蚯蚓脱氧核糖核酸酶纯化及酶学性质

目的:从蚯蚓组织中纯化得到一种脱氧核糖核酸酶(取名为蚯蚓脱氧核糖核酸酶,简称EDNase)并研究其酶学性质.方法:采用丙酮沉淀、离子交换层析、高效液相层析、SDS-PAGE电泳,毛细管等点聚焦电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等方法.结果:经证实这种纯化方案的纯化倍数是137,酶得率为45.6%.EDNase的相对分子质量约为63 000.Mg2+,Mn2+和ca2+对酶活性有较强的抑制作用,而Na+则轻微的提高酶的活性.在pH 4.4～5.2的范围内EDNase酶活性稳定,其最适pH值为4.8.该酶的最适温度为37℃,在40℃范围内酶具有较高的稳定性.EDNase的等电点为6.20.在以小牛胸腺DNA为底物的条件下,酶的Km为1.52 g/L,Vmax为4.89 mg/(mL·min).该酶可有效降解超螺旋质粒DNA,线状λ-噬菌体DNA和细菌染色体DNA,对RNA未见任何降解作用.结论:这种酶具有独特的酶学性质,不同于以往所知的脱氧核糖核酸酶.     

氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ上游顺序功能和特性和CAT检测

首次构建了一系列含有不同长度氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ（ＣＰＳ１）上游ＤＮＡ顺序的ＰＫＣＰＳｘ－ＣＡＴ表达质粒，并通过ＣＡＴ检测观察了ＣＰＳⅠ调控顺序的功能及特性。结果表明，ＣＰＳⅠ上海顺序具有高度组织特异性基因表达调控作用；－１４２－－３８ｂｐ上游顺序与特异调腔有密切关系，是维持ＣＰＳⅠ转录必不可少的顺序；－１７００－１６１ｂｐ顺序中含有增强ＣＰＳⅠ启动子转录作用的顺序。地塞米松和促分化剂硫杂脯氨酸对肝     

自噬调节基因AMBRA1在神经管发育中的作用及机制研究进展

神经管畸形(NTDs)是在胚胎发育过程中,由于神经管闭合缺陷导致的先天性畸形。在神经管闭合过程中,自噬是必不可少的。许多研究表明,自噬/苄氯素1调节因子1基因(AMBRA1)编码的蛋白质在自噬调节过程中发挥着重要作用。AMBRA1基因缺失导致胚胎发育早期自噬损伤,发生严重NTDs表型。本文从自噬角度对AMBRA1基因在神经管发育过程中的作用及其机制进行综述,以期为进一步阐明NTDs的发生机制提供新思路。     

猴头提取物对小鼠肠蠕动和排便影响实验研究

本文以昆明种小鼠为研究对象,通过测定猴头提取物对正常水鼠小肠蠕动和排便指标,观察得到:猴头提取物对正常小鼠的肠蠕动有促进作用,实验组与对照组差异有显著性;猴头提取物对小鼠的体重无明显影响。实验组与对照组体重差异无显著性;猴头提取物对小鼠排便时间、排便频率和排便量影响的测定结果表明,猴头提取物可缩短便秘小鼠的首次排便时间,增加便秘小鼠的排便次数和排便重量。说明猴头提取物对小鼠的肠道运动功能有正向的调节作用。     

硫氧还蛋白在急性髓系白血病中的表达及其抑制剂体外对急性髓系白血病细胞促凋亡作用的初步研究

 目的　探讨急性髓系白血病（AML）细胞中硫氧还蛋白（Trx）的表达及与AML患者临床特点及预后的相关性,观察Trx抑制剂二酰胺体外诱导白血病细胞凋亡的作用,为临床治疗AML提供一定的理论依据。方法　选择20例AML患者和健康人,抽取骨髓,分离单个核细胞。用Western blot法分析单个核细胞中Trx的表达,应用四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）法检测不同浓度二酰胺对单个核细胞增殖的影响,应用形态学、琼脂糖凝胶电泳观察二酰胺对细胞凋亡的诱导作用。结果　AML患者Trx的表达率为75 %（15／20）,在健康人中不表达。Trx与患者的白细胞计数显著相关（χ2＝9.375,P＜0.05）。MTT法检测显示二酰胺对细胞具有细胞毒作用,且呈时间和剂量依赖性,24、48 和72 h的IC50值分别为98.26、47.53、8.34 mg／ml。形态学观察二酰胺作用于AML细胞后可见凋亡小体,琼脂糖凝胶电泳观察可见典型的DNA“梯”条带出现。结论　AML细胞Trx含量明显高于健康人,二酰胺干预后AML细胞生长受抑甚至发生凋亡,其可能成为AML治疗的新药。     

以重组人类CD40配体为主的细胞因子体外诱导急性髓系白血病完全缓解患者及健康人外周血单个核细胞来源的树突状细胞形态及表型分析

 【摘要】　目的　以健康人AB血清与以重组人类CD40配体（rhCD40L）为主的细胞因子体外诱导急性髓系白血病完全缓解（AML-CR）患者及健康人外周血的单个核细胞,并分析其形态及表型差异。方法　以健康人AB血清为基础的培养体系中加入GM-CSF、rhIL-4、rhCD40L等细胞因子,诱导单个核细胞分化形成树突状细胞（DC）。瑞特-吉姆萨染色观察形态;流式细胞术鉴定表型;MTT法检测DC对淋巴细胞抗原刺激能力;ELISA法检测DC培养上清IL-12的分泌。结果　培养7 d后的细胞具有典型的MoDC形态,并上调表达MoDC特征性表面分子CD83及共刺激分子CD40、CD80、CD86,AML-CR组与健康人组相比差异无统计学意义（均P＞0.05）,但加rhCD40L组较未加rhCD40L组间差异有统计学意义（均P＜0.05）。培养后的MoDC可较强地刺激同种自体淋巴细胞增殖,AML-CR组与健康人组间刺激淋巴细胞增殖作用的差异无统计学意义（P＞0.05）,但加rhCD40L组较未加rhCD40L组间差异均有统计学意义（均P＜0.05）。培养的MoDC自培养第5天始即有IL-12的分泌,AML-CR组与健康人组相比IL-12分泌水平差异无统计学意义（P＞0.05）,加rhCD40L组与未加rhCD40L组间差异有统计学意义（P＜0.05）。结论　以rhCD40L为主的细胞因子体外可诱导AML-CR患者及健康人外周血DC生成,两者在形态及表型上无明显差异,DC可刺激白血病特异毒性T细胞增殖,尤以由rhCD40L诱导的DC作用明显。     

抗衰抗疲劳胶囊抗疲劳作用调查研究

随着社会的发展、竞争的日趋激烈以及生活节奏的加快 ,人们所承受的工作、生活压力也越来越大 ,由此而引发的一种“亚健康状态”———疲劳在人群中的发生率也呈现出不断上升的趋势[1] 。为了观察抗衰抗疲劳胶囊抗疲劳作用的效果 ,探索改善人群疲劳症状的适宜手段和有效途径 ,我们进行了本次干预实验。1　对象和方法1 1　研究对象1 1 1　一般情况 :采取整群抽样的方法在太原地区抽取山西医科大学、太原市第三十中学、山西省职业病防治所共12 3人 (现无心脏病的明确诊断 ) ,年龄分布在 35～ 6 0岁。1 1 2　分组 :由设计者随机分为干预组和对…     

插入突变法构建人肝细胞生长因子β链可表达基因序列

目的 通过插入突变法,转录前加工、修饰人肝细胞生长因子β基因,构建人肝细胞生长因子β基因的可表达全序列,以使肝细胞生长因子β基因可在细胞内单独表达,用于研究肝细胞生长因子β基因在生物体内的生物学作用。方法 从人肝细胞中提取总ＲＮＡ,反转录成为含肝细胞生长因子β结构基因区序列的ｃＤＮＡ,在此ｃＤＮＡ序列结构基因区前插入翻译起始密码子、ＳＤ序列、ＳＤ序列间隔等调节序列和限制性内切酶接头;ＰＣＲ扩增β基     

凝胶滞留电泳法测定大鼠肝组织细胞核NF—kB结合活性

应用大鼠肝组织细胞核蛋白提取物与特异NF－kB基因探针序列结合,经凝胶滞留电泳分析其结合能力。方法操作简便易行、重复性好。该方法的建立,为进一步研究核转录因子活性及其调控基因的表达,提供了一种可行的方法。     

鱿鱼肝脏中核酸的纯化工艺研究

采用离子交换层析,一步分离纯化鱿鱼肝脏中的核酸初抽提样品,层析条件填料为DEAE-纤维素,色谱柱8cm×1cm,流速1ml/min,260nm紫外检测,收集以0.6mol/LNaCl(pH7.4Tris-Cl缓冲液)为洗脱相时的洗脱液,得率为85%～89%,经透析、低压冷冻干燥,可获得纯度为87%～90%的核酸产品,可用于医药及食品工业.