚓与固有免疫

动物的免疫系统包括固有免疫和适应性免疫.固有免疫是指动物机体与生具有的抵御微生物或者外来异物侵袭的能力,包括组织屏障作用、细胞免疫作用和体液免疫作用.固有免疫细胞识别病原体表面的模式分子而活化,经特殊信号转导途径产生免疫效应.蚯蚓属无脊椎动物,其免疫系统缺乏免疫球蛋白,适应性免疫不发达,主要依赖固有免疫机制来抵御微生物的感染.