分离地龙DNA裂解蛋白过程中组织破碎法、pH及温度的选择

目的观察分离过程中三种处理方法制备的地龙组织匀浆及pH、温度对地龙DNA裂解蛋白（EWDNase）的影响。方法采用糖溶解法、机械法和超声破碎法制备地龙组织匀浆;不同温度、pH条件下进行EWDNase的粗提取。测定地龙组织匀浆及不同温度、pH条件下制备的粗提取液中EWDNase活性和蛋白含量,计算其比活性。结果三种方法获得地龙组织匀浆中EWDNase比活性大小无显著性差异（P〉0．05）;EWDNase耐热（75℃,30min仍有活性）,pH3．4—5．4具有较高比活性。结论机械法因其操作简便、经济实用、误差小、重复性高可以用来处理地龙组织制备组织匀浆。提取EWDNase过程中宜采用酸性缓冲体系和较高温度（65—75℃）的热变性条件。     

Kringle5蛋白生物学作用及机制

Kringle 5是血浆纤维蛋白溶酶原的第五个饼环区结构域,在体外具有抑制内皮细胞增殖和迁移、在体内具有抑制血管新生和肿瘤生长的生物活性,在实体瘤、糖尿病视网膜病变、风湿性关节炎等疾病的治疗中有广泛的应用前景.     

骨髓间充质干细胞研究进展

骨髓间充质干细胞是干细胞领域的研究热点之一。虽然近几年来有关间充质干细胞的研究已取得了很大进展,但仍有很多问题有待进一步解决。主要对间充质干细胞的异质性、分化与融合的问题、修复组织的机制、免疫性及研究方法等问题进行了综述。     

地龙祛痰组份的纯化效率及其溶菌作用

目的了解地龙祛痰组份的纯化效率,检测其对不同类型核酸的降解作用、溶菌酶活性以及EDTA对其溶菌活性的影响。方法酸、碱变性沉淀及丙酮沉淀法制备祛痰组份粗提物,Bradford法检测蛋白含量,Yasuda法检测比活力,紫外光吸收法、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳检测对不同类型核酸的降解作用,比浊法检测地龙祛痰组份对溶壁微球菌的降解作用,将所得数据用多因素方差分析,比较EDTA对酶比活力的影响。结果 1000g鲜地龙纯化出4.12g粗提物,比活力纯化倍数为69。对环状、线状双链和单链DNA均有降解作用。对RNA无降解作用。含和不含EDTA的反应体系中,溶菌酶样比活力分别为400U/mg和410U/mg;EDTA对溶菌酶样作用没有差异(P0.05)。结论地龙祛痰组份纯化后蛋白含量减少,脱氧核糖核酸酶样活性提高,对不同类型的DNA具有降解作用,不能降RNA,具有溶菌酶样活性。EDTA不影响其溶菌酶样活性。     

超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞的体外标准化实验

背景:超顺磁性氧化铁颗粒标记成像可在体观察标记细胞移植后情况,但结合临床细胞治疗剂量,其标记浓度及标记时间对细胞标记率、标记活性及标记后成像效果的综合影响还需进一步分析.目的:筛选超顺磁性氧化铁体外标记大鼠骨髓间充质干细胞的标准化剂量,拟为体内成像提供最佳标记"浓度-时间".设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2008-02/10在山西医科大学完成.材料:清洁级Wistar大鼠10只,由山西医科大学动物实验中心提供.Resovist中含超顺磁性氧化铁铁颗粒28 g/L,为德国Schering公司产品.方法:全骨髓法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞.取Resovist,分别配制含终浓度为0,25,50,75,100,150 mg/L超顺磁性氧化铁的培养基,加入P3代骨髓间充质干细胞中进行孵育标记.主要观察指标:普鲁士蓝法检测细胞标记率,锥虫蓝拒染法检测标记细胞活性,观察标记细胞体外磁共振成像情况.结果:细胞标记率达100%,随着标记时间的延长,胞质内蓝染颗粒逐渐减少.标记1 d和3 d时,与0 mg/L超顺磁性氧化铁组比较,25,50 mg/L组锥虫蓝拒染率无明显差异(F=0.28～3.15,P0.05);与25 mg/L超顺磁性氧化铁组比较,50 mg/L组锥虫蓝拒染率无明显差异(F=0.28～0.79,P0.05).体外磁共振成像示标记3 d时,标记浓度为50 mg/L组的T2WI及T2·WI信号降低最明显.结论:超顺磁性氧化铁"50 mg/L-3 d"体外标记效率高,对细胞活性无影响,且磁共振成像信号降低最明显,为最适"浓度-时间"组合.     

Shh信号通路与神经管畸形

神经管畸形(Neural Tube Defects,NTDs)是由于胚胎发育过程中神经管闭合失败而引起的一种严重的出生缺陷。人和其他哺乳动物神经管闭合的过程是由不同闭合位点相继闭合完成的。Shh(Sonic hedgehog)信号通路在神经管形成中起重要作用,其通过与特定的受体Ptch(Ptched)/Smo(Smoothened)蛋白复合物相互作用来激活整个信号通路,信号的增强与露脑畸形和脊柱裂相关。本文就Shh信号通路组成及其在NTDs发生过程中的作用和关系作一综述,以期为NTDs发病机制的深入研究及防治提供参考。     

高分子量脂联素在EA.hy926血管内皮细胞中对前炎症因子介导的NF-κB信号通路及其下游因子的影响

目的本研究通过促炎因子肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1对血管内皮细胞株EA.hy926的作用,来探讨高分子量脂联素对EA.hy926中NF-κB活性及其下游因子的影响,以阐明高分子量脂联素在血管内皮细胞炎症反应中的作用。方法构建NF-κB荧光素酶报告质粒,并稳定转染血管内皮细胞株EA.hy926。在TNF-α和IL-1作用之前,用不同浓度(0~8μg/ml)高分子量脂联素处理转染后的血管内皮细胞EA.hy926。NF-κB的活性通过荧光酶报告分析法测定。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定细胞培养上清液中TNF-α、IL-1及IL-6的浓度。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(real time-PCR)法、蛋白印迹法(Western blot)在m RNA和蛋白水平上检测血管内皮细胞的细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的含量。结果研究表明高分子量脂联素抑制促炎因子TNF-α和IL-1介导的NF-κB活性及其下游因子的表达。结论高分子量脂联素通过抑制NF-κB的活性及其下游因子的表达,抑制前炎症因子介导的炎症反应,从而保护血管内皮细胞。     

2型糖尿病一级亲属正常糖耐量者脂联素与瘦素的比值和胰岛素抵抗的相关性研究

目的研究脂联素与瘦素的比值和2型糖尿病一级亲属正常糖耐量者胰岛素抵抗的相关性。方法收集300例2型糖尿病一级亲属正常糖耐量者(男性143名、女性157名),分别在男性、女性中研究空腹胰岛素(FIRI)、空腹血糖(FPG)、脂联素、瘦素和胰岛素抵抗参数[体质量指数(BMI)、腰围(WC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)]的相关性,脂联素与瘦素的比值或胰岛素抵抗指数(HOMA-R)分别和BMI、WC、TG、HDL-C的相关性。同时用多元线性回归分析脂联素与瘦素的比值或HOMA-R与BMI、WC、TG、HDL-C的关系。结果研究对象FIRI、FPG、脂联素、瘦素和BMI、WC、TG、HDL-C的相关性分析观察到脂联素、瘦素较FIRI、FPG与胰岛素抵抗参数(BMI、WC、TG、HDL-C)有更好的相关性。不同性别中HOMA-R或脂联素与瘦素的比值和BMI、WC、TG、HDL-C的相关性分析可以看到在男性HOMA-R和WC、HDL-C有明显的相关性,而脂联素与瘦素的比值与研究中所有胰岛素抵抗参数BMI、WC、TG、HDL-C都存在相关性;在女性,HOMA-R仅与BMI、WC有明显的相关性,而脂联素与瘦素的比值与BMI、WC、TG、HDL-C都有明显的相关性。多元线性回归分析观察到在男性脂联素与瘦素的比值与BMI、WC、TG有明显的相关性,而HOMA-R仅与BMI有相关性,脂联素与瘦素的比值为因变量的模型解释了65%的拟和效果,HOMA-R为因变量的模型解释了37%的拟和效果;女性脂联素和瘦素的比值与WC、TG有明显的相关性,而HOMA-R与BMI、WC、TG、HDL-C都无相关性,脂联素与瘦素的比值为因变量的模型解释了61%的拟和效果,HOMA-R为因变量的模型解释了34%的拟和效果。结论在2型糖尿病一级亲属正常糖耐量者,脂联素与瘦素的比值是较HOMA-R-C预测胰岛素抵抗的一个较好的指标。     

磁标记骨髓间充质干细胞的实验研究

目的探讨不同时间及浓度超顺磁性氧化铁(SPIO)标记大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)标记效率、标记后细胞活力等情况,寻找最佳标记浓度和时间。方法配制含不同浓度SPIO培养基,加入MSCs孵育,于标记后不同时间行铁染色、细胞活力、铁含量测定。结果细胞活力检测显示标记1d和3d时,0μg/ml组与25μg/ml组,0μg/ml组与50μg/ml组,25μg/ml组与50μg/ml组的细胞拒染率差异无统计学意义(P>0.05)。铁含量测定显示标记浓度在50μg/ml,标记时间3d时铁含量最高。结论50μg/ml浓度,标记3d不仅标记效率高对细胞活力无影响,而且细胞内铁含量最多,为最佳标记浓度和时间。